伪狂犬病毒编码的MICRORNAS功能研究

【摘要】伪狂犬病毒(PRV)是α疱疹病毒亚科的重要成员之一,具有嗜神经性和潜伏感染性,给养猪业造成巨大的经济损失。在伪狂犬病毒的急性感染期或者裂解感染期,被膜蛋白VP16通过与宿主的细胞因子Oct-1和HCF-1结合从而激活立即早期基因IE180的转录和表达,进而调控一系列下游基因的表达和病毒的增殖。主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHCⅠ)可以识别和递呈病毒编码的内源性蛋白,发挥抗病毒免疫作用。病毒编码的microRNA(miRNA)在病毒生命周期中参与调控病毒基因的表达和病毒的增殖,也可以调控宿主细胞的凋亡、代谢和免疫。先前,我们实验室报道了PRV的长潜伏感染相关基因(LLT)可以编码11个成熟的miRNAs,但是这些miRNAs的具体功能还不清楚。本研究选择了病毒复制关键基因和宿主免疫识别基因作为研究对象,希望通过发掘作用于这些重要基因的microRNA加深对病毒致病机理的认识,为开发新的疫苗或药物提供理论指导。具体研究内容如下：1.通过生物信息学软件预测筛选到prv-mir-LLT7既可以结合MHCⅠ基因的3’UTR又可以结合PRV的VP16基因的YUTR,其中prv-mir-LLT7在VP16的3’UTR中有2个作用位点；预测筛选到PRV编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT7、prv-mir-LLT8、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT11等5个miRNRs可以作用于IE180基因。2.为了验证MHCⅠ基因和VP16基因是否被prv-mir-LLT7直接调控和确定prv-mir-LLT7作用MHCⅠ基因和VP16基因的位点,本研究使用双荧光素报告实验证实了prv-mir-LLT7既可以作用于MHCⅠ基因又可以作用于VP16基因,其中prv-mir-LLT7在VP16的3’UTR中有2个作用位点。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和流式细胞检测实验,发现prv-mir-LLT7可以下调MHCⅠ基因的转录和翻译。通过qRT-PCR和westernblot实验,发现prv-mir-LLT7可以下调VP16的转录和翻译；随后进一步检测发现prv-mir-LLT7还能够下调IE180的转录和翻译；通过miRNAinhibitor抑制prv-mir-LLT7后,qRT-PCR和westernblot实验结果表明prv-mir-LLT7inhibitor可以抑制prv-mir-LLT7对MHCⅠ和VP16基因的调控。3.我们使用qRT-PCR方法检测PRV感染上皮细胞后的prv-mir-LLT7的表达谱,分析了prv-mir-LLT7的表达与prv-mir-LLT7作用于MHCⅠ和VP16的相关性。通过一步生长曲线实验,结果显示prv-mir-LLT7在细胞感染PRV后9h时候可以降低PRV增殖。4.为了验证病毒编码的5个miRNAs是否直接作用IE180基因,本研究使用双荧光素酶报告实验。点突变实验和剂量依赖实验实验结果显示PRV编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT11可以直接作用于IE180基因。通过westernblot实验,发现PRV编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT1t下调IE180的表达。综上所述,PRV编码的prv-mir-LLT7可以调控猪的MHCⅠ基因和病毒的VP16基因的表达。该病毒编码的prv-mir-LLT1、prv-mir-LLT9和prv-mir-LLT11可以下调IE180基因的表达。我们推测α疱疹病毒进化了一个精妙和经济的维持合适感染状态策略。
【作者】唐崎；
【导师】陈焕春；刘正飞；
【作者基本信息】华中农业大学，预防兽医学，2014，硕士
【关键词】伪狂犬病毒；microRNA；MHCⅠ；VP16；IE180；LLT；

【参考文献】
[1]李克旻,白庆华.基于XML的知识管理系统的研究[J].管理信息系统,2001,01:39-43.
[2]宋丽哲,牛振东,宋瀚涛,师雪霖,孙一钢.数字图书馆的个性化服务[J].计算机工程,2004,03:46-48.
[3]尹晓辉.非酒精性脂肪性肝病与痰湿体质相关性研究[D].北京中医药大学,中医内科学,2014,硕士.
[4]范晓棠.肝硬化基础上肝癌的临床危险因素分析及肝癌与肝硬化微小RNA差异表达研究[D].新疆医科大学,内科学,2013,博士.
[5]陈静.以人为本的室内设计[D].青岛大学,设计艺术学,2013,硕士.
[6]吕永楼.某轻型客车采暖系统的研究[D].合肥工业大学,车辆工程,2013,硕士.
[7]纪昀.短片形态特征研究[D].南京航空航天大学,广播电视艺术学,2013,硕士.
[8]全然,简金宝,郑海艳.基于外逼近方法的中期机组组合问题[J].电力系统自动化,2009,11:24-28+103.
[9]冯彩云.太原市连锁零售企业用工问题研究[D].山西财经大学,企业管理,2013,硕士.
[10]王兆丰.参数化设计在概念汽车表皮中的应用研究[D].西南交通大学,艺术设计,2014,硕士.
