湖北省鸡源沙门氏菌的分离鉴定和耐药性分析

【摘要】沙门氏菌(Salmonella)是一种革兰氏阴性杆菌,可以引起鸡白痢、禽伤寒和禽副伤寒等沙门氏菌病,对我国养鸡业产生了巨大威胁。同时,沙门氏菌也能感染人,引起呕吐、腹泻,甚至是败血症等,严重危害了人的生命健康。近年来,抗生素在动物养殖中的广泛使用,导致了沙门氏菌多重耐药性的出现,这不仅会加大沙门氏菌病的防治难度,也会引发严重的公共卫生安全问题。本研究从湖北省24个县市地区送检样品中分离和鉴定鸡源沙门氏菌94株,并鉴定其血清型,通过药敏试验和耐药基因检测,初步掌握了鸡源沙门氏菌在湖北省内的分布情况以及其耐药表型,并探讨了分离菌株血清型与耐药表型之间的关系以及分离菌株耐药表型与其所携带耐药基因之间的关系。研究结果有利于指导合理应用抗菌药物,为鸡源沙门氏菌病的防治提供理论基础,同时为沙门氏菌引起的公共卫生安全和农产品安全问题的研究提供基础。疑似菌株的分离鉴定和分型试验通过观察细菌形态、生化特征以及PCR特异性扩增完成对沙门氏菌的鉴定工作。94株分离菌株血清型试验结果为：A群有49株(52.2%),均为甲型副伤寒沙门氏菌；B群有32株(34.0%),其中28株(29.8%)为乙型副伤寒沙门氏菌,4株(4.20%)为鼠伤寒沙门氏菌；D群有13株(13.8%),均为伤寒沙门氏菌。沙门氏菌分离菌株的耐药试验94株沙门氏菌分离菌株以及参考菌株都具有多重耐药性。其中对p-内酰胺类抗生素(头孢哌酮、复方阿莫西林、头孢噻吩、阿莫西林、苯唑西林、青霉素)、对氨基糖苷类抗生素(安普霉素、庆大霉素、大观霉素、卡那霉素、链霉素)、对氯霉素类抗生素(氯霉素)以及对磺胺类抗生素(复方新诺明、磺胺甲嗯唑)的耐药率最高均为100%;对氟喹诺酮类抗生素(依氟沙星、氟甲喹、奥索利酸)的耐药率为46.3%-97.9%；对四环素类抗生素(多西环素、四环素)的耐药率为52.6%-74.7%；其他类抗生素(呋喃妥因、多粘霉素E、红霉素、林可霉素、泰洛星、普那霉素、夫西地酸、利福平、甲硝唑)的耐药性为3.16%-100%。沙门氏菌分离菌株耐药基因的检测分别对94株分离菌株和参考菌株的DNA进行耐药基因的检测,包括2种p-内酰胺类耐药基因(blaTEM、blaPSE)、8种氨基糖苷类耐药基因(aadA2、aadA2、aadB、aacC2、aac(3)-IV、aph(3)-Ⅲ,armA、rmtB)、5种氟喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA、aac(6)-Ib-cr)、4种四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC、tetG)、3种氯霉素类耐药基因(catA1、floR、cmlA)以及3种磺胺类耐药基因(sulⅠ、sulⅡ、sulⅢ)等25对耐药基因。扩增结果表明耐药基因blaTEM、aadA2、catAl、sulⅡ在95株沙门氏菌中均存在；另外,有71株(74.7%)沙门氏菌检测出有tetA基因,有65株(68.4%)沙门氏菌检测出有aadA1基因,21株(22.1%)沙门氏菌检测出有qnrB基因。但耐药基因aacC2、aac(3)-Ⅳ、aph(3)-Ⅲ、armA、qepA、aac(6)-Ib-cr、tetB、tetC、tetG、floR、cmlA、sulⅢ在所有沙门氏菌中均未检测到。分析沙门氏菌的耐药表型和其耐药基因的检测的结果,抗生素的耐受率的最大值与其耐药基因检出率的最大值相一致,即存在该类抗生素的耐药表型,就能检测出该类抗生素的耐药基因,如沙门氏菌对氨基糖苷类抗生素的耐药率范围较大,对安普霉素(APR)的耐药率为0,对庆大霉素(GEN)、大观霉素(SPE)以及卡那霉素(KAN)的耐药率为4.21%-9.47%,但对链霉素的耐药率高达100%(95株)。与该表型对应的耐药基因的检出率最大值为100%(aadA2、aadB),但对armA、rmtB的检出率为O。沙门氏菌对氨基糖苷类抗生素的耐药率最大值与该类基因的检出率最大值均为100%,同时氨基糖苷类抗生素的耐药率最小值与该类基因的检出率最小值均为0。以上结果分析表明,第一,鸡源沙门氏菌在湖北省各地区的分离率为9.52%,其中甲型副伤寒沙门氏菌在湖北地区最为常见；第二,所有分离菌株都具有多重耐药性,尤其是对p-内酰胺类等常用抗生素有较强耐药性；第三,耐药表型与沙门氏菌的血清型并无直接关系；第四,沙门氏菌的耐药表型与其所携带的耐药基因之间存在相关性,沙门氏菌胞内所携带的耐药基因直接影响它的耐药表型。
【作者】方翟；
【导师】程国富；
【作者基本信息】华中农业大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】湖北省；鸡；沙门氏菌；血清型；耐药性；耐药基因；

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