白藜芦醇抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制研究

【摘要】目的：白藜芦醇是一种具有抗肿瘤效应的天然化合物，但其抗肿瘤的机制尚不十分清楚。恶性肿瘤存在多种细胞因子表达的紊乱，锌指蛋白36（Tristetraprolin，TTP）是一种调节细胞因子表达的关键蛋白。本文通过观察TTP在乳腺癌组织中的表达，探讨白藜芦醇是否通过TTP抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及其机制。方法：选择2010年5月至2012年5月在南华大学附属第一医院就诊的乳腺癌患者标本87例，经病理学检查包括：导管原位癌36例和浸润性导管癌51例；同时选择癌旁正常乳腺组织12例。提取新鲜组织的RNA和蛋白质，采用荧光定量PCR法检测mRNA结合蛋白TTP、AU富集元件RNA结合蛋白1（AU-richelementRNA-bindingprotein1，AUF1）和人类抗原R（humanantigenR，HuR）的基因表达，采用Western-blot法检测TTP的蛋白质表达。将组织以中性缓冲福尔马林（10%）固定，采用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中TTP的蛋白质表达。培养人乳腺癌MCF-7细胞，加入白藜芦醇（20μM）处理细胞48h，采用MTT法和流式细胞术检测MCF-7细胞的增殖情况。不同浓度（0,10,20,40μM）白藜芦醇处理细胞6h或20μM的白藜芦醇处理细胞不同时间（0、2、4、8h），采用荧光定量PCR和/或Western-blot法检测TTP、环氧合酶2（Cyclooxygenase-2，COX-2）、血管内皮生长因子（VascularEndothelialGrowthFactor，VEGF）和iNOS的表达。SiRNA干扰MCF-7细胞TTP的表达，采用荧光定量PCR和Western-blot法检测COX-2、VEGF和诱导型一氧化氮合成酶（Induciblenitricoxidesynthase，iNOS）的表达及细胞增殖的变化。结果：相对于正常组织，AUF1和HuRmRNA的表达在乳腺癌组织中无明显变化，但TTPmRNA的表达明显降低。Western-blot和免疫组化结果显示，乳腺癌组织中TTP的表达明显降低（P<0.05)。MTT和流式细胞术结果显示，白藜芦醇（20μM）处理明显抑制MCF-7细胞的增殖（P<0.05)。白藜芦醇呈浓度和时间依赖性的上调TTP和iNOS的表达，并下调COX-2和VEGF的表达。SiRNA干扰TTP的表达后，显著降低白藜芦醇对MCF-7细胞增殖的抑制作用，并上调COX-2和VEGF的mRNA稳定性和蛋白质表达。结论：⑴乳腺癌组织中TTP基因和蛋白质的表达明显降低。⑵白藜芦醇抑制MCF-7细胞的增殖，这种效应可能与其上调TTP的表达，促进COX-2和VEGF的mRNA降解和稳定iNOS的表达有关。
【作者】李翀；
【导师】贺更生；
【作者基本信息】南华大学，外科学，2012，硕士
【关键词】乳腺癌；白藜芦醇；锌指蛋白36；细胞增殖；

【参考文献】
[1]王治钢.家用摄录一体机面面观[J].今日电子.1994(03)
[2]朱超,梅军,黄潇贻,倪玉玲,郑建勇.站域信息实时同步采集中同步采样时钟的设计[J].电力系统自动化,2014,06:106-111.
[3]陈家博.公路隧道不良地质体探地雷达图像解译分析[D].湘潭大学,结构工程,2012,硕士.
[4]赖小琼.改性醇汽油添加剂的研究与应用[D].海南大学,材料学,2014,硕士.
[5]朱晓蕾.嘧啶酮类/7-氮杂吲哚类/呔嗪酮类PARP1抑制剂的设计、合成与抗肿瘤活性研究[D].浙江大学,2013.
[6]冯丽.创新型创业与经济增长的关系研究[D].山东财经大学,企业管理,2014,硕士.
[7]谢雯.基于因子分析的中国证券公司竞争力研究[D].复旦大学,金融学,2012,硕士.
[8]张文冉.家族参与对企业社会责任的影响机制[D].浙江大学,创业管理,2012,硕士.
[9]张磊.喷射电沉积制备多层膜装置设计及试验研究[D].南京航空航天大学,机械制造及其自动化,2012,硕士.
[10]刘丽芳.论回应型法理论及其对当代中国法治建设的启示[D].湖南师范大学,法学理论,2013,硕士.
[11]周葛亮.基于宏观视角的中国房地产企业资本结构研究[D].南京大学,政治经济学,2013,硕士.
[12]柯慧飞.区域吸引新生代农民工就业的影响因素研究[D].浙江工业大学,2012.
[13]戴琦.Web上的数据挖掘[A].中国计算机用户协会网络分会.全国计算机网络应用年会论文集（2001）[C].中国计算机用户协会网络分会:,2001:6.