[11]钱勇先,王慎中.重采样法高分辨率处理[J].石油地球物理勘探,1994,04:498-503+534.
[12]闫小会.《申报》视野下的清末立宪[D].吉林大学,中国近现代史,2014,硕士.
[13]韩洋.三种基于纳米过渡金属氧化物的电化学传感器构置及其应用[D].西北大学,分析化学,2013,硕士.
[14]张永芳.对国际税收情报交换问题的研究[D].东北财经大学,财政学,2003,硕士.
[15]孙文娟.汉语描写女性的语汇研究[D].山西师范大学,语言学及应用语言学,2013,硕士.
[16]新型.南航发现石墨烯表面有海水运动会产生电压[J].化工新型材料,2014,06:233.
[17]游哲.房地产上市公司多元化经营与企业绩效实证研究[D].山西财经大学,会计学,2013,硕士.
[18]华晓勇.数字式程序控制仪的应用[J].冶金自动化,1986,06:51-53.
[19]田野,邓宗全,唐德威,姜生元,全齐全,侯绪研.月球次表层取心钻具功耗特性及地面模拟实验[J].吉林大学学报(工学版).
[20]贾一帆.山西城乡收入分配差距与农村劳动力流动关系研究[D].山西财经大学,劳动经济学,2013,硕士.
[21]孙驰.铁路物资企业物流网络优化设计研究[D].北京交通大学,2013.
[22]李丽肖.基于沪深300的股指期货定价与实证分析研究[D].南京理工大学,金融学,2013,硕士.
[23]曹永岩,孙优贤.离散系统输出反馈强正实控制器综合[J].自动化学报,1998,01:87-91.
[24]凡鹏飞,张粒子,麻秀范,王睿.基于保险理论的输电可靠性裕度决策模型[J].电力系统自动化,2010,10:40-44.
[25]刘宗熹,章竟.由汶川地震看应急物资的储备与管理[J].物流工程与管理,2008,11:52-55.
[26]陶涛.太阳能板自动追光系统设计与实现[D].安徽大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[27]杨建玲.黄蜀葵查尔酮合成酶基因的克隆[D].中国农业科学院,生物化学与分子生物学,2004,硕士.
[28]卢晓晓.初中生尊重他人态度测评研究[D].华东师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[29]王亚楠.青少年的未来规划与朋友支持系统的关系[D].山东师范大学,应用心理（专业学位）,2013,硕士.
[30]庞岩.混合动力汽车再生制动与防抱死系统协调控制研究[D].山东大学,控制科学与工程,2013,硕士.
[31]敖丹.孤独的力量—尼采鲁迅对生命存在的审美关怀[D].湖北大学,西方美学,2011,硕士.
[32]张磊峰.低载荷机械振动对抗骨质疏松的人体实验研究[D].吉林大学,临床医学,2014,硕士.
[33]贺光前.对我国智能建筑行业及建筑智能化系统项目管理的研究[D].对外经济贸易大学,工商管理,2004,硕士.
[34]李燕.A Cognitive Semantic Analysis of the Basic Color Terms in Chinese[D].浙江大学,英语语言文学,2004,硕士.
[35]吴俊君,管贻生,张宏,周雪峰,苏满佳.仿人机器人视觉导航中的实时性运动模糊探测器设计[J].自动化学报,2014,02:267-276.
[36]刘蓓.新型血清髓过氧化物酶电化学免疫传感器的研究[D].重庆医科大学,2012.
[37]陶永胜.粗粒石英砂在围压条件下的破碎特性及其力学性能的研究[D].成都理工大学,岩土工程,2013,硕士.
[38]邓小清.功能分子器件整流性能的第一原理研究[D].中南大学,2011.
[39]林檬.细胞的磁修饰及其用于罗伊氏乳杆菌转化甘油的研究[D].华侨大学,微生物,2014,硕士.
[40]赵婧.事业单位养老保险制度改革研究[D].山西财经大学,社会保障学,2013,硕士.
[41]丁阳.铁路车辆防溜系统研究[D].西南交通大学,机械工程,2014,硕士.
[42]程世东.片段弓技术用于上颌双侧尖牙唇侧易位阻生的治疗[D].大连医科大学,口腔临床医学,2012,硕士.
[43]刘非洲.新疆某水泥厂烟气脱硝工艺方案优化选择[D].新疆大学,环境工程（专业学位）,2013,硕士.
[44]金珏.基于SWOT分析的浙北内河集装箱发展战略研究[D].浙江工业大学,2013.
[45]兰宇宁.公共财政框架下财政支出对社会公平的作用[D].天津财经大学,统计学,2012,硕士.
[46]宫文佳.实时环境下虚拟设备管理方法研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[47]王雪.数字S-K滤波器平滑处理方法研究[D].成都理工大学,测试计量技术及仪器,2013,硕士.
[48]刘朝辉.侵犯商业秘密罪若干问题探讨[D].中南民族大学,法律,2013,硕士.
[49]陈振华.企业核心竞争力的评估研究[D].武汉理工大学,2003.
[50]张旭东,詹毅,马永琴.不同信号的小波变换去噪方法[J].石油地球物理勘探,2007,S1:118-123+140+12.