江苏省蔬菜根结线虫的分布调查、种类鉴定及定量检测技术研究

【摘要】根结线虫(Root-knotnematode,RKN)是一类世界性分布的威胁农业生产的植物根系专性内寄生线虫。近年来,随着我国保护地蔬菜面积的迅速发展,复种指数的增加,根结线虫病呈逐年加重趋势,严重影响了作物的产量与品质。土壤中根结线虫的群体密度与作物的受害程度关系密切,因此,准确、可靠和快速地鉴定和计数土壤中的根结线虫,对该病害的有效防治至关重要。本研究对江苏省9个地区蔬菜根结线虫的分布、发生种类以及群体密度进行了调查,分别建立了根结属线虫和南方根结线虫的实时荧光PCR定量检测方法,并利用此方法对田间土壤中的根结线虫进行了定量检测。主要结果如下：2011年对江苏省9个地区25个乡镇蔬菜根结线虫的分布、发生种类以及群体密度进行了调查。结果表明,根结线虫平均发生率为73.6%,土壤中的线虫群体密度最高达到2920条/200mL土样,宿迁、淮安等地区根结线虫发生率较高,达100%,而盐城地区根结线虫发生率相对较低,为57.1%。SCAR标记分子鉴定揭示为害江苏省蔬菜的根结线虫种类有南方根结线虫(Meloidogyneincognita)、花生根结线虫(M.arenaria)、爪哇根结线虫(M.javanica)和北方根结线虫(M.hapla)4类,其中南方根结线虫为优势种群。田间根结线虫种群大多数为单一种群,18%的样品为南方根结线虫与花生根结线虫或南方根结线虫与爪哇根结线虫2个种组成的混合种群。为了快速检测和定量土壤中根结属线虫的群体密度,根据根结属线虫的18SrDNA保守序列,设计了一对根结线虫属特异性引物,通过直接提取土壤DNA,建立了土壤中根结属线虫的SYBRGreenIreal-timePCR检测方法。结果表明,该方法能够从土壤DNA中特异检测出根结属线虫,建立的标准曲线循环阈值与根结线虫数量的对数值之间具有良好的线性关系,相关系数为0.9836,扩增效率为80%,检测灵敏度为1条2龄幼虫,比普通PCR检测高10倍;对10个田间土壤样品进行检测显示,real-timePCR检测与显微镜计数检测根结线虫的数量呈显著的正相关性。为了准确测定土壤中南方根结线虫的群体密度,根据SCAR标记设计了南方根结线虫特异性引物和TaqMan探针,分别建立了卵和2龄幼虫的real-timePCR定量检测体系,并将该体系与显微镜计数法进行了比较。结果表明,引物及探针对南方根结线虫具有高度特异性,建立的标准曲线循环阈值与卵和2龄幼虫数量的对数值之间具有良好的线性关系,相关系数分别为0.9771和0.9853,扩增效率均为90%,检测灵敏度为0.1个卵及0.001条2龄幼虫；对10个田间土壤样本的检测显示,real-timePCR定量检测与显微镜计数法测定的南方根结线虫卵和2龄幼虫数量呈显著的正相关性,且两种方法对2龄幼虫的测定结果无显著差异。本研究建立的根结属线虫和南方根结线虫定量检测体系,能够快速、灵敏、特异性地测定土壤中根结属线虫和南方根结线的种群密度,可为根结线虫病害的预测预报及综合防控策略的制定提供技术支持。
【作者】宋志强；
【导师】李红梅；
【作者基本信息】南京农业大学，植物病理学，2013，硕士
【关键词】根结线虫；分布调查；种类鉴定；SCAR标记；实时荧光PCR；卵；2龄幼虫；定量检测；

【参考文献】
[1]张灵.武钢1号高炉环保型INBA渣处理系统设计[J].炼铁.2001(05)
[2]王欢文,吴红英,常艳琴,陈艳丽,胡中爱.石墨烯的叔丁基对苯二酚修饰及其增强的电容行为[J].科学通报,2011,06:446.
[3]陈瑞宜.非互易光波导的若干基础问题研究[D].浙江大学,2013.
[4]郭敏.江南园林声景主观评价及设计策略[D].浙江大学,建筑设计及其理论,2014,博士.
[5]何希勤,黎明,张化光,李玉亮.一类模糊系统全局稳定的几个充分条件[J].控制与决策,2000,06:731-733.
[6]玄洪雷.广泛性焦虑障碍患者情绪面孔无意识加工的事件相关电位研究[D].大连医科大学,神经病学,2012,硕士.
[7]刘亚川.悬架液压衬套有限元分析与基于AMESim的隔振性能优化[D].吉林大学,车辆工程,2013,硕士.
[8]冯华,薛鹏.中国高速铁路的综合效益与支持政策探析[J].广东社会科学,2011,03:12-19.
[9]左田甜.混合动力拖拉机的动态特性研究[D].南京农业大学,机械设计及理论,2012,硕士.
[10]杨从戎.大黄鱼“东海1号”选育群体F_6代遗传多样性的同工酶、RAPD、SSR分析[D].宁波大学,渔业（专业学位）,2014,硕士.
[11]张霜,张育新,马克明.保护性的蚂蚁-植物相互作用及其调节机制研究综述[J].植物生态学报,2010,11:1344-1353.
[12]常战芳,安丰涛.宣钢高、焦炉煤气计算机网络监测系统[J].冶金自动化,2004,02:51-53.
