黄连素对人结肠癌细胞凋亡和迁移作用的研究

【摘要】结肠癌是一种常见的消化道恶性肿瘤,严重威胁着人们的健康。结肠癌可以通过手术予以切除治疗,但治疗后多半会出现复发和转移,因此寻求到有效的抗癌药物成为结肠癌治疗的关键问题之一。黄连素(Berberine)又称小檗碱,是从黄连、黄柏等中药中提取的一种生物碱,临床上长期用于胃肠消化道疾病的治疗。研究发现,黄连素具有广泛的药理作用,近年来,它在抗肿瘤方而所具有的药理价值也逐渐被人们所关注和认可,且因其价格低廉、毒副作用小、药源丰富等优点而广受喜爱。研究证实,黄连素对多种肿瘤细胞都具有抑制作用,但其作用机制至今仍未研究透彻。本文以人结肠癌细胞系KM12C、KM12SM、KM12L4A为研究对象,以黄连素为药物处理方式,来探索黄连素对人结肠癌细胞凋亡和迁移作用的影响及其分子机制。在凋亡方面,我们首先采用MTT法测定人结肠癌细胞系KM12C、KM12SM、KM12L4A的增殖存活率,结果表明黄连素对它们均具有明显的存活抑制作用,且具有剂量依赖关系。其次,我们采用Hoechst33342染色法观测这三种人结肠癌细胞系的形态学变化,用AnnexinV/PI双染法检测它们的细胞凋亡率,并用Rhodaminel23染色经流式细胞仪检测三者的线粒体膜电位变化,来探讨经黄连素对人结肠癌细胞的凋亡作用。结果证实,黄连素可以有效诱导三种人结肠癌细胞系发生凋亡,且同样具有剂量依赖关系。同时,我们还采用WesternBlot对KM12C细胞进行蛋白分析,来阐明黄连素诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机制。结果发现,黄连素可以降低Bcl-2、Caspase-3,-9和]PARP的表达,使PARP出现剪切化激活,并提高Bax和AIF的表达,使AIF和Cytc从线粒体被释放。此外,黄连素还能上调Fas和p53,并下调p65、Ras、p38、Akt和β-catenin等蛋白的表达。最后,我们建立裸鼠模型,研究并证实了黄连素可以在裸鼠体内抑制KM12C细胞的增殖生长。在迁移方面,我们采用细胞划痕实验、免疫荧光技术和蛋白免疫印迹法,证明黄连素可以有效抑制人结肠癌细胞系的迁移作用,并影响Exo70在KM12C细胞内的表达定位,且这种抑制作用可能与下调迁移相关蛋白MMP-2,-9和Exo70有关。
【作者】陈彬彬；
【导师】胡天惠；
【作者基本信息】厦门大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】结肠癌；黄连素；凋亡和迁移；

【参考文献】
[1]周洋.某危桥维修工程中拆卸施工监控及数值分析研究[D].湖北工业大学,建筑与土木工程（专业学位）,2013,硕士.
[2]李文艳.董志塬地下水系统动态及水资源合理利用[D].兰州大学,水文学及水资源,2013,硕士.
[3]祁文智,王凡,王辉,施钦,逄磊,卞兆勇.Pd-Fe/石墨烯多功能催化阴极降解4-氯酚机制研究[J].环境科学,2015,06:2168-2174.
[4]杨娟.平衡与失衡：舟山海岛文化遗产生态保护研究[D].浙江海洋学院,农业推广（专业学位）,2013,硕士.
[5]曹东.现代田园城市视角下城市新区空间结构研究[D].长安大学,城市规划与设计,2013,硕士.
[6]强生利.基于“业主+监理+EPC”模式的长输管道建设研究[D].西安科技大学,建筑与土木工程,2014,硕士.
[7]马延超.我国中小民营企业技术人才流失及对策研究[D].山东师范大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[8]姜皎洁,刘文涛,黄灵阁,何素芹,朱诚身.无线射频识别技术用导电油墨的研究[J].材料导报,2015,01:121-126+136.
[9]赵智龙.对河北省青少年女子铅球运动员体能特征的研究[D].河北师范大学,体育教学,2014,硕士.
[10]曾宪锋.关于我省普通高中后勤社会化的理性思考[D].江西师范大学,教育管理,2003,硕士.
[11]胡志超,顾仁宏.论种子清选设备国产化[J].中国农机化.2002(03)
[12]贺怡芳.人教版初中英语教材中幽默的语篇意义分析[D].华中师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[13]梁奎端.卫星地球站的雷害及防护[J].邮电设计技术.2001(03)
[14]宫向.小型无人机活塞式发动机调试检测系统设计[D].合肥工业大学,动力机械及工程,2013,硕士.
