腺病毒介导的hsp70过表达对H_2O_2诱导BRL细胞凋亡的保护作用研究

【摘要】氧化应激损伤会导致肝细胞发生凋亡。Hsp70具有分子伴侣、抗氧化及抗凋亡等生物学功能，可提高细胞的应激耐受性，保护细胞免受氧化和凋亡损伤。基于此，本试验采用腺病毒感染的方法，观察Hsp70过表达对H2O2诱导BRL细胞（Buffalo大鼠肝细胞）凋亡的影响。首先，选用不同浓度H2O2（250μmol/L、200μmol/L、150μmol/L、100μmol/L、50μmol/L、0μmol/L）作用BRL细胞2h后，分别采用WST-1法检测BRL细胞活力，AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率，WesternBlotting法检测胞内Caspase3蛋白表达量，通过上述试验筛选出诱导BRL细胞凋亡的最佳的H2O2作用浓度，接着以此浓度施加于BRL细胞，检测其蛋白质羰基含量和总SOD的活力，发现此H2O2作用后BRL细胞凋亡，同时也受到氧化损伤；然后，采用腺病毒感染各组细胞，将细胞分为六组：空白对照组（仅有培养液的BRL细胞），Ad-CMV-Null组（感染腺病毒空载体的BRL细胞），Ad-CMV-hsp70组（感染介导hsp70重组腺病毒的BRL细胞），H2O2组（H2O2处理的BRL细胞），Ad-CMV-Null+H2O2组（H2O2处理的感染重组腺病毒空载体的BRL细胞），Ad-CMV-hsp70+H2O2组（H2O2处理的感染介导hsp70重组腺病毒的BRL细胞），给予相应的处理后，分别采用荧光定量PCR检测细胞中Hsp70的mRNA表达丰度，WesternBlotting测定Hsp70蛋白表达水平及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cyt-c、cleavedCaspase3、Fas及Caspase8的表达量，流式细胞术检测细胞凋亡率。试验结果如下：（1）与空白对照组相比，150μmol/LH2O2作用于BRL细胞2h，可导致细胞活力下降（P<0.01）；细胞凋亡率升高（P<0.01）；凋亡关键蛋白Caspase3表达量升高（P<0.01），并被剪切激活成17kDa大小的片段；总SOD活性下降（P<0.05），蛋白质羰基含量升高（P<0.05），说明150μmol/LH2O2可诱导细胞发生凋亡，并引起细胞氧化损伤。（2）与H2O2组相比，Ad-CMV-hsp70+H2O2组hsp70的mRNA丰度高（P<0.01），Hsp70蛋白表达水平上升（P<0.01），Bcl-2蛋白表达量增加（P<0.01），Bax蛋白表达量无差异（P＞0.05），Cyt.c释放至胞质的蛋白量下降（P<0.01），cleavedCaspase3蛋白表达量下降（P<0.01），Fas蛋白表达量无差异（P＞0.05），cleavedCaspase8蛋白表达量显著下降（P<0.01），细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论如下：（1）150μmol/LH2O2作用于BRL细胞2h可诱导细胞凋亡，并引起细胞氧化损伤；（2）腺病毒介导的hsp70过表达可通过抑制外部死亡通路关键蛋白Caspase8的活化，调节内部死亡通路中细胞色素C释放至胞浆，增加抗凋亡蛋白Bcl-2的表达，并抑制“死亡蛋白”Caspase3的激活，最终保护BRL细胞，减少凋亡损伤。
【作者】王慧；
【导师】杨焕民；
【作者基本信息】黑龙江八一农垦大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】Hsp70；细胞凋亡；凋亡相关蛋白；氧化应激；

【参考文献】
[1]伍豪杰.4045/3003铝合金双金属管复合挤压成形工艺研究[D].湖南大学,材料加工工程,2013,硕士.
[2]邢颖.高职院校“学评教”测验的效度研究[D].宁波大学,教育管理（专业学位）,2014,硕士.
[3]骆正清,杨善林.层次分析法中几种标度的比较[J].系统工程理论与实践,2004,09:51-60.
[4]李宗浩,盛亲贻.计算机辅助设计(CAD)实质的拟议[J].五邑大学学报(社会科学版).1987(02)
[5]王国勋.山东省交通运输集团发展战略研究[D].山东大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[6]赵学田.基于超材料的RFID天线的设计与研究[D].杭州电子科技大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[7]肖一鸣,张林祥.重力归一化总梯度法在寻找油气中的应用[J].石油地球物理勘探,1984,03:247-254.
[8]孙文影.主管官员晋升意愿因素对城商行信用风险影响分析[D].山西师范大学,政治经济学,2013,硕士.
[9]赵月根.按电势定向的异步电机交交变频矢量控制系统[J].冶金自动化,1995,03:28-32.
[10]刘玉定.基于身份的陷门水银承诺的研究[D].西安电子科技大学,信息安全,2012,硕士.
[11]邓石峰.电针小海与下巨虚穴对DU模型大鼠ChAT及α7 nAchR的影响[D].湖南中医药大学,针灸推拿学,2014,硕士.
