矮牵牛PMADS3及其互作候选基因功能初步分析

矮牵牛PMADS3及其互作候选基因功能初步分析

作者:师大云端图书馆 时间:2016-07-26 分类:硕士论文 喜欢:3017
师大云端图书馆

【摘要】矮牵牛(Petuniahybrida)为茄科(Solanaceae)矮牵牛属(PetuniaJuss.)草本花卉,被广泛应用于园林中,同时它也是研究植物花发育遗传机理的重要模式植物之一。自上世纪九十年代以来,人们就对矮牵牛花器官发育机制展开了深入研究,并提出了花发育的ABCDE模型。其中,PMADS3是从矮牵牛中克隆出来的C功能基因,其组织原位表达固定在第三、四轮花器官上,同时具有花分生组织和花器官决定的功能,超量表达PMADS3基因会使野生型矮牵牛的花瓣上出现花药结构以及花萼心皮化,而PMADS3基因被抑制则雄蕊出现明显的瓣化。由此可见,PMADS3基因与第二、三轮花器官同源异型转换存在极大的关系,即与重瓣基因存在关系。因此,对矮牵牛PMADS3及其互作基因展开研究不仅对重瓣育种具有极其重要的意义,而且雄蕊瓣化性状还可以应用于创造不育系。为了进一步探索PMADS3在矮牵牛中调控花器官发育的具体途径,发掘出与其相互作用的相关调控因子,本实验将PMADS3全长的干涉载体转化矮牵牛,观测表型并进一步利用实时定量PCR技术分析在转基因植株中其他相关花发育基因的表达情况;同时从前期实验室筛选出的与PMADS3互作的基因中挑选5个,并采用Gateway技术构建了RNAi载体,利用农杆菌介导法转化矮牵牛,获得转基因植株并分析表型。实验主要内容及结果如下:1.PMADS3基因全长干涉载体转化矮牵牛分析表型。采用根癌农杆菌介导法将PMADS3干涉载体转化矮牵牛并利用PCR技术检测转基因植株。在获得的阳性植株中,有67%的植株表现出雄蕊不同程度的瓣化,同时子房增大,但空瘪、内陷明显,花柱短小,柱头顶端闭合,后期全部无法结实。2、转基因矮牵牛中其他相关基因的实时定量PCR分析。以GAPDH为内参基因,前期课题组筛选出的与单重瓣相关的表达基因为目的基因,实时定量PCR检测其在转基因植株中的表达水平。结果表明,在转干涉载体Phellsgate2-PMADS3的强表型植株和未转化对照植株之间,表达量差异显著的转录因子主要有FBP6,FBP7,PMADS3,PMADS4,PMADS9,PMADS15.其中,在转基因植株中下调表达的基因有FBP6,FBP7,PMADS3,PMADS4,PMADS9,上调表达的基因为PMADS15。目标基因PMADS3在转化植株中相对表达量仅为0.09,表现为极显著的下调表达。3、利用Gateway技术构建矮牵牛中与PMADS3互作的5个基因的RNAi载体。提取矮牵牛RNA,RT-PCR获得其cDNA,然后PCR扩增含有attB接头的目的基因,将attB-PCR产物与Phellsgate2表达载体在BP酶作用下进行重组反应获得RNAi载体Phellsgate2-AD23、Phellsgate2-AD30、Phellsgate2-AD35、Phellsgate2-AD63和Phellsgate2-AD66。4、矮牵牛PMADS3的互作候选基因转化矮牵牛。采用根癌农杆菌介导法将AD23、AD30、AD35、AD63、AD66共5个互作基因的干涉载体转化矮牵牛并利用PCR技术检测转基因植株,最终分别获得阳性植株25株、20株、23株、23株和27株。在获得的AD63转基因植株部分株系中,T0代在营养期叶片皱缩反卷,叶片变厚,整株呈莲座状,顶端分生组织消失;花期雄蕊弱瓣化,子房增大,略显皱缩,不饱满,后期仍然能够正常结实,但TO代种子活性降低。T1代植株开花期雄蕊瓣化现象得到了明显的加强,表现为雄蕊瓣化的强表型,花药顶端衍生出明显的花瓣状结构。其它四个基因转化的矮牵牛未得到明显表型。
【作者】韩雪萍;
【导师】包满珠;
【作者基本信息】华中农业大学,园林植物与观赏园艺,2014,硕士
【关键词】矮牵牛;PMADS3;互作基因;载体构建;遗传转化;实时定量PCR;

