MiRNA-130a在小鼠卵泡发育过程中的表达和对颗粒细胞增殖和凋亡的影响

MiRNA-130a在小鼠卵泡发育过程中的表达和对颗粒细胞增殖和凋亡的影响

作者:师大云端图书馆 时间:2016-08-10 分类:硕士论文 喜欢:838
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【摘要】MicroRNA是一种细胞内源性的非编码RNA分子,长度约22-24个nt。它对基因表达主要起到负调控作用,可以抑制特定基因的翻译或介导其mRNA的降解,从而参与细胞增殖、分化和凋亡等过程的调控。随着microRNA研究的不断深入,近年来发现利用基因敲除或条件性基因敲除小鼠模型,发现microRNA及其信号途径在卵泡发育过程中也具有重要的调节作用。MicroRNA在小鼠卵巢中直接或间接调节靶基因或卵泡发育基因mRNA的表达,从而参与小鼠卵泡发育过程。本实验以小鼠为实验对象,通过realtimePCR检测mir-130a在小鼠不同发育阶段中卵泡和卵泡颗粒细胞中的表达水平,来揭示mir-130a在小鼠卵泡中的表达规律及推测其可能起到的作用。然后利用小鼠卵巢颗粒细胞体外培养模型,用mir-130a的模拟物转染颗粒细胞,进一步研究了mir-130a对颗粒细胞增殖和细胞凋亡的影响。研究内容及实验结果如下:1.mir-130a在小鼠卵泡不同发育阶段中的表达具有差异性。分别取新生小鼠出生后12d,21d,21dPMSG48h,21dPMSG48hhCG6h的卵泡提取RNA,通过Q-PCR检测mir-130a的表达水平,发现mir-130a在小腔前卵泡(100~130μm)中的表达水平最高,此后在大腔前卵泡(200~280μm)、有腔卵泡(450~550μm)、成熟卵泡(500-600μm)中的表达水平一直显著下调(P<0.05)。2.mir-130a在小鼠不同发育阶段的卵泡颗粒细胞中差异性表达。通过realtimePCR结果表明:与小腔前卵泡(100~130μm)颗粒细胞的表达水平相比,mir-130a在大腔前卵泡(200~280μm)颗粒细胞中的表达水平显著下调(P<0.05),此后在有腔卵泡(450-550μm)颗粒细胞中的表达水平也是显著下调(P<0.05),而在成熟卵泡(500~600μm)颗粒细胞中的表达水平却显著上调(P<0.05)。我们发现mir-130a在不同发育阶段的卵泡颗粒细胞中的表达规律与其在不同发育阶段的卵泡中的表达规律是不一致的。3.mir-130a对颗粒细胞的增殖没有影响。从新生小鼠21天后注射PMSG48h,hCG6h的卵巢中获取成熟卵泡颗粒细胞,经过体外颗粒细胞培养和传代后,用mir-130a的模拟物转染颗粒细胞,利用酶标仪检测颗粒细胞的增殖水平。结果显示:mir-130a的模拟物对颗粒细胞的增殖水平没有显著的影响作用。这一结果暗示mir-130a可能不参与颗粒细胞的增殖过程。4.mir-130a抑制颗粒细胞的凋亡。从新生小鼠21天后注射PMSG48h,hCG6h的卵巢中获取成熟卵泡颗粒细胞,直接原代培养,用mir-130a的模拟物转染颗粒细胞,利用流式细胞仪检测颗粒细胞的凋亡水平。结果显示:mir-130a的模拟物显著地抑制颗粒细胞的凋亡。这一结果暗示mir-130a能够抑制颗粒细胞的凋亡。
【作者】但意;
【导师】霍立军;
【作者基本信息】华中农业大学,特种经济动物饲养,2014,硕士
【关键词】mir-130a;小鼠;卵泡;颗粒细胞;表达;增殖;凋亡;

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