白藜芦醇抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制研究

白藜芦醇抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖的机制研究

作者:师大云端图书馆 时间:2019-08-05 分类:硕士论文 喜欢:574
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【摘要】目的:白藜芦醇是一种具有抗肿瘤效应的天然化合物,但其抗肿瘤的机制尚不十分清楚。恶性肿瘤存在多种细胞因子表达的紊乱,锌指蛋白36(Tristetraprolin,TTP)是一种调节细胞因子表达的关键蛋白。本文通过观察TTP在乳腺癌组织中的表达,探讨白藜芦醇是否通过TTP抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖及其机制。方法:选择2010年5月至2012年5月在南华大学附属第一医院就诊的乳腺癌患者标本87例,经病理学检查包括:导管原位癌36例和浸润性导管癌51例;同时选择癌旁正常乳腺组织12例。提取新鲜组织的RNA和蛋白质,采用荧光定量PCR法检测mRNA结合蛋白TTP、AU富集元件RNA结合蛋白1(AU-richelementRNA-bindingprotein1,AUF1)和人类抗原R(humanantigenR,HuR)的基因表达,采用Western-blot法检测TTP的蛋白质表达。将组织以中性缓冲福尔马林(10%)固定,采用免疫组织化学方法检测乳腺癌组织中TTP的蛋白质表达。培养人乳腺癌MCF-7细胞,加入白藜芦醇(20μM)处理细胞48h,采用MTT法和流式细胞术检测MCF-7细胞的增殖情况。不同浓度(0,10,20,40μM)白藜芦醇处理细胞6h或20μM的白藜芦醇处理细胞不同时间(0、2、4、8h),采用荧光定量PCR和/或Western-blot法检测TTP、环氧合酶2(Cyclooxygenase-2,COX-2)、血管内皮生长因子(VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF)和iNOS的表达。SiRNA干扰MCF-7细胞TTP的表达,采用荧光定量PCR和Western-blot法检测COX-2、VEGF和诱导型一氧化氮合成酶(Induciblenitricoxidesynthase,iNOS)的表达及细胞增殖的变化。结果:相对于正常组织,AUF1和HuRmRNA的表达在乳腺癌组织中无明显变化,但TTPmRNA的表达明显降低。Western-blot和免疫组化结果显示,乳腺癌组织中TTP的表达明显降低(P<0.05)。MTT和流式细胞术结果显示,白藜芦醇(20μM)处理明显抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05)。白藜芦醇呈浓度和时间依赖性的上调TTP和iNOS的表达,并下调COX-2和VEGF的表达。SiRNA干扰TTP的表达后,显著降低白藜芦醇对MCF-7细胞增殖的抑制作用,并上调COX-2和VEGF的mRNA稳定性和蛋白质表达。结论:⑴乳腺癌组织中TTP基因和蛋白质的表达明显降低。⑵白藜芦醇抑制MCF-7细胞的增殖,这种效应可能与其上调TTP的表达,促进COX-2和VEGF的mRNA降解和稳定iNOS的表达有关。
【作者】李翀;
【导师】贺更生;
【作者基本信息】南华大学,外科学,2012,硕士
【关键词】乳腺癌;白藜芦醇;锌指蛋白36;细胞增殖;

【参考文献】
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