慢性心力衰竭大鼠心肌组织中TGF-β_1和CTGF的动态表达

【摘要】慢性心力衰竭(chronicheartfailure,CHF)为各种心脏疾病的终末期表现,是导致心脏病患者死亡重要原因。近年来,随着我国高血压病和冠心病发病率的持续上升,CHF的发病率随之上升,己成为严重威胁人们健康的重要疾病。心肌纤维化是CHF的重要病理基础,因此防治心肌纤维化已成为近年来研究的热点。在心肌纤维化的发生和发展过程中,一系列促炎因子发挥着重要的作用,其中转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)近年来引起了人们的关注,本研究采用肾上腹主动脉缩窄术建立CHF心肌纤维化模型,探讨TGF-β1和CTGF在心肌纤维化发生、发展过程中的作用。目的：采用肾上腹主动脉缩窄方法建立CHF心肌纤维化的动物模型。采用免疫组织化学染色、RT-PCR方法,从细胞水平和分子水平观察TGF-β1和CTGF在压力负荷型心力衰竭大鼠心肌组织中的动态表达,探讨TGF-β1和CTGF与心肌纤维化发生、发展的关系。方法：1清洁级雄性Wistar大鼠42只,随机抽取8只作为假手术组,其余大鼠全部采用肾上腹主动脉缩窄术制作CHF模型。以左室舒张末压(leftventricularenddiastolicpressure,LVEDP)≥15mmHg作为成模标准。待模型建立成功后,将剩余大鼠随机分为3组,即心衰1d、心衰7d、心衰14d组,每组8只。假手术组只做分离不做结扎。2各组大鼠到达观察终点时,采用多导电生理记录仪检测血流动力学参数LVEDP及左室内压上升、下降最大速率(leftventricularpressureriseandfall,±dp/dtmax),取左心室并计算左心室质量指数(theleftventricularmassindex,LVMI)。3采用苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色法观察各组大鼠左心室心肌组织病理学改变,并检测左心室心肌胶原容积分数(collagenvolumefraction,CVF)。4采用透射电镜观察各组大鼠左心室心肌组织超微结构。5采用SP免疫组织化学染色法检测各组大鼠左心室心肌组织TGF-β1和CTGF蛋白的表达。6采用RT-PCR法检测各组大鼠左心室心肌组织TGF-β1和CTGFmRNA的表达。结果：1各组大鼠血流动力学参数：心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠LVEDP分别为(15.56±1.69)mmHg、(17.87±2.19)mmHg和(20.03±1.93)mmHg,明显高于假手术组(P<0.01)。心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠±dp/dtmax分别为(4673.62±206.63)mmHg/s,(3339.74±238.65)mmHg/s；(4360.26±239.65)mmHg/s,(3091.85±245.24)mmHg/s和(4120.59±215.13)mnHg/s,(2860.20±199.73)mnHg/s,与假手术组大鼠比较明显降低(P<0.01),并且随着心衰时间的延长,大鼠心功能逐渐恶化。2各组大鼠左心室心肌组织病理学改变HE染色：假手术组大鼠心肌细胞排列整齐,形态正常,细胞质纹理清晰；心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠随着心衰时间的延长,逐渐出现心肌细胞肥大,心肌纤维排列紊乱,呈现波浪状,甚至断裂。Masson染色：假手术组大鼠心肌无明显胶原沉积,心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠随着心衰时间的延长,心肌胶原沉积逐渐增多。3各组大鼠LVMI和CVF：心衰1d组、心衰7d组、心衰14d组大鼠LVMI(?)CVF分别为(2.53±0.17)‰,(15.62±1.83)%；(2.86±0.28)‰,(22.31±2.34)%；(3.15±0.26)‰,(25.12±2.96)%。与假手术组大鼠比较明显升高(P<0.01),且随着心衰时间的延长逐渐升高。