尼洛替尼与三氧化二砷对慢性粒细胞白血病K562细胞诱导分化作用及机制研究

【摘要】实验目的观察不同浓度的三氧化二砷(ATO)、尼洛替尼(AMN107)对慢粒急变K562细胞株诱导分化作用及两药联合在诱导分化是否有协同作用,初步探讨两药诱导分化作用的机制,为慢性粒细胞白血病急变的临床治疗提供实验依据。实验方法以慢粒急变期K562细胞为研究对象,先用不同浓度三氧化二砷(0.1,0.5,1.0,2.0,5.0μmol/L)作用于K562细胞,MTT法检测K562细胞生长情况；联苯胺染色检测血红蛋白含量变化；流式细胞术检测K562细胞表面巨核系分化抗原CD41、红系分化抗原GPA表达量；RT-PCR检测造血分化因子BTG1、TAL1mRNA表达量及Westernblot检测BTG1、TAL1蛋白表达量。然后再分别用0.005μmol/L尼洛替尼与1μmol/L三氧化二砷单独或联合作用K562细胞24、48、72h,MTT法检测K562细胞生长抑制率及在抑制增殖方面有无协同作用；瑞氏吉姆萨染色观察细胞分化形态；联苯胺染色检测血红蛋白含量,观察是否向红系分化；流式细胞术检测K562细胞表面巨核系分化抗原CD41、红系分化抗原GPA、粒系分化抗原CDl1b、单核系分化抗原CD14表达量；RT-PCR检测造血分化因子BTG1、TAL1mRNA表达量及Westernblot检测BTG1、TAL1蛋白表达量。实验结果MTT及形态学结果显示各浓度组ATO对K562细胞的增殖都有抑制作用,且呈现一定浓度和时间依赖性,以浓度为5μmol/L的ATO于72h最为显著。经1μmol/LATO诱导后,联苯胺阳性细胞率由对照组2.87%±0.63%升高至17.63%±1.18%(P<0.01),其红系分化特异标志GPA由对照组的3.39%±0.84%增加至68.46%±3.67%(P<0.01),巨核系CD41表达升高,但没有GPA明显,同时伴随着分化相关转录因子TAL1、BTG1mRNA及蛋白表达量升高。与对照组相比,单药ATO组、AMN107组及联用组对K562细胞的增殖都有抑制作用(P<0.01),且与时间及剂量呈正相关。瑞氏吉姆萨染色显示ATO、AMN107单用组细胞形态发生明显变化,细胞体积缩小,大小不均,核浆比例减小,细胞趋向早、中期成熟阶段分化；联用组不仅表现出早期红系分化细胞,还可以观察到小部分细胞向粒系分化。联苯胺染色及流式细胞术结果表明单药及联用组均可诱导K562细胞向红系分化,ATO组没有AMN107组效果明显,且两药联用对细胞向巨核系及粒系分化有较强协同作用,Western-blot、PCR结果提示,与对照组相比,单用组及联用组TAL1、BTG1蛋白及mRNA表达量均有所上调。实验结论ATO及AMN107对K562细胞有明显增长抑制作用,两者具有协同作用；ATO、AMN107均可单独诱导K562细胞红系分化,但ATO的诱导效应不如AMN107明显,对巨核系及粒系分化效果不明显；两药联用时红系分化效应较AMN107单独作用略微减弱,但对巨核系及粒系有较强的协同效应。
【作者】吕菲菲；
【导师】王玮；
【作者基本信息】厦门大学，内科学，2014，硕士
【关键词】三氧化二砷；尼洛替尼；K562细胞；分化；

【参考文献】
[1]证券时报记者向南.石墨烯贵过黄金15倍生产不易炒作先行[N].证券时报,2010-10-15B02.
[2]余晓.浙江省电子政务项目建设委托代理实证研究[D].浙江大学,管理科学与工程,2003,硕士.
[3]田甜.汉语惯用语的文化要义及其在对外汉语教学中的应用[D].苏州大学,汉语国际教育（专业学位）,2014,硕士.
[4]王红康,姜怡喆,李贝贝.超细化/复合化锡基负极纳米材料在锂离子电池上的研究进展[J].储能科学与技术,2014,05:437-444.
[5]薛定宇,任兴权.线性连续系统的仿真与解析算法[J].自动化学报,1992,06:694-702.
[6]刘越琪,王良模,罗剑良,王永强.转向器齿条校直机数据采集和处理系统[J].农业机械学报.2004(03)
[7]李丰园.《碧岩录》研究[D].上海师范大学,古典文献学,2004,硕士.
[8]镇万源.血栓通注射液对老年髋部围手术期相关血流变学影响的观察[D].云南中医学院,中西医结合临床（专业学位）,2012,硕士.
[9]郭翠英.基于GPU的大规模深海海浪泡沫的实时模拟研究[D].燕山大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[10]田均平.YM-Ⅰ型高炉喷吹烟煤安全监测装置[J].冶金自动化,1997,01:29-32.
[11]许应楠.面向知识推荐服务的消费者在线购物决策研究[D].南京理工大学,2012.
[12]王唐燕.现代汉语助词“着”的多角度研究[D].浙江大学,2009.