[12]陈方芳.泉州民营科技企业融资对策探讨[D].华侨大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[13]黄银春.导弹拦截飞机末端制导制导律和界栅的研究[D].哈尔滨工业大学,航天工程,2014,硕士.
[14]袁方.唯物史观视域下的历史虚无主义研究[D].安徽大学,马克思主义哲学,2013,硕士.
[15]泮海敏.SMS及其CA接口的设计与实现[D].浙江大学,2004.
[16]陈伟.基于顾客感知的民营快递企业服务质量评价实证研究[D].广东外语外贸大学,企业管理,2013,硕士.
[17]王昊.三星Galaxy系列智能手机的营销策略研究[D].大连理工大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[18]李飞.中国计算机服务外包的定位和模式研究[D].对外经济贸易大学,工商管理,2004,硕士.
[19]武丹丹.我国企业年金制度的优化研究[D].西北大学,财政学,2014,硕士.
[20]赵灵芝,张成孝.石墨烯作为活细胞生长基底的药效研究[J].化工新型材料,2014,05:210-212+215.
[21]王金艳.甲烷、氮气常压直接合成氨催化剂的制备及其性能研究[D].西北大学,化学工程,2014,硕士.
[22]李宝顺,顾春霞,包亚萍,李义丰.一种基于图像单应性矩阵的投影仪标定方法[J].安徽大学学报(自然科学版).
[23]刁少梅.《非诚勿扰》的奇观化误区及规避策略[D].河北大学,新闻与传播,2014,硕士.
[24]沈王仙子.亚邦集团扬州物流配送中心选址及布局规划[D].南京理工大学,物流工程,2012,硕士.
[25]张玉萍.基于ARM测试转台控制系统的设计[D].郑州大学,电磁场与微波技术,2013,硕士.
[26]马强.强震观测数据实时处理方法的研究[D].中国地震局工程力学研究所,防灾减灾工程及防护工程,2002,硕士.
[27]李广瑞.调距桨系统半物理仿真研究[D].中国舰船研究院,控制理论与控制工程,2014,硕士.
[28]王天成,高在瑞.一类带有时滞的不确定广义系统的切换渐近稳定性[J].自动化学报,2008,08:1013-1016.
[29]曹迪.中国童工法律保护问题研究[D].吉林大学,经济法学,2013,硕士.
[30]杨德鹏.会议电视工程设计初探[J].电信工程技术与标准化.1994(01)
[31]胡永生.太阳能与燃煤机组互补电站热力特性与集成机理研究[D].华北电力大学,热能工程,2014,博士.
[32]林枫,陈奕杰,詹伟.考虑剪切效应的六边形开孔蜂窝梁挠度研究[J].浙江水利水电学院学报,2015,01:42-45.
[33]刘彩虹.客运缆车安全保护装置的研制[D].武汉理工大学,机械设计及理论,2004,硕士.
[34]黎光明.多元概化理论及其在教学人员测评设计中的应用研究[D].江西师范大学,基础心理学,2004,硕士.
[35]朱小玲.网络环境下图书情报工作业务重心的转变[J].情报杂志,2004,02:105-106.
[36]高志婷.低价铁活化分子氧降解典型有机污染物的研究[D].华中师范大学,分析化学,2013,硕士.
[37]韩笑.电力行业上市公司自由现金流量与公司绩效关系的实证分析[D].首都经济贸易大学,企业管理,2014,硕士.
[38]阿依古丽·买买提.玛纳斯河流域灌区土壤盐化空间格局及其影响因素研究[D].新疆大学,环境科学,2013,硕士.
[39]杨冉.大学生雷锋精神培育存在的问题及对策研究[D].华中师范大学,思想政治教育,2014,硕士.
[40]苏斌.鼓浪屿的文化传承危机与对策[D].华侨大学,公共管理（专业学位）,2014,硕士.
[41]刘波.液压缸缓冲结构和缓冲过程的研究[D].浙江大学,2004.
[42]贝华,黄建武,吴文媛,黄伟文,袁奇峰,韩延星,朱闻博,庞伟,周栋良,欧阳南江.土地的弹性规划[J].规划师.2005(06)
[43]陈斌.中国学生对英语色彩词短语理解的研究——短语类型，学生水平及上下文的作用[D].广东外语外贸大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[44]唐佳.高清三维腹腔镜的光机系统设计及标定方法研究[D].浙江大学,光学工程,2014,硕士.
[45]戴艳萍.论常玉的绘画成就和市场神话[D].山东大学,设计艺术学,2013,硕士.
[46]邓兆慧.浅谈定格动画短片创作[D].中央美术学院,设计艺术学,2013,硕士.
[47]易娟.2’，3’-双脱氢-2’，3’-双脱氧腺苷和虫草素的化学合成研究[D].广东工业大学,应用化学,2013,硕士.
[48]李智鹏.磷酸铁锂电池荷电状态估算方法研究[D].浙江大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[49]李荣博.尼采哲学中的快乐问题研究[D].西北大学,美学,2014,硕士.
[50]杜斐.两宋“闲人”探究[D].西北师范大学,专门史,2013,硕士.