检测西瓜噬酸菌和稻黄单胞菌的环介导等温扩增技术及荧光定量PCR方法的建立

【摘要】西瓜噬酸菌(Acidovoraxcitrulli)、水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzicola,Xooc)和水稻白叶枯病菌(Xanthomonasoryzaepv.oryzae,Xoo)均为我国重要的检疫性种传细菌病害。目前,西瓜噬酸菌已对我国的瓜类生产及相关产业构成了极大的威胁,而稻黄单胞菌也对粮食生产带来了不利的影响。鉴于此,建立简便、快捷、高效的检测技术是防治这三种病害传播扩散的有效措施。本实验采用了Taqman荧光定量PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)两种检测方法,针对这三种病原物分别设计了特异的探针和引物,并对其纯培养物和实地样品进行了特异性、灵敏度、实地样品等方面的检测,同时对比评价了这两种检测手段。结果表明：在A.citrulli的检测中,LAMP技术和荧光定量PCR方法均可有效的区分开Acidovoraxavenae(燕麦褐条病菌)、Acidovoraxfacilis(敏捷噬酸菌)、Acidovoraxkonjaci：魔芋噬酸菌)及Acidovoraxcattleyae(卡特莱兰褐斑病菌)等亲缘近种,且检测到的种子带菌率为0.1%(1/1000),另外,可从13种新疆市售种子中检出6份种子携带A.citrulli。在水稻细菌性条斑病菌和白叶枯病菌的检测中,探针Xooc-Probe及Xoo-Probe均有效的区分开了白叶枯病菌和条斑病菌,LAMP技术同样实现了特异性扩增,对健康水稻种子和发病区的种子进行检测,条斑病菌的两种检测方法均可从2份市售种子中检出2份种子携带条斑病菌,从2份自然发病种子中检出1份种子带菌,从7份发病区接种白叶枯病菌获得的种子中检测到0份种子带菌。白叶枯病菌的两种检测手段可从2份市售种子检出0份种子携带白叶枯病菌,从2份自然发病种子中检出1份种子带菌,从7份发病区接种白叶枯病菌获得的种子中检测到4份种子带菌。对于Taqman荧光定量来说,三种病原菌最终检测限度均为2.0×101cps/μL,而LAMP的检测最低限均为2.0×102cps/μL,显然荧光定量的检测灵敏度比LAMP高10拷贝数。另外在本实验中,荧光定量的检测时长为2h,环介导等温扩增技术的检测时长为40min～60min,在特异性相同、实地样品检测结果一致的情况下,综合考虑检测周期、检测成本和应用性等特点,环介导等温扩增技术更适合植物病原物的检测,亦更适于基层检疫机构的推广应用。
【作者】白飒；
【导师】胡白石；
【作者基本信息】南京农业大学，植物病理学，2013，硕士
【关键词】西瓜噬酸菌；稻黄单胞菌；LAMP；荧光定量；检测；

【参考文献】
[1]林彦.长时间热暴露及合金化对Laves相NbCr_2合金热稳定性的影响[D].南昌航空大学,材料学,2013,硕士.
[2]涂润林.基于光物性的鸭梨黑心病无损检测方法的研究[D].中国农业大学,农产品加工及贮藏工程,2004,硕士.
[3]牛华.中国移动3G客户满意度模型及影响因素分析[D].首都经济贸易大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[4]董敏杰,李钢,梁泳梅.中国工业环境全要素生产率的来源分解——基于要素投入与污染治理的分析[J].数量经济技术经济研究,2012,02:3-20.
[5]金海锦.韩国语汉字词与汉语词汇对比[D].复旦大学,亚非语言文学,2012,硕士.
[6]许万军.阻抗复合式消声器声学性能研究[D].哈尔滨工程大学,动力机械及工程,2012,硕士.
[7]顏敏翔.鍾文烝交遊及其未刊稿《乙閏錄》研究[D].复旦大学,中國古典文獻學,2012,硕士.
[8]马刚.柴附夏连煎治疗胆汁反流性胃炎（肝胆郁热兼脾胃虚弱证）的临床研究[D].成都中医药大学,中医内科学,2012,硕士.
[9]高阳.从韬光养晦到积极作为：中国南海政策的转变[D].华中师范大学,国际关系,2014,硕士.
[10]毛伟.铁路易燃货物运输在途安全检测关键技术的研究与实现[D].北京交通大学,2014.
[11]范绍南.双重审计对审计质量的影响[D].内蒙古大学,会计,2014,硕士.
[12]于猛.中国转型期的社会稳定研究[D].山东师范大学,马克思主义中国化研究,2013,硕士.
[13]陆建华.中铁二院产品产业化发展战略研究[D].西南交通大学,工商管理（专业学位）,2014,硕士.
[14]惠全.碳纳米纤维基负载ZnO复合材料的制备及光催化性能研究[D].浙江理工大学,纺织工程,2014,硕士.