[13]徐飞.正在发展的虚拟影像[D].中央美术学院,摄影,2013,硕士.
[14]李刚,孔凡志,王慧强,周浩东,王扬渝.多硬度拼接淬硬Cr12MoV铣削力的有限元分析[J].机械设计与研究,2014,05:131-135.
[15]顾浩.中国金融企业信息化之路探讨[J].上海金融,2002,09:54-55.
[16]周明磊,游小杰,王琛琛,王剑,李强.电流谐波最小PWM开关角的计算及谐波特性分析[J].中国电机工程学报,2014,15:2362-2370.
[17]纪小明.高效视频编码系统研究与硬件实现[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[18]张楠.“以人为本”视野下的生态文明建设研究[D].中共陕西省委党校,马克思主义哲学,2014,硕士.
[19]邱继芳.薄膜太阳电池吸收层材料Cu（In，Al）（S，Se）_2的制备及性能研究[D].内蒙古大学,物理电子学,2014,硕士.
[20]范爱萍.数据挖掘在CRM中的应用研究[J].软件导刊,2005,15:20-23.
[21]张新良,谭永红.基于输入空间扩张的动态迟滞神经网络模型[J].自动化学报,2009,03:319-323.
[22]郁伟.小口径多管转管火炮膛口流场数值模拟与分析[D].南京理工大学,2012.
[23]米旭光.抑制TSP50表达的中药化合物筛选及其抗肿瘤作用及机制研究[D].东北师范大学,细胞生物学,2014,博士.
[24]李白.磁性高分子纳米复合材料负载Au（III）、Au（0）催化剂的合成及其应用研究[D].兰州大学,高分子化学与物理,2013,硕士.
[25]张书丰.地铁盾构隧道施工期地表沉降监测研究[D].河海大学,2004.
[26]刘涛.我国公司强制清算法律制度研究[D].西南大学,民商法学,2013,硕士.
[27]章建军.流形上的优化算法及其在图像拼接与盲源分离中的应用[D].南京航空航天大学,通信与信息系统,2013,硕士.
[28]薛媛.基于CAN总线的图像压缩系统FPGA的设计与实现[D].西安电子科技大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[29]林颖.内隐学习机制及其个体差异的研究——发展的视角[D].华东师范大学,2003.
[30]石亦思.基于人格特质的网上银行使用意愿影响因素研究[D].浙江大学,2010.
[31]王全海.过冷水动态结晶的超声机理研究[D].河南科技大学,工程热物理,2014,硕士.
[32]黄远航.TGFβ1抑制miR-141上调HIPK2促进肾小管上皮细胞转分化[D].南方医科大学,免疫学,2014,博士.
[33]张艳.阳光体育运动背景下吉林大学学生群体活动开展现状与分析[D].吉林大学,体育,2014,硕士.
[34]许博.胃折叠手术对非肥胖2型糖尿病大鼠糖尿病治疗作用的研究[D].复旦大学,临床医学（专业学位）,2013,博士.
[35]王选伦,姚伟鸿,解兴波,林进干,甘运亨.PP/POE/GNP导电复合材料的制备与性能研究[J].工程塑料应用,2013,06:38-42.
[36]于建华,方正茂,李幼铭,杨长春,刘洪.一种用于背景速度估计的新全局优化算法[J].石油地球物理勘探,1998,05:573-582+706.
[37]陈青青.锚杆-SMW工法桩复合基坑支护技术及其应用研究[D].华侨大学,结构工程,2013,硕士.
[38]屠立,屠航.知识管理系统的框架及技术研究[J].情报科学,2005,01:111-113.
[39]谢一乐,崔鹏程.无泄漏釜用磁力驱动装置的开发[J].石油化工设备.1989(01)
[40]郝丽萍.绵萆薢提取物调血脂作用及其薯蓣皂苷元的含量测定方法研究[D].青岛大学,药理学,2013,硕士.
[41]延续.金刚智宗教实践探析[D].西北大学,宗教学,2013,硕士.
[42]齐红.基于形式概念分析的知识发现方法研究[D].吉林大学,2005.
[43]袁玉华,叶志弘,黄丽敏,周艳,周丽萍,庄一渝.导尿管相关性尿路感染的目标性监测与干预研究[J].中华护理杂志,2014,08:997-1000.
[44]彭福兵.大跨度公铁两用钢桁梁斜拉桥地震响应分析[D].西南交通大学,建筑与土木工程,2014,硕士.
[45]陈福全,侯永峰,刘毓氚.考虑桩土侧移的被动桩中土拱效应数值分析[J].岩土力学,2007,07:1333-1337.
[46]林晨.中国输入型通货膨胀的传导途径分析[D].天津财经大学,金融学,2012,硕士.
[47]朱腾.基于可信计数器的拜占庭容错技术研究[D].华中师范大学,计算机技术,2014,硕士.
[48]王飞.牡蛎包纳米虫体外培养及多克隆抗体制备研究[D].内蒙古农业大学,预防兽医学,2013,硕士.
[49]曹玉泉,王主恩.异步电机变频调速技术(六)[J].油田地面工程.1991(06)
[50]郝彦文.我国刑事司法鉴定人出庭作证制度研究[D].内蒙古大学,法律,2013,硕士.