影响丁香假单胞菌冰核蛋白InaQ分泌活性效应基因的研究

【摘要】丁香假单胞菌是一种常见植物致病菌,可以引发多种植物产生超敏反应,而且该菌还是一种冰核细菌,可使植物在较高温度下产生冻害。诱发植物冻害的关键因素为其分泌的一种蛋白,冰核蛋白(Icenucleationprotein,INP)。本课题以一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌MB03为研究对象,构建了一个转座突变文库,对影响丁香假单胞菌冰核蛋白分泌的相关活性效应基因的进行了研究。丁香假单胞菌MB03是本实验室所分离保存的一株具有高冰核活性的丁香假单胞菌,其INP基因inaQ已完成克隆测序。本实验利用“自杀性”转座子pUT-miniTn5-Km2,采用双亲本接合的方法构建了丁香假单胞菌MB03的突变文库。根据inaQ基因序列设计引物扩增得到其N端,连接pET-28a表达载体,获得INPN蛋白并制备其抗血清,然后利用免疫学方法对INP分泌进行分析。先用膜杂交的方法对突变文库中菌株进行初步筛选,从中筛选出INP分泌发生明显变化的菌株,再对这些菌株进行Cy5流式细胞仪检测验证,从而得到INP分泌明显增强和明显减弱的菌株。对突变菌株的转座子插入位点鉴定采用改进的TAIL-PCR方法,通过已知序列上3个嵌套的特异性引物分别和简并引物组合进行连续的PCR循环,选择性地扩增得到目标片段,扩增产物直接测序。通过TAIL-PCR,从几株InaQ分泌活性增强或减弱突变株中扩增到疑似插入位点侧翼基因。经对其测序和将测序结果与MB03基因组序列进行对比,最终鉴定出mini-Tn5插入失活的基因柠檬酸合成酶基因(gltA)、一种糖基转移酶基因和一种2-氧代酸脱氢酶基因等。本研究选取其中的柠檬酸合成酶基因(gltA)进行了表达补偿,通过Realtime-qPCR和Westernblot分析比较,测定了表达补偿菌株与野生菌株的冰核蛋白InaQ表达活性与表达量,初步证实gltA基因的中断可导致InaQ表达的降低。
【作者】王经；
【导师】李林；
【作者基本信息】华中农业大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】丁香假单胞菌；冰核蛋白；转座子；TAIL-PCR；柠檬酸合成酶基因；

【参考文献】
[1]周亚军.基于PGIS的社区警务管理系统的研究和实现[D].广东工业大学,电子与通信工程（专业学位）,2014,硕士.
[2]薛晓菲.狼疮性肾炎活动性病变与足细胞损伤关系的研究[D].青岛大学,内科学,2013,硕士.
[3]李世博.适应分布式电源接入的配电网调压策略研究[D].山东理工大学,电气工程,2013,硕士.
[4]孟冬梅.基于自由响应信号与神经网络的结构损伤识别研究[D].青岛理工大学,结构工程,2012,硕士.
[5]李佳.超高强度不锈钢的微观组织与断裂机制研究[D].南昌航空大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[6]许丹莉.云南电网省地两级调度AGC协调控制的研究[D].华北电力大学,控制理论与控制工程,2012,硕士.
[7]吴春珠.特异水泵试车目击记[J].江苏纺织.1994(07)
[8]耿金珂.访谈节目字幕翻译的质量控制[D].上海外国语大学,翻译（专业学位）,2014,硕士.
[9]卢博川.女性白色礼服的细节设计研究[D].苏州大学,艺术设计（专业学位）,2014,硕士.
[10]周翩翩.英语口语主语位置和句法复杂度关系的研究[D].大连海事大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[11]闫伟明.Mo/Ag层状金属基复合材料的制备及SERS研究[D].天津大学,材料学,2013,硕士.
[12]唐彬彬.解析“前沿930”的新闻故事化[D].苏州大学,新闻与传播（专业学位）,2013,硕士.
[13]周翔.我国食品企业社会责任竞争力研究[D].西南大学,企业管理,2013,硕士.
[14]李文海.WTS工程项目的质量管理研究[D].北京工业大学,项目管理（专业学位）,2013,硕士.
[15]陈遵友.新型轮毂电机的结构设计与拓扑优化及实验台架的设计[D].华南理工大学,车辆工程,2012,硕士.
