基于酶联免疫斑点技术的水痘—带状疱疹病毒中和抗体检测方法的建立

【摘要】水痘-带状疱疹病毒(VaricellaZosterVirus,VZV)是引起水痘和带状疱疹的病原体,具有严重的危害性。目前已有基于vOka株的水痘减毒活疫苗上市,在较好地预防水痘的同时,却增加了接种者带状疱疹的发生风险。由VZV引发的带状疱疹目前尚缺乏特效治疗药物。VZV中和抗体在阻断病毒体内扩散及感染中起到重要的作用,同时也有望成为带状疱疹的特异治疗药物。然而,目前对于VZV中和抗体的检测方法仍存在许多问题,难于同时满足快速、准确、高通量的需求。为此,本研究探索建立一种新型的基于酶联免疫斑点法的VZV中和抗体高通量检测方法。本研究首先探索获得可高效检测感染细胞内病毒抗原的检测抗体。由于膜蛋白是暴露在VZV颗粒表面的包膜组成成分,存在亲和表位和中和表位,因此本研究将探索获得具有良好反应特异性和检测灵敏度的VZV糖蛋白单抗。通过对VZV保护液成分优化和冻融时间的摸索制备获得高滴度的无细胞VZV病毒。将无细胞病毒免疫小鼠后筛选获得6株可特异性结合GlycoproteinK(gK)抗原的单克隆抗体。对这6株单克隆抗体进行进一步的表位鉴定,确定其关键亲和表位处于gK的281-295位氨基酸。选择其中一株单抗18A10进行进一步鉴定,确定了其最短结合表位和关键氨基酸位点的分布。本研究进一步制备了辣根过氧化物酶标记的18A10(HRP-18A10)用于VZV感染细胞的酶联免疫斑点检测,对系统进行检测时间、感染滴度等优化,成功建立了较为稳定的VZV中和抗体酶联免疫斑点检测方法。与传统的空斑减少法平行比较,新型酶联免疫斑点检测法对鼠血清标本的检测特异性为100%,检测结果一致性为95.65%,显示了新方法具有良好的可靠性。VZV中和抗体酶联免疫斑点检测法的检测时间仅需2天,可在96孔板中利用自动化的仪器设备进行快速检测,避免了传统方法的主观误差,有利于进行快速高通量检测。综上所述,本研究通过筛选获得了VZV-gK的特异性单克隆抗体,并应用于建立VZV中和抗体酶联免疫斑点检测法,相比于空斑减少法,存在省时、高通量检测的明显优势,并且能够保证血清样本的检测正确率,可为临床血清的检测和实验室中和表位研究提供更多支持。
【作者】陈丽宏；
【导师】杜海莲；
【作者基本信息】厦门大学，生物化学与分子生物学，2014，硕士
【关键词】水痘-带状疱疹病毒；单克隆抗体18A10；中和酶联免疫斑点检测；

【参考文献】
[1]孟大伟.基于SOA技术的航空统一数据信息平台的分析与设计[D].南京理工大学,计算机技术,2012,硕士.
[2]张儒良,王翰虎.基于数据挖掘技术的试卷质量聚类分析系统[J].贵州大学学报(自然科学版),2004,04:393-396.
[3]陈弋玺.算术运算细胞型膜系统自动设计与实现方法[D].西南交通大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[4]胡林.基于知识发现技术的林火研究[D].北京林业大学,2006.
[5]尚玉华,徐乐英.Ti-N化合物中氮的电子探针分析[J].金属学报.1990(02)
[6]胡迪.湖北省高校网球教学研究分析[D].华中师范大学,体育教学,2014,硕士.
[7]戚畅.商业银行应对互联网金融的营销策略研究[D].北京交通大学,2014.
[8]冯艳霞.标准算子代数上一些初等算子的范数[D].曲阜师范大学,基础数学,2013,硕士.
[9]夏玉卓.葛根等中药淀粉的理化性质研究[D].天津大学,生药学,2013,硕士.
[10]张剑波,连芳,高学平,李建刚,范丽珍,何向明.锂离子电池及材料发展前瞻——第16届国际锂电会议评述[J].中国科学:化学,2012,08:1252-1262.
[11]高诚.电解铝生产低碳排放计量模型研究[D].北方工业大学,会计学,2013,硕士.
[12]夏洪瑞,周开明,陈德刚,杨永红.保持分辨率处理方法分析[J].石油地球物理勘探,2003,S1:23-26+30-138.
[13]张雪梅.线粒体融合蛋白2对高脂饮食诱导的胰岛素抵抗大鼠骨骼肌脂肪酸代谢的影响[D].河北医科大学,内科学,2013,硕士.
[14]徐彬彬.高职院校非英语专业学生英语应用文写作错误分析及对策[D].大连海事大学,外国语言学及应用语言学,2012,硕士.
[15]范福强.基于改进Habedank电弧模型的弓网离线过电压研究[D].西南交通大学,电力系统及其自动化,2014,硕士.
