山东省猪瘟病毒流行株E2基因多态性分析和E2基因真核表达载体的构建及免疫原性鉴定

【摘要】猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染病,以高稽留热、皮肤和黏膜广泛出血为临床特征,死亡率极高。猪瘟的流行给全球养猪业造成了巨大的经济损失,严重影响了生猪及相关产品的进出口贸易。我国是世界上猪瘟的主要流行地区之一,以隐性感染和散发流行为主要特点,流行情况复杂。开展系统的猪瘟病毒流行病学调查,掌握猪瘟流行毒株变化规律和变异程度,研制新型猪瘟疫苗,对我国猪瘟防控工作有着极其重要的意义。具体研究内容和结果分为以下三部分：1.山东省猪瘟病毒流行毒株的分离和鉴定本研究以2011年至2012年在山东省规模化猪场采集的656份样品为研究对象,通过RT-PCR技术检测样品中是否含有猪瘟病毒,结果136份样品中检出猪瘟病毒,阳性率为20.66%。该结果说明山东省内规模化猪场普遍存在猪瘟病毒感染。将检出的阳性样品接种PK-15细胞,分离病毒,并通过RT-PCR和real-timePCR进行鉴定。2.山东省猪瘟流行毒株E2基因多态性研究为了进一步了解山东省内猪瘟的流行特点,通过RT-PCR手段获得分离毒株的E2基因序列,然后将序列与参考毒株的E2基因序列进行比对,分析流行毒株的基因多样性。结果共分离获得9株2.1亚型猪瘟病毒毒株且彼此的同源性极高,而分离毒株与疫苗株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为79.5-81.6%和81.2-85.9%。这些数据表明山东省猪瘟流行毒株与疫苗毒株已有较大差异,并且继续在向远离疫苗株的方向进化。3.猪瘟病毒E2基因真核表达载体的构建及免疫原性鉴定为了研究E2基因变化对其表达产物的免疫原性影响,我们将不同长度E2基因片段插入真核表达载体pVAX-1中,构建了一系列重组真核表达载体并分别命名为pVAX-999rE2、pVAX-900rE2、pVAX-540rE2,首先通过RT-PCR检测和间接免疫荧光试验,验证重组真核载体能否在PK-15细胞内表达,然后免疫小鼠,通过ELISA试验和淋巴细胞转化试验来评估重组真核载体的免疫原性。研究结果为：经RT-PCR检测和间接免疫荧光试验验证,重组真核载体能够在PK-15内有效表达；动物试验数据显示E2蛋白的996-1010位氨基酸对小鼠的细胞免疫有重要影响,如果该部位发生变异,可能会影响E2蛋白的免疫原性,而870-990位氨基酸对E2蛋白的免疫原性影响不大;重组载体pVAX-999rE2免疫效果理想,可作为CSFDNA疫苗备选分子。
【作者】邹海涛；
【导师】兰邹然；姜平；
【作者基本信息】南京农业大学，预防兽医学，2013，硕士
【关键词】猪瘟病毒；E2基因；分子流行病学；免疫原性；真核表达载体；

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