[14]张军华,臧胜涛,单联瑜,石林光.高性能计算的发展现状及趋势[J].石油地球物理勘探,2010,06:918-925+936+791-792.
[15]张丽丽.基于移动Agent系统的安全技术研究[D].南京航空航天大学,交通信息工程及控制,2004,硕士.
[16]刘勋.干法下出料振冲制桩监控系统设计[D].陕西科技大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[17]王歆.大学校园的有机生长[D].浙江大学,建筑设计及其理论,2004,硕士.
[18]周刚.我国刑法空间适用范围的立法研究[D].西南政法大学,刑法学,2012,硕士.
[19]王瑞强.氧化应激在造影剂肾病中的作用及干预研究[D].郑州大学,老年医学（专业学位）,2014,博士.
[20]黄李沁心.中国家族企业非效率投资及其动因分析[D].浙江工商大学,会计学,2014,硕士.
[21]潘莉,葛玲.当前社会群际心理冲突及其调适策略探讨[J].湖北社会科学,2015,03:32-36.
[22]甄俊平.实验性蛋白多糖降解致兔膝关节软骨早期退变的MRI研究[D].山西医科大学,影像医学,2002,硕士.
[23]王琨.首秦公司2~#板坯连铸结晶器液压振动控制系统改进及工程实践[D].燕山大学,机械工程,2012,硕士.
[24]高阳.基于SOM神经网络算法的癌症诊断研究[D].内蒙古农业大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[25]程香晖.祖父母参与幼儿生活与父母亲职胜任感之关系的研究[D].华中师范大学,学前教育,2014,硕士.
[26]尹晓君.欧洲银行业联盟研究[D].外交学院,世界经济,2014,硕士.
[27]翟辉琴,王素敏,雷蓉.GIS辅助下的遥感图像分类与识别[J].地理空间信息,2004,04:8-10.
[28]奚晨.石墨烯量子点与二氧化钛纳米管阵列的复合及其光电催化性能的研究[D].上海大学,应用化学,2013,硕士.
[29]王庆华.青少年生态伦理素养教育体系研究[D].中原工学院,科学技术哲学,2012,硕士.
[30]张继军.新疆金融效率与经济增长关系研究[D].新疆财经大学,金融学,2013,硕士.
[31]陶荣.4G网络下网络广播媒体发展研究[D].吉林大学,传播学,2014,硕士.
[32]徐传印.基于安全云架构的虚拟沙箱的设计与实现[D].华中科技大学,计算机技术,2013,硕士.
[33]何樵登.不断开拓,持续提高[J].石油地球物理勘探,1995,04:452-453.
[34]邴春光.联想集团手机业务发展战略研究[D].首都经济贸易大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[35]林园园.新时期以来现实主义文学理论论争研究[D].沈阳师范大学,文艺学,2014,硕士.
[36]顾乐红.汉画像狩猎图研究[D].江苏师范大学,美术学,2013,硕士.
[37]陈王伟.入世后西部地方政府职能创新研究[D].西北工业大学,企业管理,2004,硕士.
[38]许佳.钢骨超高强混凝土短柱抗震性能的试验研究[D].大连理工大学,结构工程,2004,硕士.
[39]王坤.甲状腺结节良恶性鉴别诊断的新标准[D].山东大学,内科学（专业学位）,2013,硕士.
[40]鹿甲寅.新一代海洋卫星固存系统的设计[D].西安电子科技大学,通信与信息系统,2003,硕士.
[41]张华伟.基于B/S的车辆监控系统设计与实现[D].山东大学,机械电子工程,2013,硕士.
[42]刘玉龙.面向多租户应用QoS感知的服务选择方法研究[D].山东大学,计算机软件与理论,2013,硕士.
[43]杜厚智.上海铁路局信息化工作面临的形势和任务[J].上海铁道科技,2004,03:1-2+10.
[44]蔡纲,陈乐寿,马涛.华北平原GB大地电磁剖面的二维解释[J].石油地球物理勘探,1987,02:169-179.
[45]教鑫.中德中等职业教育课程模式比较研究[D].沈阳师范大学,比较教育学,2013,硕士.
[46]王子哲.含深厚淤泥层的地铁深基坑变形特性研究[D].哈尔滨工业大学,建筑与土木工程,2013,硕士.
[47]邓丽红.影视明星负页新闻研究[D].南京师范大学,新闻学,2012,硕士.
[48]刘斌.磁性微纳米材料的制备，表征及应用[D].南开大学,高分子化学与物理,2012,硕士.
[49]杨永涛.拉丝模孔型检测系统的设计与研究[D].陕西科技大学,机械电子工程,2013,硕士.
[50]张军楠.肠道病毒71型疫苗免疫应答机制研究[D].中国食品药品检定研究院,病原生物学,2014,硕士.