[16]庄春燕.毛泽东政府形象思想研究[D].浙江财经学院,马克思主义中国化研究,2013,硕士.
[17]高文超.基于国内个人网上银行的可用性研究[D].北京邮电大学,设计艺术学,2013,硕士.
[18]闵勇.多尺度复杂生物网络的建模与分析[D].浙江大学,2010.
[19]刘颖,谷加存,卫星,许旸,王政权.树木不同着生位置1级根的形态、解剖结构和氮含量[J].植物生态学报,2010,11:1336-1343.
[20]郝金龙.MgO/Al_2O_3对南钢高炉渣性能的影响[D].重庆大学,冶金工程,2014,硕士.
[21]李红.窦房结动脉的影像学评价及其与病态窦房结综合征的关系[D].中国医科大学,内科学,2004,硕士.
[22]周琛.企业知识管理创新体系研究[D].中南大学,2004.
[23]韩囡.《太平御览》引《诗》考论[D].南京师范大学,中国古典文献学,2012,硕士.
[24]季林.微纳振幅信号检测技术研究[D].北京信息科技大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[25]武琳.级联型电力电子变压器控制策略研究[D].北京交通大学,2014.
[26]常继斌.洛阳餐饮旅游集团发展战略研究[D].河南科技大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[27]杨赛.《乐记》的整理与研究[J].南京艺术学院学报(音乐与表演),2014,03:46-50.
[28]赵绍娟.钨酸盐纳米材料的制备及其性质研究[D].安徽大学,无机化学,2013,硕士.
[29]陈颖.杭州服务外包竞争力及经济效应实证分析[D].浙江大学,国际商务（专业学位）,2013,硕士.
[30]岳芩.美国创业教育教师研究[D].西北师范大学,高等教育学,2013,硕士.
[31]仝艳菲.基于分块匹配的图像被动取证算法研究[D].西南交通大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[32]刘英男.基于GPRS电动汽车充电桩控制系统的研究[D].西安工业大学,控制工程,2014,硕士.
[33]李发本.三道庄露天矿配矿管理系统研究[D].西安建筑科技大学,2004.
[34]马状.马克思哲学实践观及其价值的当代阐释[D].东北师范大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.
[35]李如松.精镗和车削螺纹用的专用刀具[J].组合机床与自动化加工技术.1989(01)
[36]赵志江.基于集体备课的教师专业成长研究[D].河北师范大学,学科教学,2014,硕士.
[37]张微.五个棉花逆境相关锌指蛋白基因的功能初步分析[D].南京农业大学,作物遗传育种,2012,硕士.
[38]杜玉波.总结经验认清形势将省部共建工作不断引向深入——在2014年省部共建工作研讨会上的讲话[J].中国高等教育,2014,24:4-8.
[39]傅媛.中小板公司并购中股份流动性折价研究[D].北京交通大学,2014.
[40]邓自立.ARMA信号的自校正去卷平滑器[J].自动化学报,1989,06:523-530.
[41]贺芳.经济类英语学术论文引言研究—从宏观分析到微观分析[D].重庆大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[42]钱宁君.异地联合开发区建设的利益共享机制研究[D].兰州大学,区域经济学,2013,硕士.
[43]杨姣.移动Ad Hoc网络中虫洞攻击检测方法的研究[D].湖南大学,软件工程,2011,硕士.
[44]王锐军.浅埋煤层大采高综采工作面覆岩结构与来压机理研究[D].西安科技大学,采矿工程,2013,硕士.
[45]郁嬛君.铁路电力机车牵引运营成本研究[D].西南交通大学,交通运输规划与管理,2014,硕士.
[46]高霞.FeCP配位聚合物在活体分析化学中的应用研究[D].华南理工大学,2014.
[47]钟科,罗桑.沥青路面融冰化雪技术研究综述[J].公路交通科技(应用技术版),2013,05:268-270.
[48]周书萌.基于思维导图模式的高中英语写作教学研究[D].河北师范大学,外国语言学及应用语言学,2014,硕士.
[49]薛岩.地方高校绩效考核方式研究[D].渤海大学,教育学原理,2013,硕士.
[50]宋炜.转化甘油产二羟基丙酮菌株的筛选及发酵工艺的研究[D].安徽工程大学,微生物学,2012,硕士.