[15]化柏林.触摸赛博空间[J].中国计算机用户,2004,49:51-52.
[16]张伟波.船舶3D分舱设计技术研究[D].大连海事大学,船舶与海洋结构物设计制造,2013,硕士.
[17]胡名刚.基于真实结构特征的RNA二级结构预测方法研究[D].吉林大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[18]陈科师.FS供电企业电力营销信息系统项目后评价研究[D].华南理工大学,项目管理,2012,硕士.
[19]蔡磊.相移结构光三维扫描和人体特征提取的研究[D].湖南师范大学,电路与系统,2013,硕士.
[20]郭秀云.新中国开国将帅人才地理分布研究[D].河北师范大学,中国近现代史,2014,硕士.
[21]何超.民生银行客户信息管理系统[D].大连理工大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[22]汪洋.《论语》泰文译本对比研究：1990-2011[D].北京外国语大学,亚非语言文学,2013,硕士.
[23]齐晨,杨修亮,李晓燕,李江涛,黄磊,徐志南.重组大肠杆菌高效可溶性表达芳基硫磺基转移酶的研究[J].药物生物技术,2014,05:385-388.
[24]周影辉.可逆逻辑电路综合与故障检测方法研究[D].南京航空航天大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[25]陈新亮.C银行现金和重要空白凭证集中配送管理的多目标决策研究[D].兰州大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[26]李建雄,方一鸣,石胜利.具有输入饱和的轧机液压伺服系统鲁棒动态输出反馈控制[J].控制与决策,2013,02:211-216.
[27]赵毅.图形—背景理论视角下的广告双关语分析[D].沈阳师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[28]张仕山,庄镇泉,狄晓龙.一种基于移动智能体的网络安全模型系统[J].计算机工程与应用,2003,14:153-156+176.
[29]刘晓鹏,邢长征.基于WEB文本数据挖掘的研究[J].计算机与数字工程,2005,09:75-79.
[30]徐舰波.导叶可调式液力变矩器在液力行星齿轮中的应用研究[D].哈尔滨工业大学,动力工程,2014,硕士.
[31]崔馨宇.车载Ad Hoc网络路由协议及优化算法研究[D].吉林大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[32]黄运波.石灰湿式烟气脱硫工艺系统运行参数研究与优化[D].太原理工大学,环境工程,2004,硕士.
[33]田中群,李亚栋.前言[J].中国科学:化学,2012,11:1501-1503.
[34]包艳静.基于概念整合理论的公益广告语言的隐喻研究[D].沈阳师范大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[35]彭婵娟.中国当代油画语言的符号化表达[D].华中师范大学,美术学,2014,硕士.
[36]钱璟.张爱玲、苏青散文意象论[D].湖北大学,中国现当代文学,2011,硕士.
[37]张国志.二氧化钛/碳纳米复合材料的制备及其光催化性能研究[D].兰州大学,材料工程,2014,硕士.
[38]胡建民.PBO新单体合成研究及其树脂制备新方法探索[D].浙江工业大学,化学工艺,2004,硕士.
[39]曾伟.奈韦拉平及其吡啶并二氮杂卓类似物的合成研究[D].大连理工大学,应用化学,2004,硕士.
[40]李世传.金银花叶抑菌活性成分的提取与筛选[D].江西农业大学,食品加工与安全（专业学位）,2013,硕士.
[41]郑光泽.化学探究教学模式的探究[D].东北师范大学,教育,2003,硕士.
[42]卢志刚,孙卜,刘照拯,杨丽君.基于改进离散多目标BCC算法的配电网灾后抢修策略[J].电力系统自动化,2011,11:55-59.
[43]谢小荣,刘世宇,张树卿,郭锡玖,李英伟.附加励磁阻尼控制抑制多模态SSR的机理及其关键技术[J].电力系统自动化,2007,21:10-14.
[44]方德岩.城市社区服务的发展研究[D].大连理工大学,工商管理,2003,硕士.
[45]郭塨.长沙市卫生资源配置与卫生服务利用研究[D].中南大学,公共管理学,2013,博士.
[46]岳彩鹏.山东天业恒基股份有限公司东营业务竞争战略研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[47]汪聚涛.中国行政咨询系统研究[D].华中师范大学,情报学,2003,硕士.
[48]赵明.新农村建设背景下乡镇政府公共服务能力提升研究[D].湖南师范大学,行政管理,2013,硕士.
[49]徐美玲.我国公务员考录制度的优化完善研究[D].青岛大学,行政管理,2013,硕士.
[50]张琼.基于紫外光刻的滚动压印模具的研制[D].中国科学技术大学,机械电子工程,2014,硕士.