4各组大鼠左心室心肌细胞超微结构观察假手术组大鼠心肌肌原纤维排列整齐,Z带清晰可见,线粒体结构清晰完整,无肿胀及空泡样变,心肌间质极少有胶原纤维沉积。心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠心肌组织逐渐出现肌原纤维排列紊乱,肌节错位,Z带部分消失。线粒体肿胀、嵴不同程度溶解断裂,心肌间质有较多的胶原纤维沉积。5各组大鼠左心室心肌组织TGF-β1的表达TGF-β1蛋白免疫阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于心肌细胞的细胞膜和细胞间质,以细胞间质为主。与假手术组大鼠比较,心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠心肌组织TGF-β1蛋白及mRNA的表达均明显升高(P<0.01),且随着心衰时间的延长,表达逐渐增强,心衰各组间比较有明显差异(P<0.01,P<0.05)。6各组大鼠左心室心肌组织CTGF的表达CTGF蛋白免疫阳性产物呈棕黄色颗粒状,位于心肌细胞的细胞质和细胞间质,以细胞质为主。与假手术组大鼠比较,心衰1d组、心衰7d组和心衰14d组大鼠心肌组织CTGF蛋白及mRNA的表达均明显升高(P<0.01,P<0.05),且随着心衰时间的延长,表达逐渐增强,心衰各组间比较有明显差异(P<0.01)。结论：1通过肾上腹主动脉缩窄术可成功复制CHF心肌纤维化的模型,并且与人类心肌纤维化病理过程相似。2CHF大鼠心肌纤维化时,心肌组织中TGF-β1和CTGF表达上调,并且其水平的高低与心力衰竭的严重程度密切相关。
【作者】谢亚芹；
【导师】李秀华；
【作者基本信息】承德医学院，病理与病理生理学，2011，硕士
【关键词】慢性心力衰竭；心肌纤维化；转化生长因子-β1；结缔组织生长因子；细胞外基质；

【参考文献】
[1]陈一红.环糊精功能化石墨烯修饰电极在抗癌药物和硝基酚检测中的应用[D].山西大学,2012.
[2]杨晨.长春市人口老龄化及其与经济发展的协调性研究[D].吉林大学,人口资源与环境经济学,2014,硕士.
[3]AL-JAOUFIMOHAMMEDAHMEDAHMED,刘云.关于无线传感器网络安全关键技术的分析[J].通讯世界,2014,21:19-20.
[4]兰岚.基于TLR4/NF-κB信号通路探讨电针治疗脑缺血再灌注损伤的抗炎机制[D].福建中医药大学,针灸推拿学（专业学位）,2013,硕士.
[5]程荣辉.基于SWOT分析的南昌市羽毛球健身中心经营管理研究[D].南昌大学,体育人文社会学,2014,硕士.
[6]马杰.基于模板的汽车覆盖件斜楔机构变型设计的研究[D].华中科技大学,材料加工工程,2013,硕士.
[7]邓自立.ARMA信号的自校正去卷平滑器[J].自动化学报,1989,06:523-530.
[8]高静.小麦苗期根的分枝规律与解剖结构[D].中国农业大学,土壤学,2004,硕士.
[9]张道猛.私募股权投资基金组织形式法律问题研究[D].贵州民族大学,法律,2013,硕士.
[10]周春来.控制电器智能设计方法研究[D].河北工业大学,2006.
[11]张少卿.MB15镁合金的相组成及其微观形态[J].金属学报.1989(05)
[12]王慧芳.原发性中枢神经系统淋巴瘤MRI表现、临床预后与p27因子表达的相关性研究[D].兰州大学,影像医学与核医学（专业学位）,2013,硕士.
[13]曾鹏.信息时代的展览建筑及展示空间设计理论研究[D].天津大学,建筑设计及其理论,2004,硕士.
[14]庞娟.中小企业年金计划模式的适用性分析[D].西南交通大学,社会保障,2014,硕士.
[15]王艳菲.聚丙烯腈凝胶化转变及凝胶性质的研究[D].宁波大学,物理化学,2014,硕士.
[16]王文杰.带大阻力环的火箭弹气动力特性研究[D].中北大学,弹箭飞行与控制工程,2014,硕士.
[17]王亚波.《庄子》认识论思想的默会之维[D].华东师范大学,中国哲学,2013,硕士.
[18]岳雪涛.多形态羟基磷灰石粉体、涂层的制备及表征[D].山东大学,2014.
[19]徐常练.三参量速度分析技术的发展[J].石油地球物理勘探,1995,03:430-440+442.