[15]苏荣福.国家人造板质检中心综合业务管理系统的研究与开发[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[16]司海宝,蔡正银.基于ABAQUS建立土体本构模型库的研究[J].岩土力学,2011,02:599-603.
[17]刘恩斌.上市公司财务困境影响因素实证研究[D].山东财经大学,会计（专业学位）,2014,硕士.
[18]聂凤仁.新型国产3英寸高压晶闸管及其应用[J].世界电子元器件.1997(08)
[19]王延贵,刘茜,史红玲.长江中下游水沙态势变异及主要影响因素[J].泥沙研究,2014,05:38-47.
[20]刘伟玮.土地利用变化与土地生态安全评价研究[D].中国地质大学（北京）,土地资源管理,2013,硕士.
[21]耿瑞婷.扇贝加工副产物制备海鲜调味汁的工艺研究[D].浙江海洋学院,食品加工与安全（专业学位）,2014,硕士.
[22]李玉玲,张仲超.电流型变流器在电网电压不平衡时的控制[J].电力系统自动化,2005,16:72-75.
[23]刘娟.心理契约视角下企业隐性知识共享影响因素模型研究[D].山东财经大学,管理科学与工程,2012,硕士.
[24]陈开元.公共财政视角下基本公共服务均等化初探[D].南京大学,社会保障,2013,硕士.
[25]韩雪.大岩桐开花相关基因的功能研究及花瓣发育过程中内源激素动态变化的定量分析[D].杭州师范大学,植物学,2013,硕士.
[26]高思宇.浅海声信道的信道响应估计研究[D].中国海洋大学,声学,2014,硕士.
[27]陈博.视频对象分割技术研究[D].西安电子科技大学,计算机应用技术,2004,硕士.
[28]龚翠玲.家庭异构网关研究与关键技术实现[D].南京邮电大学,电子与通信工程（专业学位）,2013,硕士.
[29]李子.Statistics in the Development of Pharmaceutical Products汉译实践报告[D].湖南师范大学,翻译（专业学位）,2014,硕士.
[30]刘炜华.集群行为异常检测及交通流预测[D].复旦大学,计算机软件与理论,2012,硕士.
[31]黄飞.基于飞机自身特性的我国民航飞机引进方式选择研究[D].北京交通大学,2013.
[32]苏婷.针刺联合二甲双胍治疗脾虚痰湿型青春期PCOS的临床观察[D].湖南中医药大学,中医妇科学（专业学位）,2014,硕士.
[33]王伟.举家外出农民工最低生活保障需求及制度构建研究[D].首都经济贸易大学,社会保障,2013,硕士.
[34]赵正平.固态微波毫米波、太赫兹器件与电路的新进展(续)[J].半导体技术,2012,01:1-8.
[35]孙圣龙.基于正弦激励算法的蓄电池内阻分析检测系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[36]陈东宁,姜万录.基于WinCC的冷连轧轧制数据库管理[J].冶金自动化,2007,04:50-53.
[37]傅景韫.减纱工艺对三维整体编织复合材料细观结构和力学性能的影响[D].天津工业大学,纺织工程,2004,硕士.
[38]谭瑞山.Li+HF→LiF+H立体动力学性质的准经典轨线理论研究[D].山东师范大学,原子与分子物理,2013,硕士.
[39]杨光.网络诽谤的刑法规制[D].黑龙江大学,法律,2013,硕士.
[40]高岩红.普定县农田土壤有机碳库演变特征及影响因素研究[D].西南大学,土壤学,2014,硕士.
[41]江征.稳定表达牛胰蛋白酶的MDCK细胞的构建及对流感病毒增殖影响的研究[D].中国食品药品检定研究院,免疫学,2014,硕士.
[42]邓彦翔.超临界直流锅炉水冷壁流动阻力研究[D].华中科技大学,动力工程及其自动化,2012,硕士.
[43]余华杰.煤矿逆向物流网络建模与优化研究[D].郑州大学,管理科学与工程,2013,硕士.
[44]梁尤轩,赵斌,姜川,杨俊和.垂直碳纳米管阵列的生长控制研究进展[J].化工进展,2014,06:1491-1497.
[45]张韫麒.我国上市公司的金融资产公允价值计量的会计信息含量实证研究[D].吉林大学,会计学,2014,硕士.
[46]李凤慧.面向电子商务的Web数据挖掘的研究[D].山东科技大学,2004.
[47]高娜.锡基复合负极材料的制备及性能研究[D].大连海事大学,2013.
[48]刘勇.基于特征和约束的二维零件视觉反求技术研究[D].哈尔滨工业大学,机械电子工程,2013,硕士.
[49]潘维越,赵汝梅.铁路No.7信令网建设[J].铁道通信信号.2000(12)
[50]叶林松.教育局人力资源管理系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.