miR-486-3p靶向调控HAMP基因对肺癌H520细胞增殖的影响及分子机制研究

【摘要】目的：肺癌是一种高发病率、高死亡率的常见恶性肿瘤,病理类型以非小细胞肺癌为主；目前肺癌治疗的效果并不理想,急需加深对肺癌发生发展机制的认识,并寻找新的治疗方法改善其预后。HAMP基因编码的多肽hepcidin在铁代谢调节中起关键作用,并在多种恶性肿瘤中的表达存在异常。miRNA是一种单链非编码小分子RNA,在转录后水平调控基因表达。miR-486的表达情况对肺癌诊断及预后判断有重要意义。本研究旨在明确HAMP及miR-486-3p在非小细胞肺癌中的表达,阐明miR-486-3p对HAMP表达的调控作用,并观察二者对肺癌细胞生物学特性的影响,探讨其中的分子机制,为非小细胞肺癌发生发展的分子机制及治疗提供新思路和新方法。方法：应用免疫组化或荧光定量PCR方法分别检测了HAMP、miR-486-3p在非小细胞肺癌组织和多种非小细胞肺癌细胞株的表达。利用生物信息学软件分析二者之间的作用靶点,通过荧光素酶报告基因系统验证HAMP是miR-486-3p的靶基因。通过瞬时转染miR-486-3pmimics及inhibitor验证miR-486-3p对HAMP表达的调控作用。构建稳定表达miR-486-3p的肺癌H520细胞株,WST-8及平板克隆形成实验观察miR-486-3p对非小细胞肺癌细胞生物学行为的影响。检测H520-miR-486-3p细胞株中HAMP、ferroportin的表达、及细胞总铁含量,明确miR-486-3p影响H520增殖的分子机制。利用电感耦合等离子发射光谱法(ICP-AES)检测了非小细胞肺癌及正常志愿者血清中总铁含量。结果：在非小细胞肺癌组织及多种肺癌细胞株中,HAMP呈现高表达,miR-486-3p低表达。生物信息学分析miR-486-3p与HAMP3’UTR之间存在两个靶向结合位点。miR-486-3p可以显著抑制H520细胞株中转染了HAMP3’UTR质粒的荧光素酶活性和抑制HAMPmRNA的表达；在HBE细胞株中,miR-486-3pinhibitor可以抑制miR-486-3p活性,增强转染HAMP3’UTR质粒的荧光素酶活性和上调HAMPmRNA表达。高表达miR-486-3p可以显著抑制H520细胞的增殖,通过上调HAMP的表达可以逆转这种增殖抑制作用。在H520-miR-486-3p细胞株中HAMP表达下调、ferroportin表达上调、以及细胞总铁含量减少。非小细胞肺癌患者血清总铁含量低于正常志愿者。结论：miR-486-3p负性调控靶基因HAMP的表达,通过hepcidin-ferroportin-铁轴系统影响肺癌细胞铁代谢,从而抑制非小细胞肺癌细胞H520细胞的增殖。通过增强miR-486-3p或沉默HAMP表达的治疗思路有望使非小细胞肺癌患者获益。
【作者】吴显宁；
【导师】喻风雷；
【作者基本信息】中南大学，临床医学，2014，博士
【关键词】miR-486-3p；HAMP；非小细胞肺癌；细胞增殖；ferroportin；铁代谢；

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