[16]张帆.还原氧化石墨烯的改性及应用研究[D].北京化工大学,2013.
[17]刘洋.大学生法制教育和道德教育相结合问题研究[D].渤海大学,科学社会主义与国际共产主义运动,2014,硕士.
[18]周天娥.意大利蜜蜂与中华蜜蜂雄蜂胚胎发育期差异蛋白质组及磷酸化蛋白质组分析[D].郑州大学,特种经济动物饲养,2013,硕士.
[19]杨莎.野巴子的生药学研究[D].成都中医药大学,生药学,2012,硕士.
[20]宋微.松粳9号对稻瘟病抗性及抗病基因定位[D].东北农业大学,作物遗传育种,2013,硕士.
[21]夏浩瑄,刘子胥.基于SVPWM的变参数MRAS速度辨识模型仿真与研究[J].电气传动,2014,05:31.
[22]杨延村,赵炳新.基于残差分析的GM(1,1)模型有效性研究[J].控制与决策,2010,09:1413-1419.
[23]林顺和.辅酶Q10对子痫前期样孕鼠的肝脏保护作用及其机制的研究[D].福建医科大学,妇产科学,2014,硕士.
[24]王健.基于现代项目管理的西飞公司民机研制流程研究[D].西北工业大学,管理科学与工程,2004,硕士.
[25]曾婉艺.CeO_2可控纳米结构与固溶体的合成及光催化性能研究[D].北京化工大学,化学工程（专业学位）,2013,硕士.
[26]唐伟伟.学龄期骨折患儿气质特征对早期功能锻炼依从性影响的分析[D].青岛大学,护理学,2013,硕士.
[27]李静,裴昊,李凡,王丽华,樊春海.基于氧化石墨烯淬灭效应的DNA传感器特异性检测三聚氰胺[J].核技术,2012,05:386-389.
[28]武慧.掺杂ZnS量子点的合成及其在痕量分析中的应用[D].山西师范大学,分析化学,2013,硕士.
[29]朴星春.中医刚柔辩证治疗心身疾病的临床实践[D].北京中医药大学,中医学,2013,硕士.
[30]丁艳红.无线传感器网络中模式查询策略的研究[D].大连理工大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[31]武妮娜.河北省上市公司资产重组绩效研究[D].河北工业大学,企业管理,2004,硕士.
[32]朱家元,虞建飞,张恒喜.嵌入局部模型的SOM网络对混沌时间序列预测研究[J].控制与决策,2003,01:106-109.
[33]刘国荣.提高逻辑控制系统可靠性的方法探讨[J].冶金自动化,1980,06:44-46.
[34]包康平.珠海建设智慧城市的对策研究[D].吉林大学,公共管理,2014,硕士.
[35]吕全纲.锦屏一级大理岩时效变形破裂规律及细观演化机理[D].长江科学院,岩土工程,2014,硕士.
[36]陈曦.R&D溢出对我国高技术产业集聚的影响研究[D].西北师范大学,产业经济学,2013,硕士.
[37]屈迪.兰州市区理工科高校跆拳道运动开展现状的调查与研究[D].兰州理工大学,体育人文社会学,2013,硕士.
[38]高晶,李建中,张兆功,张艳秋.一种基于网格和密度的数据流高效聚类算法[A].中国计算机学会数据库专业委员会.第二十届全国数据库学术会议论文集（技术报告篇）[C].中国计算机学会数据库专业委员会:,2003:3.
[39]孟庆芳.学习型组织的知识管理[D].中国海洋大学,2005.
[40]郑丽婷.现代汉语形式动词及其教学分析[D].上海外国语大学,汉语国际教育,2014,硕士.
[41]沈克佳,母溆杰,吴卫.分类提取法在产品质量管理中的应用[J].一重技术.2007(03)
[42]黄晓丹.质子泵抑制剂对骨折愈合影响的基础研究[D].河北医科大学,外科学（专业学位）,2013,硕士.
[43]杨博.Tizen操作系统持续集成平台的设计与实现[D].北京交通大学,软件工程（专业学位）,2013,硕士.
[44]王陈乐.差动负载敏感阀控系统的研究[D].浙江工业大学,2008.
[45]顾雪萍.基于.NET的开放式实验室管理系统的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[46]胡宏伟.煤种（质）变化对电站锅炉运行经济性影响的试验研究[D].浙江大学,2004.
[47]米董哲.陆相岩性地层油气藏油水分布规律影响因素分析[D].西北大学,矿产普查与勘探,2014,硕士.
[48]王军林.无速度传感器永磁同步电机矢量控制研究[D].华中科技大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[49]尹玲.基于ARM的便携式心电接收装置研究[D].重庆大学,电子与通信工程（专业学位）,2014,硕士.
[50]闫轶.中国上市公司分部报告有用性研究[D].首都经济贸易大学,会计学,2004,硕士.