猪气道上皮细胞形态学及其干细胞特异性抗原筛选的研究

【摘要】肺脏是人体与外界进行气体交换的唯一器官,而肺脏气道粘膜上皮经常暴露于微生物、过敏原及污染源之中,易被侵蚀而造成损伤,同时肺脏上皮本身也在不断进行着自我修复来维持肺脏功能的正常。在这一损伤修复过程中,气道上皮干/先祖细胞(Airwayepithelialstem/progenitorcell,EpiSPC)起着至关重要的作用。由此可见,分离鉴定EpiSPC的特性对了解气道EpiSPC功能以及肺脏疾病的治疗有着非常重要的意义。然而,由于临床人肺脏组织来源困难,这极大地限制了其肺脏组织形态学与干细胞生物学特性等相关研究；而在常用的动物模型中,猪不但来源广泛,而且它的肺脏无论在大小、解剖结构、生理特性、还是在细胞生物学特征上都与人类肺脏极为相近,是人类肺脏的最佳研究模型之一。因此,我们对猪气道上皮细胞形态组成学及干细胞特异性抗原标记的筛选进行了初步的研究,这对分离鉴定猪肺脏气道上皮干细胞／先祖细胞亚群及其生物学特性研究有重要的意义,并为进一步研究人类肺脏干细胞生物学特性及其在维持肺脏动态平衡、肺脏疾病发生机制和肺脏组织工程等方面的研究奠定了一定的理论基础。通过试验获得以下结果：1.猪气道上皮细胞形态学的研究：本试验采用组织化学(HE、PAS)和免疫组织化学(IHC)等方法对猪吸道的不同区段(气管、支气管和细支气管)的主要上皮细胞类型进行了形态学观察,并对其组成比例进行了统计分析。结果表明,猪气道上皮主要由纤毛细胞、基底细胞、克拉拉细胞和杯状细胞等细胞组成,并且在不同区段其上皮细胞的类型与组成比例也有一定的差异；因此猪的这种气道上皮细胞形态组成学特征与小鼠肺脏比更接近于人类,由此可见,猪肺脏在气道上皮细胞组成上比小鼠肺脏更适合于人类肺脏疾病的研究。2.猪EpiSPC特异性表面标记物的筛选：试验中采用IFC染色,利用CD117、Sca-1、Sox2、CD49f和SSEA-1等10种相关EpiSPC抗体来鉴定猪气管EpiSPC特异性表面抗原的表达情况。结果表明,在猪气道组织冰冻切片中的染色中没有检测到所选用的10种相关EpiSPC抗体的阳性细胞,而在猪气道上皮细胞爬片中的IFC染色中观察到表达CD117和CD49f的阳性细胞数较多。通过免疫荧光共染试验结果发现具有共同表达CD117和Keratin14或CD49f和Keratin14的阳性细胞。这说明,在正常的生理条件下,猪气道EpiSPC的数量极少,不易被检测。但经外界刺激(酶学消化)后,猪气道EpiSPC数量增加易被检测。因此,CD49f和CD117是猪气道上皮干细胞分选标记之一,基底细胞是猪气道上皮干细胞的候选干细胞亚群。这为人气道干细胞的分离和鉴定奠定了一定的基础。
【作者】杨佳丽；
【导师】刘晓明；李勇；
【作者基本信息】宁夏大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】猪；肺脏；形态学；气道上皮细胞；上皮干细胞；免疫组化；免疫荧光；

【参考文献】
[1]陆月芸,郑清,倪淑华,张增敏.锡凝固点的复现[J].宇航计测技术.1993(06)
[2]张龙.Aβ_(1-42)寡聚体对PC-12细胞胰岛素PI3K/PKB信号转导通路的影响[D].遵义医学院,生理学,2013,硕士.
[3]胡昕婴.瑞舒伐他汀促大鼠急性心梗后心肌组织修复的实验研究[D].复旦大学,内科学,2011,博士.
[4]杨鹏.刑事简易程序研究[D].吉林大学,法律,2014,硕士.
[5]陈雪慧.汉维谚语中比喻修辞对比研究[D].新疆师范大学,中国少数民族语言文学,2013,硕士.
[6]董国伟.基于FPGA的高速数据采集系统的设计与开发[D].东北大学,控制理论与控制工程,2010,硕士.
[7]唐飞翔,孟祥铠,李纪云,彭旭东.基于质量守恒的LaserFace液体润滑机械密封数值分析[J].化工学报,2013,10:3694-3700.
[8]夏薇.接入网环境动力监控系统的设计与实现[D].华东师范大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[9]石欢.石墨烯增强硅纳米材料力学性能的分子动力学模拟[D].哈尔滨工业大学,2012.
[10]苗保河,李向东,刘波,何启平,朱陶,刘兴坦,朱启玉,乔广法,樊廷安,陈成君,董庆裕,余松烈.波浪冠层栽培模式对高油大豆叶片活性氧代谢和膜脂过氧化的影响[J].植物生态学报,2008,03:673-680.
