TMEM8C、CTRP3基因对C2C12细胞成肌分化的调控作用研究

【摘要】骨骼肌生长发育分子机理一直以来是农业动物遗传育种研究的重点内容之一。解析骨骼肌生长发育分子机理,对改良农业动物骨骼肌生长速度意义重大。已有的研究鉴定出了Pax3/7、Myf5、MyoD、MEF2等一大批调控骨骼肌生长发育的关键基因,基本揭示了骨骼肌生长发育的分子机理。但仍然还有很多未知的调控机制,一些调控骨骼肌发育的重要新基因,仍需要进一步鉴定。最近的研究报道表明跨膜蛋白TMEM8C调控肌细胞融合,在本研究中,我们对新发现的与肌细胞融合相关的TMEM8C基因以及与骨骼肌细胞分化密切相关的CTRP3基因的表达规律、转录调控以及对成肌细胞分化的调控作用进行了初步研究,取得的结果如下：(1)RT-PCR检测发现TMEM8C基因在骨骼肌组织中特异性表达；Q-PCR检测发现TMEM8C在C2C12成肌分化过程中呈上调表达规律：TMEM8C在C2C12增殖期表达水平很低；在分化1-4天,该基因呈逐渐上调表达趋势；分化第6天的表达水平比第4天略有降低。(2)SiRNA干扰TMEM8C的表达会抑制C2C12细胞分化,并且改变C2C12早期分化的细胞形态,细胞拉长且呈现丝状伪足。(3)亚细胞定位结果发现,TMEM8C在细胞增殖期定位于高尔基体上。(4)删除TMEM8C翻译起始位点-3787bp和-3752bp两个MyoD结合位点,TMEM8C启动子活性降低,表明该基因受转录因子MyoD正调控；翻译起始位点-287bp处的GA微卫星结构对TMEM8C的转录也具有一定的正调控作用。(5)RT-PCR发现CTRP3表达水平在C2C12细胞分化的0-4天呈逐渐上调表达趋势,第6天比第4天略有下降。(6)超表达CTRP3可增强C2C12细胞成肌分化narker基因Myogenin的表达水平,这表明过表达CTRP3能够促进C2C12细胞成肌分化。
【作者】赵元元；
【导师】李新云；赵书红；
【作者基本信息】华中农业大学，动物遗传育种与繁殖，2014，硕士
【关键词】骨骼肌；成肌分化；TMEM8C；CTRP3；转录调控；

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