绿豆凝集素的分离提取及其部分性质研究

【摘要】凝集素(Lectin)是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球（含血型物质），故名凝集素。凝集素在动、植物体内广泛存在。凝集素具有糖基结合特异性，一种凝集素仅对某一种特定的糖基专一性结合，因此凝集素可以作为探针等研究工具，并且研究凝集素的特异性有助于以分子或原子层次了解生命现象或病理变化。本文对绿豆凝集素进行了分离提取及纯化，并对其部分基础性质进行初步研究。绿豆凝集素的凝集活性检测采用凝血法检测，对新鲜兔血红细胞进行处理，戊二醛浓度0.15%(V/V)，固定时间为20min；胰蛋白酶浓度25U/mL，25℃处理15min；提高了兔血红细胞凝集灵敏度且延长了兔血红细胞保存时间。绿豆凝集素的提取采用磷酸盐缓冲溶液(PBS)，最佳浸提溶液条件：0.2mol/L、pH7.2PBS。将绿豆干粒粉碎100目，以料液比0.09（浸提液为1），NaCl浓度0.3mol/L，浸提时间4.16h，20℃下浸提，所得粗提液中绿豆凝集素比活力137.4U/mg。对绿豆凝集素粗提液进行硫酸铵双重盐析，收集50%~60%饱和度沉淀，凝集素比活力达到805.9U/mg。采用PEG600-硫酸铵双水相体系，PEG600质量分数15%，硫酸铵质量分数25%，绿豆凝集素样品浓度8mg/mL，萃取后绿豆凝集素凝血活性达到1307.8U/mg。经过葡聚糖凝胶过滤后凝集活性为1961.9U/mg。绿豆凝集素具有较强的抗热处理能力，对酸有一定的耐受性，在低pH下依然能保持凝集活性，但是碱性条件下耐受性较差，在pH为8.11的条件下很快失活，在pH6.5~7.5之间具有最大凝集活性。绿豆凝集素SDS-PAGE电泳显示两条带，凝集素分子量约156.33KDa。紫外吸收光谱显示具有特征吸收峰为234nm和275nm。
【作者】黄泽华；
【导师】曹龙奎；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，农产品加工及贮藏工程，2014，硕士
【关键词】绿豆凝集素；分离纯化；性质研究；

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