甘蓝型油菜不同硼效率品种BnNIP6；1s基因的克隆及其表达研究

【摘要】硼是植物生长发育所必需的微量营养元素之一。甘蓝型油菜(BrassicanapusL.)需硼较多,对缺硼敏感。本课题采用同源克隆的方法分离得到硼高效品种青油10号和硼低效品种Westar10中硼转运子AtNIP6;1的同源基因,并对不同硼处理两个品种苗期和花期不同部位BnNIP6;1s的表达谱进行了分析。主要获得以下研究结果：1.利用同源克隆法分离得到青油10号4个AtNIP6;1同源基因,Westar10中3个AtNIP6;l同源基因。通过与拟南芥、白菜和甘蓝中AtNIP6;1同源基因的比对和进行进化分析,将BnNIP6;1s分为两组,并分别命名为BnNIP6;1-1a、BnNIP6;1-1c、BnNIP6;1-2a、BnNIP6;1-2c,其中BnNIP6;1-1a和BnNIP6;1-1c与白菜染色体A02上的同源基因同源性更高,BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c与白菜染色体A07及甘蓝染色体C06上的同源基因同源性更高。同一品种BnNIP6;1s上游序列和内含子长度上有较大差异,但编码区序列差异很小。两个品种同一基因相似性为98.11%-100%,氨基酸序列相似性为94%-100%。上游序列和氨基酸序列比对结果都表明BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c与AtNIP6;l相似度较高。2.对土培盆栽试验青油10号和Westar10不同时期不同硼水平不同部位BnNIP6;1s的表达量进行RT-PCR分析,结果表明两个品种苗期三个硼水平BnNIP6;1s都主要在下部叶表达。轻度缺硼(B2:HWSB0.25mg/kg)和正常硼(B3：HWSB1.0mg/kg)处理BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c表达量均显著高于BnNIP6;1-1a和BnNIP6;l-lc.花期两个品种BnNIP6;1主要在茎中表达,其它部位表达量较少；严重缺硼(B1:HWSB0.1mg/kg)时两个品种茎中BnNIP6;1s表达量无显著性差异,轻度缺硼和正常硼青油10号BnNIP6;1s表达量显著高于Westar10。3.对土培盆栽试验青油10号和Westar10不同硼处理花期茎和花中BnNIP6;1s同源基因的表达进行RT-qPCR分析,结果表明花期两个品种茎和花中BnNIP6;1s具有不同的表达模式。缺硼处理青油10号茎和花中BnNIP6;1s表达量均显著增加；Westar10茎中BnNIP6;1s表达量均降低,花中BnNIP6;1s无显著变化。缺硼处理青油10号花期茎和花中BnNIP6;1-1c、BnNIP6;1-2a、BnNIP6;1-2c三个基因表达量均显著高于、Vestar10o无论在茎还是花中,青油10号中BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c的表达量均显著高于BnNIP6;1-1a和BnNIP6;1-1c,且缺硼条件下表达量显著增加,这表明缺硼时茎和花中BnNIP6;1-2a和BnNIP6;1-2c在硼的转运和再利用过程中可能起着重要作用。
【作者】常新菊；
【导师】石磊；
【作者基本信息】华中农业大学，植物营养学，2014，硕士
【关键词】甘蓝型油菜；硼转运；BnNIP6；1s；基因克隆；基因表达；

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