牛源金黄色葡萄球菌耐药性分析及氟喹诺酮类耐药基因检测

【摘要】金黄色葡萄球菌(StaphylococcusAureus,SA)是医学和兽医临床上最常见的病原菌,可引起人和家畜的多种疾病。随着抗菌药物的广泛应用以至滥用,金黄色葡萄球菌对所有抗菌药物的耐药性及其多重耐药性己严重影响了兽医临床抗感染的治疗,因而对本地区牛源金黄色葡萄球菌进行耐药性分析及耐药性分子流行病学的调查,不仅对金黄色葡萄球菌引起的疾病防治具有指导意义,而且有利于控制耐药菌株的产生和传播。本研究采集了宁夏地区部分奶牛养殖场临床型和隐性型乳房炎奶样,利用微生物学方法和分子生物学方法,对样品中的金黄色葡萄球菌进行分离鉴定。结果,从1263份样品中分离鉴定出了227株金黄色葡萄球菌,分离率为17.97%,同时采用PCR方法对分离鉴定的金黄色葡萄球菌进行16SrDNA、nuc基因扩增,从基因水平进行确证,结果有220株金黄色葡萄球菌的16SrDNA、nuc基因为阳性,阳性率为17.42%,即本研究中微生物学鉴定与PCR方法鉴定的相符率为96.92%。依据CLSI推荐的纸片法对分离的220株金黄色葡萄球菌进行了药物敏感性测定。结果显示,金黄色葡萄球菌对青霉素和氨苄西林的耐药率最高,达到了83.18%,其次是氧氟沙星(56.37%)、阿莫西林/克拉维酸(51.82%)、环丙沙星(49.55%),耐药率在50%左右,对奎奴普丁/达福普丁等其他药物的耐药率从7.27%-40.5%不等,耐药率最低的是美罗培南,耐药率为2.27%,对万古霉素完全敏感,所有分离的菌株最多对13种药物耐药,其中6耐菌株最多,占到12.73%。采用苯唑西林纸片扩散法检测MRSA,结果检测出2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌,9株菌位于耐药和敏感菌之间,然后采用PCR法扩增所有菌的：mecA基因和femA基因,发现除了MRSA阳性菌(ATCC33591)的mecA基因扩增出了与目的片段相符的DNA片段以外,被检的220株菌中只有2株菌的：mecA基因为阳性,检出率为0.91%,所检的220株菌的femA基因均扩增出了与目的片段相符的DNA片段,阳性率为100%,即本次研究只检测出2株MRSA菌株。最后采用PCR法检测了耐氟喹诺酮金黄色葡萄球菌gr1A、gyrA、norA基因,结果显示,gyrA基因检出率为80%,norA基因检出率为78.18%,gr1A基因检出率为78.64%。选取部分扩增产物进行测序,测序结果显示gr1A、norA基因的同源性为99%,gyrA基因的同源性为100%。综上所述,本研究通过对宁夏地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌耐药性分析和氟喹诺酮类耐药基因的检测,初步揭示了本地区牛源金黄色葡萄球菌的耐药性,为指导临床合理应用抗菌药物,预防和控制耐药菌及耐药基因的传播提供了科学依据。
【作者】安慧慧；
【导师】王桂琴；李学仁；
【作者基本信息】宁夏大学，养殖（专业学位），2014，硕士
【关键词】金黄色葡萄球菌；耐药性；氟喹诺酮类；耐药基因；

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