面向芍药双苷生物制备的芍药愈伤组织的诱导及培养条件优化研究

【摘要】芍药双苷是从芍药根中提取获得的一种生理活性物质,它能通过多种途径抑制自身免疫反应,具有抗炎、止痛、保肝和抑制自身免疫等多种药理作用,对类风湿性关节炎具有确切疗效。为了提高芍药双苷的制备效率,本文采用植物组织培养技术,开展了芍药愈伤组织的诱导和培养研究,并采用单因素实验和多种统计优化方法对愈伤组织的培养基及培养条件进行了考察和优化,促进了愈伤组织的生长,提高了愈伤组织中芍药双苷的积累水平,初步显示出通过植物细胞工程手段制备芍药双苷的可行性和优越性。通过优选愈伤组织的诱导条件,成功诱导多种芍药外植体(根、茎、叶、叶柄)产生愈伤组织,并考察了诱导条件和外植体类型对愈伤组织诱导效率的影响,确定了最佳的愈伤组织诱导条件。同时建立了愈伤组织中芍药双苷的提取、检测和鉴定方法,确定了最适的反相HPLC色谱分析条件：SinoChromODS-BP(4.6mmX250mm,5μm);流动相为乙腈/0.05%磷酸二氢钾水溶液(11/89,V/V)；流速为1.0ml/min;进样量为20μl；检测波长为230nm。检测发现,愈伤组织(培养40天)中芍药双苷的含量高于天然植株(生长)中芍药双苷的含量。以生长好、芍药双苷含量较高的芍药叶片及根愈伤组织为研究对象,通过单因素实验,考察基本培养基类型、培养基中碳源、微量元素、pH值以及光照等因素对愈伤组织生长及芍药双苷积累水平的影响。结果表明,适合芍药双苷积累的愈伤组织培养条件为：培养基为WPM+0.5mg/L6-BA+1.0mg/LNAA+0.1mg/LTDZ,pH为6.5,培养室温度为24℃,光照强度为1500lx,愈伤组织培养时间为40天。在所考察的三种糖类(蔗糖、麦芽糖、葡萄糖)中,蔗糖最有利于愈伤组织生长及芍药双苷的积累。培养基中添加少量亚硒酸钠盐(0.25mg/L)也可使芍药双苷的积累水平提高96%。在此基础上,采用Plackett-Burman设计从众多影响愈伤组织中芍药双苷积累水平的因素中筛选出了影响最为显著的三个关键要素：蔗糖含量、植物激素6-BA及NAA浓度,然后通过最陡爬坡实验和基于中心组合设计的响应面优化方法确定这三个关键要素的最适水平,使芍药愈伤组织中芍药双苷的含量较原始培养条件的浓度提高了33%,取得了较好的优化效果。
【作者】马莹莹；
【导师】梅乐和；
【作者基本信息】浙江大学，生物化工，2014，硕士
【关键词】芍药；愈伤组织；芍药内酯苷；芍药苷；植物细胞培养；优化；

【参考文献】
[1]蒋文娜.科技期刊依托科研机构发展研究[D].广西民族大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[2]占裕.业务外包环境下的高校图书馆编目工作研究[D].安徽大学,图书情报,2014,硕士.
[3]李文杰,胡平,肖都,刘春雷.多波束测深在海洋工程勘察中的应用[J].物探与化探,2004,04:373-376.
[4]李谊珍.建立我国个人破产法律制度若干问题研究[D].吉林大学,法律,2012,硕士.
[5]徐文庆.基于形声字规则性效应的心理定势形成和打破机制[D].华中师范大学,基础心理学,2014,硕士.
[6]汪新萍.论安全保障义务人责任的构成与承担[D].吉林大学,民商法,2014,硕士.
[7]徐嵘.基于SET协议的网银在线支付终端身份认证机制与实现[D].湖南大学,计算机科学与技术,2012,硕士.
[8]于娟娟.基于MATLAB的电弧炉谐波分析软件的研究[D].西安理工大学,电路与系统,2004,硕士.
[9]杜娟.基于J2EE的MVC设计模式的研究和实现[D].河海大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[10]李志敏.请戏习俗的传承与变革[D].吉林大学,人类学,2013,硕士.
[11]李燕.社团活动对大学生创新思维发展的影响[D].太原科技大学,科学技术哲学,2013,硕士.
[12]董艳华.铁路产业组织结构研究[D].北京交通大学,2006.
[13]宋歌.山西机电学院校园网改造工程的设计与实施[D].大连理工大学,计算机技术（专业学位）,2012,硕士.
[14]李晓霞.搜索引擎优化技术的研究及其应用[D].河北科技大学,计算机技术,2012,硕士.