[20]袁金霞.当代大学生生活价值观研究[D].南京财经大学,思想政治教育,2012,硕士.
[21]张志明.中国服务贸易的服务业就业效应研究[D].辽宁大学,国际贸易学,2014,博士.
[22]李众,杨一栋.一种新的基于二维云模型不确定性推理的智能控制器[J].控制与决策,2005,08:866-872+877.
[23]聂立莎.区域创业环境与科技型企业创业绩效的关系研究[D].安徽大学,企业管理,2013,硕士.
[24]孙奇珍,蔡泽祥,李爱民,李力,吴科成.500kV电网短路电流超标机理及限制措施适应性[J].电力系统自动化,2009,21:92-96.
[25]张莹.中等职业学校学分制下的教学管理改革研究[D].浙江工业大学,2009.
[26]林刚.基于ONT的WIFI接入功能的实现及优化[D].哈尔滨工业大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[27]吴小楠.大连港竞争力评价及发展策略研究[D].大连海事大学,工商管理,2012,硕士.
[28]方一鸣,刘福才,王洪斌,郭存良.型材辊压生产线计算机监控系统和人机界面的设计[J].冶金自动化,1999,01:47-49.
[29]斯日古冷.高中《文化生活》课程中渗透蒙古族传统文化教育研究[D].内蒙古师范大学,学科教学（专业学位）,2012,硕士.
[30]张颖.基因表达谱分析miR-431小鼠耳聋的机制及小耳畸形患儿听觉发育研究[D].北京协和医学院,耳鼻咽喉科学,2014,博士.
[31]杜越群.血清褪黑素在帕金森病发生发展中变化的研究[D].福建医科大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[32]章琎.基于相移光量化的全光模数转换技术研究[D].北京交通大学,电磁场与微波技术,2013,硕士.
[33]郭钰英.核仁素、Ki-67、CCR7在口腔鳞癌与癌前病变中的表达及意义[D].桂林医学院,病理学与病理生理学,2012,硕士.
[34]崔丽娟.数理评价磁力twinblock矫治后审美平面的改变[D].河北科技大学,应用数学,2012,硕士.
[35]林微.ABS树脂的制备及性能研究[D].长春工业大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[36]杨佳.不同浓度艾烟长期干预对大鼠心血管疾病易感因子影响的实验研究[D].北京中医药大学,针灸推拿学,2013,硕士.
[37]张勇.“日本型”外交决策的类型特征[D].中国社会科学院研究生院,国际政治,2003,硕士.
[38]陈敏敏.伤痕·苦难·革命[D].淮北师范大学,文艺学,2014,硕士.
[39]马燕.土语原生度假酒店导视系统标识设计研究[D].河北大学,艺术（专业学位）,2014,硕士.
[40]俞路曦.大学人文社科研究水平评价体系研究[D].浙江工业大学,2009.
[41]叶聪杰.海上风电机组传动系统的早期故障诊断研究[D].上海电力学院,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[42]曾亚山.税收执法风险管理研究[D].云南财经大学,公共管理,2014,硕士.
[43]周辉.露天矿时空数据模型理论研究[D].辽宁工程技术大学,地图制图学与地理信息工程,2012,硕士.
[44]柳键,罗春林.利润-CVaR准则下的二级供应链定价与订货策略研究[J].控制与决策,2010,01:130-132+136.
[45]ZHUQiao,CUIJia-Rui,HUGuang-Da.针对随机控制系统数值解的均方指数输入状态稳定性(英文)[J].自动化学报,2013,08:1360-1365.
[46]唐海萍.全员合作教学在农村中学体育教学中的应用研究[D].山东体育学院,体育人文社会学,2012,硕士.
[47]郭盛虎.晚期NSCLC患者一线化疗疗效分析及预测[D].河北医科大学,肿瘤学,2013,硕士.
[48]杨永强.基于油液监测技术的磨损状态评定系统的研究[D].内蒙古工业大学,机械工程,2013,硕士.
[49]沈毓赟.消费信贷对中国居民消费的影响研究[D].湖南师范大学,产业经济学,2014,硕士.
[50]李海铭.论陈凯歌电影对文学作品的改编[D].山东大学,比较文学与世界文学,2013,硕士.