[11]李忠伟.西安市容管理市场化改革研究[D].长安大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[12]李腾.银行信用卡信息服务优化问题研究[D].河北大学,图书情报,2014,硕士.
[13]李波.锰掺杂锗酸锌和金属氧化物纳米材料的合成及性质研究[D].东北师范大学,物理化学,2012,硕士.
[14]高秀艳.酚酸类化合物对大鼠离体胸主动脉环舒张作用的相关研究[D].河北医科大学,营养与食品卫生学,2013,硕士.
[15]陈良中.《今文尚书》文学艺术研究[D].安徽大学,中国古代文学,2004,硕士.
[16]赵磊.基层国税机关新录用公务员职业生涯规划管理问题与对策研究[D].中国海洋大学,公共管理,2011,硕士.
[17]高勇.赵俪生史学研究[D].华东师范大学,史学理论及史学史,2013,硕士.
[18]王龙飞.基于Petri网的城轨列车设备故障应急处置流程优化方法的研究[D].北京交通大学,2014.
[19]路淑涵.义务教育新课程改革中的利益冲突分析[D].首都师范大学,教育经济与管理,2013,硕士.
[20]蔡焱钢.基于滑模观测器的异步电机矢量控制系统的研究[D].浙江工业大学,2008.
[21]霍利娟.现砌加强肋生态复合墙体压弯承载力研究[D].西安建筑科技大学,结构工程,2013,硕士.
[22]郑晓猛.碳纤维含量以及形态对树脂基摩擦材料部分性能的影响[D].吉林大学,材料加工工程,2013,硕士.
[23]王婧.我国非营利组织参与居家养老研究[D].大连海事大学,公共管理,2014,硕士.
[24]白连平.方钢管混凝土框架—薄钢板剪力墙的受力性能研究[D].西安建筑科技大学,防灾减灾工程及防护工程,2013,硕士.
[25]陈玉玲.莉芙敏治疗肾阴虚围绝经期综合征的疗效及与骨吸收水平的关系[D].福建中医药大学,中西医结合临床（专业学位）,2014,硕士.
[26]胡明慧.论建筑物区分所有权之共有权[D].安徽大学,法律,2012,硕士.
[27]苏晶晶.碌曲县药用植物资源及保护对策研究[D].西北师范大学,植物学,2013,硕士.
[28]张宇献,刘民,王建辉.具有执行器饱和特性的不确定系统预测控制器设计[J].控制与决策,2009,02:217-220+225.
[29]应诗圣.台湾液化气汽车上路的最新消息[J].城市公用事业.1998(03)
[30]梁骏.芯片设计的验证技术和验证流程研究[D].浙江大学,通信与信息系统,2004,硕士.
[31]刘兵.活动侧墙棚车结构优化研究[D].西南交通大学,车辆工程,2003,硕士.
[32]车冠宇.GATA-4和GFRα-1在小鼠生精上皮中的表达[D].吉林大学,基础兽医学,2013,硕士.
[33]卢绍宗.北仑河口保护区湿地生物多样性管理GIS系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[34]姜南.基于SVM的垃圾邮件在线过滤新方法[D].吉林大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[35]李荣兴.超声成像自适应波束形成方法研究[D].哈尔滨工业大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[36]高会晓.纤维和纳米炭黑对GFRP筋与混凝土粘结性能影响[D].大连理工大学,结构工程,2013,硕士.
[37]陈妍.王礼锡文学创作与文学著作研究[D].西南大学,中国现当代文学,2013,硕士.
[38]刘丽丽.我国农民工住房问题研究[D].山西财经大学,社会保障,2013,硕士.
[39]孟瑞.基于虚拟仪器的气力输送试验装置测控系统设计与研究[D].华侨大学,电工理论与新技术,2013,硕士.
[40]梁畅.基于多金属氧酸盐的三维无机—有机超分子化合物[D].东北师范大学,无机化学,2012,硕士.
[41]张国宝.公安执法应遵循程序正义的理念[D].吉林大学,公共管理,2004,硕士.
[42]姜礼立.“随意”和“随便”的对比研究[D].华中师范大学,语言学及应用语言,2014,硕士.
[43]仇春涓.相关序与保费定价原理[D].华东师范大学,概率论与数理统计,2004,硕士.
[44]张昳丽.我国信托公司效率及其影响因素研究[D].首都经济贸易大学,金融学,2014,硕士.
[45]刘电飞.基于叶序排布抛光垫的抛光机理的若干研究[D].沈阳理工大学,机械制造及其自动化,2013,硕士.
[46]刘强.高压开关柜电能质量在线监测装置研制[D].江苏科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[47]席培宇.甘草HMGR、SQS1和β-AS基因CNVs体系的构建[D].北京中医药大学,微生物与生化药学,2013,硕士.
[48]王柳.女性高层次医护人员工作家庭冲突与主观幸福感的关系研究[D].吉林大学,企业管理,2013,硕士.
[49]徐护朝.麦冬类植物遗传变异的分子标记研究和表观遗传初探[D].华侨大学,生物化学与分子生物学,2014,硕士.
[50]许菲.西部跨越式发展中的人力资源开发研究[D].中央民族大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2004,硕士.