[15]陈菡萏,张飞,王京.基于LADRC的双机架铝带冷连轧机张力控制研究[J].冶金自动化,2015,03:30-33+38.
[16]张萌.基于随机网格的逾渗模型研究及其在深床过滤中的应用[D].哈尔滨工业大学,环境科学与工程,2013,硕士.
[17]程金星,朱立华,杨长春,陈俊.基于小波变换的三维地震资料拼接方法[J].石油地球物理勘探,2004,04:406-408+500-365.
[18]邱宏.安徽庐枞地区中酸性侵入岩成岩作用研究[D].合肥工业大学,矿物学、岩石学、矿床学,2014,硕士.
[19]沈旭昌.隐私保护的分布式数据挖掘系统[D].浙江工业大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[20]徐凌.城市绿地生态系统综合效益研究—以大连市为例[D].辽宁师范大学,自然地理学,2003,硕士.
[21]柳旭.自动泊车系统超声与图像处理方法研究[D].哈尔滨工业大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[22]李照华,褚有群,马淳安.以Ce~(3+)/Ce~(4+)为媒质间接电合成1,4-萘醌[J].化工学报,2013,01:334-339.
[23]胡静.烤瓷冠基底合金影响人牙龈成纤维细胞MMP-2、MMP-13表达的实验研究[D].辽宁医学院,口腔临床医学,2012,硕士.
[24]唐婧雯.论初始兴趣混淆理论在商标侵权中的适用[D].宁波大学,民商法学,2013,硕士.
[25]苏良捷.基于模糊理论的网络通信安全评估系统的研究与应用[D].东北大学,电子与通信工程,2011,硕士.
[26]张宁.混凝土箱梁温度场试验及温度效应理论研究[D].重庆大学,土木工程,2014,硕士.
[27]周健.新疆紫草化学成分研究及根与茎残基成分的比较[D].成都中医药大学,中药学,2012,硕士.
[28]孙晓娟.基于网络的大屏幕显示系统的设计与实现[D].东北大学,计算机软件与理论,2010,硕士.
[29]匡敏驰1,朱纪洪1,吉敬华2.航空油泵电机的相电流畸变纠正控制[J].控制与决策.
[30]徐丽华.高炉炉热预报微型计算机系统[J].冶金自动化,1987,06:30-33.
[31]胡剑.证券投资基金投资策略及其评价研究[D].浙江大学,2003.
[32]赵婕.JBP-40径向柱塞泵运动件及滑靴副的高压化研究[D].太原科技大学,机械电子工程,2014,硕士.
[33]冯阳.中国证券市场个人投资者行为分析[D].西南财经大学,金融学,2004,硕士.
[34]王海飞.基于Hadoop云的数据库营销海量数据处理与挖掘的研究[D].浙江理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[35]孙雪芹.新型农村社会养老保险制度发展中的问题及对策[D].苏州大学,行政管理,2012,硕士.
[36]李红梅.混凝土小型空心砌块建筑温度场与温度裂缝分析[D].浙江大学,2004.
[37]王振廷,冯帆,钱兵羽,唐凤丽.大工程背景下我省石墨深加工紧缺人才培养模式改革与实践[J].时代教育,2015,11:4-5.
[38]查卫军.基于Android系统的传感器模块设计和实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2012,硕士.
[39]彭琼.中学思想政治教育中危机教育的研究[D].苏州大学,学科教学,2012,硕士.
[40]胡秋妍.案例指导制度研究[D].甘肃政法学院,宪法学与行政法学,2012,硕士.
[41]王玉良.PDT同播系统中网管的设计与实现[D].复旦大学,软件工程,2012,硕士.
[42]范文兵,刘春风,张素贞.一种强跟踪扩展卡尔曼滤波器的改进算法[J].控制与决策,2006,01:73-76.
[43]耿天阳.鞍山建国南路杨柳河桥检测与评估研究[D].沈阳建筑大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[44]马莉,杨赫然,孙兴伟.专用数控铣床主轴轴承油气润滑方法研究[J].机械工程与自动化,2014,06:185-186+189.
[45]喻晓琛.BBS教学应用的研究[D].江西师范大学,教育技术学,2004,硕士.
[46]国来忠,徐专红.S5-115U在选煤厂监控系统中的应用[J].煤炭科学技术.1989(10)
[47]于慧芳.基于VB6.0与PCI数据采集卡的骨质疏松治疗仪控制系统[D].兰州理工大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[48]汤志坚.马克思主义哲学的意识形态性研究[D].曲阜师范大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[49]洪茹菲.党代会代表密切联系党员群众问题研究[D].宁波大学,马克思主义基本原理,2014,硕士.
[50]郝国园.预应力混凝土连续箱梁整体顶升关键技术研究[D].青岛理工大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.