[13]张桂录.高空间—高光谱分辨率的遥感图像城市场景分类识别研究[D].哈尔滨工业大学,信息与通信工程,2014,硕士.
[14]杨吴生.钢管活性粉末混凝土力学性能及其极限承载力研究[D].湖南大学,材料学,2003,硕士.
[15]方秀娜.论苏雪林作家批评的多重色彩[D].牡丹江师范学院,文艺学,2012,硕士.
[16]陈丽萍.论知识工作者管理[D].苏州大学,马克思主义哲学,2003,硕士.
[17]胡焕焕.关于高校教师学术权力及其法律规范的研究[D].苏州大学,高等教育学,2013,硕士.
[18]全建升.煤矸石二灰混合料在路面基层中的力学性能研究[D].河北工程大学,结构工程,2012,硕士.
[19]彭清.我国烤烟烟叶化学成分特征分析及香型空间分布格局研究[D].西南大学,土壤学,2013,硕士.
[20]郝志谋.含铜金属—有机骨架材料的制备及性能[D].北京化工大学,化学工程与技术,2013,硕士.
[21]药婷.立体裁剪与平面样板在服装设计中的应用[D].沈阳航空航天大学,设计艺术学,2013,硕士.
[22]梁敏慧1,渠岩2,崔亚娟2,李全霞2,陈兆天2,李东2.超高效液相色谱-同位素稀释质谱法测定配方奶粉中的生物素含量[J].食品科学.
[23]蒋宁,林露,王雷.考虑压降和多壳的换热网络集成[J].化工学报,2013,11:4128-4136.
[24]席蕾蕾.基于图像处理的大空间建筑火灾报警系统研究[D].长安大学,计算机技术（专业学位）,2013,硕士.
[25]李霞,杨春风,孙建诚,孙吉书.基于CDIO理念的道路勘测设计课程共享资源建设[J].当代教育理论与实践,2015,04:72-74.
[26]林闽.可持续发展视角下的绿色电力定价机制研究[D].云南财经大学,公共管理,2013,硕士.
[27]孙华东.“天人合一”思想在室内设计中的应用[D].西安建筑科技大学,艺术设计,2013,硕士.
[28]周哲达.《三国演义》方术研究[D].渤海大学,中国古代文学,2013,硕士.
[29]卫银虎.R上的锥及对应的分次扩张[D].广西师范大学,基础数学,2013,硕士.
[30]彭学仕.低温连续铸造的利弊分析[J].轻合金加工技术.1990(11)
[31]张璐.风险刑法理论建构的风险规避[D].山东大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[32]陈志程.草原旅游地旅游需求影响因素与时空分布研究[D].内蒙古师范大学,人文地理学,2013,硕士.
[33]孟繁桢.笛子与民族管弦乐《金色的山东》演奏技法与艺术表现探究[D].山东大学,音乐学（专业学位）,2013,硕士.
[34]吕亚宁.初中物理教学质性评价实践研究[D].河北师范大学,学科教学,2012,硕士.
[35]莫士净.新型有机膦酸锆ZrNCP的合成、表征及其性能研究[D].北京化工大学,化学,2013,硕士.
[36]邓丽艳,谢世波,杨永田,王书达.数据挖掘在电信网管中的应用研究[J].哈尔滨商业大学学报(自然科学版),2005,01:67-69+74.
[37]曾文君.基于多维谱特征的电离层杂波检测和识别方法研究[D].哈尔滨工业大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[38]倪卫达.基于岩土体动态劣化的边坡时变稳定性研究[D].中国地质大学,地质工程,2014,博士.
[39]张德干,尹国成,史元春,徐光祐,曾广平.普适计算中的无缝迁移策略[J].控制与决策,2005,01:6-10.
[40]展之宽.基于KDJ和MACD指标的触发式基金定投设计和可行性验证[D].兰州大学,金融（专业学位）,2013,硕士.
[41]丁建立,陈增强,袁著祉.基于自适应蚂蚁算法的动态最优路由选择[J].控制与决策,2003,06:751-753+757.
[42]林飞.原络通经法治疗脑卒中后认知功能障碍的临床观察[D].黑龙江中医药大学,针灸推拿学（专业学位）,2013,硕士.
[43]杨妍.河北省农业保险与农业信贷协同发展研究[D].河北经贸大学,金融学,2014,硕士.
[44]谢毓广,江晓东.储能系统对含风电的机组组合问题影响分析[J].电力系统自动化,2011,05:19-24.
[45]宋悦.融入惯导传感信息的地图匹配算法的研究及应用[D].北京交通大学,电子与通信工程（专业学位）,2013,硕士.
[46]陈桥,吴祯祺,吴刚.具有高介电常数低介电损耗三元杂化材料[A].中国化学会高分子学科委员会.2011年全国高分子学术论文报告会论文摘要集[C].中国化学会高分子学科委员会:,2011:1.
[47]周超.橡胶沥青混合料疲劳寿命关键影响因素分析[J].中外公路,2015,01:310-314.
[48]庞文聪.二氢杨梅素对副溶血性弧菌的抑菌机理探讨[D].广东工业大学,食品科学,2014,硕士.
[49]栗超超.个人—组织价值观匹配对工作绩效的影响研究[D].河北经贸大学,劳动经济学,2014,硕士.
[50]凌扬超.基于ANSYS平台转向架焊接结构强度可视化研究[D].西南交通大学,车辆工程,2013,硕士.