【参考文献】
[1]周德良.人类DNA序列8-mer模体进化差异及酵母核小体结合序列特征分析[D].内蒙古大学,物理学,2014,硕士.
[2]代红梅.郑州市金水区金融服务业发展研究[D].郑州大学,公共管理(专业学位),2013,硕士.
[3]刘洋.内蒙古移动WLAN网络性能质量分析系统的设计与实施[D].内蒙古大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[4]陈淑珍.Web文本挖掘中的特征表示与特征提取技术[J].三明高等专科学校学报,2004,02:53-57+87.
[5]于龙华.原发性开角型青光眼中枢视通路形态和功能的磁共振成像研究[D].第三军医大学,影像医学与核医学,2014,博士.
[6]崔巍.《合同法》第121条的理解与适用[D].中国社会科学院研究生院,民法(专业学位),2014,硕士.
[7]林培伟.抵押物转让制度研究[D].华侨大学,法律,2014,硕士.
[8]岳万祥.Ti_3AlC_2-La_2O_3/Cu复合材料的制备及其性能研究[D].燕山大学,材料学,2013,硕士.
[9]吴伟伟.面向敏捷询单处理的订单排程方法研究与应用[D].浙江大学,2005.
[10]张立芹.关于唐山地震波下的结构减震分析[D].山东大学,结构工程(专业学位),2013,硕士.
[11]邹伟明.云计算环境下基于MapReduce模型的任务调度算法研究[D].新疆大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[12]杨楠.大学生攻击行为与父母教养方式、个人防御方式及相关因素研究[D].山东大学,精神病与精神卫生学(专业学位),2013,硕士.
[13]李伟,杨俊,罗琴英.热压与超塑成形组合工艺研究[J].飞航导弹.2001(08)
[14]张灿华.基于主成分分析法的结构损伤识别研究[D].重庆交通大学,桥梁与隧道工程,2012,硕士.
[15]杨龙飞.基于T型三电平技术的储能变流器研究[D].北京交通大学,电气工程(专业学位),2013,硕士.
[16]袁泉,杨振坤,柴洁,王冬雁.早龄期H型钢混凝土梁受力性能试验研究及有限元分析[J].建筑结构学报,2014,03:193-200.
[17]毕超.矿用可移动式救生舱爆炸载荷下的结构强度研究[D].沈阳航空航天大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[18]王艳光.基于粗糙描述逻辑的语义网的研究[D].吉林大学,软件工程,2013,硕士.
[19]章勤.地铁施工洞室开挖稳定性的研究[D].中国地质大学(北京),地下建筑工程,2013,硕士.
[20]吴锦超.沪昆高速铁路贵州段岩溶隧道超前地质预报研究[D].西南交通大学,地质工程,2013,硕士.
[21]王志远,耿祥义.决策支持物流管理信息系统的设计与开发[J].大连铁道学院学报,2004,02:46-49.
[22]唐传纲.32例原发性双侧乳腺癌的临床特点分析[D].山东大学,外科学(专业学位),2013,硕士.
[23]路洪运.基于HEVC的质量可伸缩视频编码研究[D].北方工业大学,信号与信息处理,2014,硕士.
[24]张尔地.基于GSM/TD-SGDMA的高铁无线网络覆盖的研究[D].吉林大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[25]孙昊.涂层材料的红外脉冲热波检测与试验研究[D].辽宁工业大学,机械设计及理论,2013,硕士.
[26]顾海明.地球电离层波导系统中电磁波传播建模与仿真[D].哈尔滨工业大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[27]黄雪.铁路公益性服务会计核算研究[D].北京交通大学,会计学,2013,硕士.
[28]邢书涛.新型软钢阻尼器及其在结构控制中的应用研究[D].中国地震局工程力学研究所,防灾减灾工程及防护工程,2003,硕士.
[29]赵元旭.高性价比赢得信任[J].中国计算机用户.2007(13)
[30]施韬.掺矿渣活性粉末混凝土及其高耐久性的研究[D].浙江工业大学,材料学,2004,硕士.
[31]刘霞.QRS积分预测ST段抬高型心肌梗死急诊PCI近期预后的意义[D].大连医科大学,内科学,2012,硕士.
[32]臻楚.物探局召开1991年标准化工作会议[J].石油地球物理勘探,1991,02:238.
[33]娜青.中国电影海外传播问题与对策研究[D].内蒙古大学,新闻学,2014,硕士.
[34]杨雪.中国新石器时代筒形器研究[D].辽宁大学,考古学及博物馆学,2012,硕士.
[35]夏金华.高中生生涯发展现状及其干预研究[D].苏州大学,应用心理(专业学位),2013,硕士.
[36]杨帆.国外协调土地冲突的理论与实践研究[D].吉林大学,马克思主义发展史,2014,硕士.
[37]周海雷.锂渣复合粉煤灰混凝土抗氯离子渗透及早期收缩性能的试验研究[D].新疆农业大学,水利水电工程,2012,硕士.
[38]袁轶通.遵循先例与案例指导制度的比较研究[D].西南政法大学,法律史,2012,硕士.
[39]甘传文,褚志刚,陆小华.汽车排气消声器传声损失研究综述[J].农业装备与车辆工程,2014,01:49-54.
[40]陈敏,熊沂.我国研究型大学远缘跨学科研究的社会网络分析[J].高等教育研究,2015,01:19-23+61.
[41]叶徵.流通成本变动与制造业空间集聚[D].浙江工商大学,产业经济学,2013,硕士.
[42]吴洋.多媒体教学管理系统的设计与实现[D].西安科技大学,计算机技术,2014,硕士.
[43]南小莉.纪录片《敦煌》交替口译实践报告[D].西北师范大学,翻译,2014,硕士.
[44]温胜男.六合螳螂拳技击特征研究[D].中北大学,民族传统体育学,2013,硕士.
[45]付梅.成都青白江地区地下水化学变化特征及质量评价研究[D].成都理工大学,环境地质,2013,硕士.
[46]左希庆,李天真,卢健儿.基于国产吐丝机的头部定位控制系统的研制及应用[J].冶金自动化,2007,06:57-59.
[47]孙超.无居民海岛使用论证制度研究[D].中国海洋大学,环境与资源保护法学,2014,硕士.
[48]徐雅臣.辽宁省物流轴辐式网络设计问题研究[D].辽宁工程技术大学,产业经济学,2012,硕士.
[49]杜华丽,符雪文,温永平,仇泽君,熊丽梅,洪年章,杨云慧.基于石墨烯和金纳米笼修饰的无标记型微囊藻毒素免疫传感器的研制[J].分析化学,2014,05:660-665.
[50]郭志忠.电网自愈控制方案[J].电力系统自动化,2005,10:85-91.

相关推荐
更多