SNP对共刺激分子CD274、CD80在胃癌中表达调控研究

【摘要】第一部分启动子区SNP对CD274分子在人胃癌中的表达调控研究目的：探讨人胃癌中CD274核心启动子区SNP（单核苷酸多态性）对CD274转录调控的影响。方法：首先通过调研明确CD274基因核心启动子区，并在胃癌组织与远端正常组织通过PCR法扩增出该片段，并对其进行分析；选择突变频率较高且位于转录因子区域的SNP；构建包含CD274基因核心启动子序列的SNPrs10815225突变型和野生型两种基因型荧光素酶重组表达载体；将重组载体与转录因子SP1共转染，并检测其荧光素酶活性，运用统计学软件分析SNPrs10815225基因型对CD274的调控作用影响；最后对CD274和SP1进行关联分析，研究胃癌中两者的关联性。结果：（1）CD274核心启动子区域位于转录起始点上游约300bp，该区域存在四个SNP位点，SNPrs10815225位于转录因子SP1的结合区域；（2）胃癌组织中CD274基因核心启动子区域SNPrs10815225突变率为18.8%；（3）成功构建含SNPrs10815225两种基因型的CD274核心启动子荧光素酶重组表达载体，基因测序验证正确；（4）双荧光素酶报告基因系统分析发现，SNPrs10815225突变型相对野生型与SP1亲和力较低（P<0.05）；（5）胃癌中CD274基因型及表达水平和转录因子SP1尚未见显著关联。结论：胃癌组织中CD274的核心区域位于转录前约300bp，其中SNPrs10815225在胃癌的中突变率较高，SNPrs10815225突变型可削弱转录因子SP1与CD274基因启动子区结合的亲和力，而单一的SNPrs10815225突变尚不足以显著影响CD274分子的表达。第二部分CD80基因3’-UTR上的SNP对miRNA调控作用的影响目的：研究CD80基因3’-UTR上SNPrs1599795对miRNA调控作用的影响。方法：通过构建包含CD80基因3’-UTR上miR-132-3p，miR-212-3p和miR-361-5p作用靶点序列的SNPrs1599795T型和A型两种基因型荧光素酶表达载体；将构建好的载体分别与不同miRNA共转染，并检测其荧光素酶活性；最后运用统计学软件分析SNPrs1599795对miRNA的调控作用影响结果：（1）与对照组荧光素酶活性相比，miR-132-3p、miR-212-3p和miR-361-5p分别能显著抑制SNPrs1599795T型和A型重组荧光素酶的活性（P<0.01）；（2）比较两种不同基因型的重组荧光素酶载体发现，A基因型受miR-361-5p的抑制（P=0.006），相反T基因型可受miR-132-3p和miR-212-3p的共同抑制（P=0.003，P=0.018），提示SNPrs1599795可能参与胃癌中CD80基因的下调。结论：CD80基因3’-UTR上的SNPrs1599795可以影响miR-132-3p，miR-212-3p和miR-361-5p与靶序列的结合，从而改变了miRNA的调控功能，这一机制可能参与胃癌中CD80基因的下调。
【作者】李伏超；
【导师】陈卫昌；汪维鹏；
【作者基本信息】苏州大学，消化病学，2014，硕士
【关键词】CD274；SNP；启动子；CD80；microRNA；

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