qPCR方法检测不同条件下重组乳杆菌的pLA质粒拷贝数

qPCR方法检测不同条件下重组乳杆菌的pLA质粒拷贝数

作者:师大云端图书馆 时间:2016-11-13 分类:硕士论文 喜欢:3771
师大云端图书馆

【摘要】乳酸菌属于益生菌的一种,由于其益生作用明显,口服方便,所以近些年来乳酸菌作为口服疫苗的研究日益增多。作为一种新构建成功的乳杆菌质粒表达系统,表达量是其能否进行下一步研究的基础。为建立一种快速、准确、特异的重组乳杆菌表达质粒拷贝数的定量检测方法,根据SYBRGreenI荧光定量分析原理,对重组乳杆菌质粒拷贝数进行分析。借助计算机软件Oligo5对乳杆菌基因组和重组质粒DNA进行分析,设计特异性良好的引物,建立绝对定量的qPCR检测方法。利用该方法对重组乳杆菌质粒拷贝数进行测定。实验表明所建立的实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异、灵敏地确定重组乳杆菌质粒拷贝数。乳杆菌质粒拷贝数在非抗性培养条件依然可以稳定存在并始终保持的高拷贝的特性。为进一步研究发酵过程中质粒拷贝数和表达水平相关性提供可靠基础。为确定重组乳杆菌表达载体能否保持其原有的益生菌特性,在肠道定植并持续表达是其一项重要指标。利用目前通用的模拟消化实验方法,对重组乳杆菌进行体外模拟消化试验。实验表明,重组乳杆菌能在模拟的消化环境中保持原有的生长、表达的特性。为进一步应用于实体动物提供可靠基础。
【作者】王宇鹏;
【导师】侯喜林;
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学,预防兽医学,2014,硕士
【关键词】乳杆菌;实时荧光定量PCR;模拟消化;质粒拷贝数;

【参考文献】
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