RASSF1A基因在骨肉瘤中抑癌机制研究及其与Wnt信号通路关系

RASSF1A基因在骨肉瘤中抑癌机制研究及其与Wnt信号通路关系

作者:师大云端图书馆 时间:2015-11-19 分类:毕业论文 喜欢:2522
师大云端图书馆

【摘要】目的:骨肉瘤是由具有成骨潜能的骨间叶组织发展而来的恶性结缔组织瘤,也是原发性恶性骨肿瘤之中发病率最高肿瘤之一。骨肉瘤有高度软组织侵袭性以及远处转移倾向,在临床表现出高度恶性。RASSF1A是新近发现的抑癌基因,在骨肉瘤等多种肿瘤细胞中由于其启动子区高度甲基化导致表达缺失,但其对于骨肉瘤的抑癌作用及抑癌作用机制尚未阐明。本研究探讨RASSF1A基因对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、细胞周期、迁移及侵袭的影响,并在此基础上研究RASSF1A基因对骨肉瘤增殖迁移相关Wnt/β-catenin信号通路的作用,希望通过上述工作促进骨肉瘤靶向治疗的开展。方法:本项目构建抑癌基因RASSF1A重组腺病毒并感染骨肉瘤细胞,在细胞水平探讨RASSF1A基因与骨肉瘤的关系。首先利用免疫印迹法(WesternBlot)检测几种骨肉瘤细胞系中RASSF1A蛋白的表达情况;在没有RASSF1A基因表达的骨肉瘤细胞系MNNG/HOSCl中,利用腺病毒载体过表达RASSF1A,检测RASSF1A基因过表达对骨肉瘤增殖(MTT实验)、细胞周期、凋亡(流式实验)、迁移和侵袭(Transwell小室实验)的影响;定量PCR的方法分析RASSF1A对于骨肉瘤相关基因MMP7、C-myc、CyclinDl表达的影响。通过免疫印迹法分析RASSF1A对Wnt/β-catenin信号通路中几个关键蛋白的表达和磷酸化的影响;最后利用骨肉瘤裸鼠皮下成瘤模型对RASSF1A的抑癌作用进行了初步研究。结果:成功构建腺病毒穿梭载体pYr-Ads-4-shutter-RASSF1A,并通过腺病毒重组技术获得有感染能力的过表达RASSF1A基因的腺病毒。证明RASSF1A基因在不同来源的骨肉瘤细胞系中表达有差异,Saos-2及MNNG/HOSC1细胞系中低表达。进一步实验证明ASSF1A基因能够引起骨肉瘤细胞MNNG/HOSCl的细胞G1/S期阻滞、引起细胞增殖速度降低并促进细胞凋亡。同时感染RASSF1A腺病毒的MNNG/HOSC1细胞与对照腺病毒细胞相比,其侵袭、迁移能力也都明显受到抑制,并且MMP7、C-myc、CyclinD等促进肿瘤细胞增殖、迁移以及侵袭的关键基因表达量下调。细胞信号通路分析发现在骨肉瘤细胞系MNNG/HOSCl中过表达RASSF1A基因导致Wnt/β-catenin信号通路的关键蛋白β-catenin的降解和入核蛋白量减少,β-catenin的上游关键蛋白GSK3β磷酸化程度下降,MST1/MST2磷酸化水平上升。裸鼠皮下成瘤模型推测RASSF1A可能抑制肿瘤的生长。结论:RASSF1A在骨肉瘤细胞系MNNG/HOSCl中过表达之后能够抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移及侵袭,同时促进骨肉瘤细胞凋亡及引起细胞周期阻滞。RASSF1A通过抑制GSK3β磷酸化和促进β-catenin的降解,从而抑制Wnt/β-catenin信号通路。这一系列的研究结果将为基于RASSF1A的骨肉瘤特异靶向性基因治疗方案以及临床运用提供坚定的理论基础。图36幅,表10个,参考文献126篇。
【作者】臧晓方;
【导师】黄祖发;张朝跃;
【作者基本信息】中南大学,临床医学,2014,博士
【关键词】骨肉瘤;基因治疗;RASSF1A;抑癌基因;腺病毒;Wnt信号通路;

【参考文献】
[1]谢千帆.秉承高校优势,“走出去”工作攻坚求发展[J].出版广角,2014,16:29.
[2]金妮.顺应论对大学英语教师提问的解释性研究[D].沈阳师范大学,课程与教学论,2014,硕士.
[3]乔冠宇.快速反射镜闭环系统的自抗扰控制策略研究[D].中国科学院研究生院(长春光学精密机械与物理研究所),机械工程,2012,硕士.
[4]刘钦.约束梁高温后力学性能及其研究[D].北京建筑大学,防灾减灾及防护工程,2013,硕士.
[5]罗建军.基于结构式方程的广告效果测量[D].清华大学,企业管理,2003,硕士.
[6]范文田.《石油地球物理勘探》第三次入选为全国中文核心期刊[J].石油地球物理勘探,2001,03:381.
[7]赵莹.浅谈高校旅游英语课程教学方法[J].中国校外教育.
[8]张咏.基于产业集群的中小企业融资问题研究[D].安徽大学,工商管理,2013,硕士.
[9]朱文娇.整合型管理体系在化妆品行业的应用[D].华侨大学,工商管理(专业学位),2013,硕士.
[10]李莎.基于反义RNA技术降低发酵生产3-羟基丙酸中的副产物[D].北京化工大学,微生物与生化药学,2013,硕士.
[11]臧立伟.网栅切割式MEFP战斗部成型过程数值模拟研究[D].中北大学,兵器工程,2014,硕士.
[12]张海滨.农业政策性金融对农产品加工企业的金融支持问题研究[D].安徽大学,工商管理,2012,硕士.
[13]张昕晗.《通往学术卓越之路:世界一流研究型大学的创办》(第二章)翻译报告[D].四川外国语大学,翻译(专业学位),2013,硕士.
[14]曹旭辉.基于WIFI通信技术的矿井通风监测系统研究[D].西安建筑科技大学,采矿工程,2013,硕士.
[15]王菲.我国非营利组织产权问题研究[D].山东大学,行政管理,2013,硕士.
[16]陈萌.基于JMS的区域卫生信息平台前置机系统的研究与开发[D].湖南大学,电子与通信工程,2012,硕士.
[17]莫挺.支持浙江文化产业发展的财税金融政策研究[D].厦门大学,公共管理,2014,硕士.
[18]宋龙腾.卵孢白僵菌防治蛴螬及其固态培养条件优化[D].东北农业大学,农业昆虫与害虫防治,2013,硕士.
[19]郭利华.李斯文教授学术思想临床经验总结及对肺癌证治规律的研究[D].云南中医学院,中医内科学(专业学位),2011,硕士.
[20]张志亮.逆向工程开发技术及其在福田重卡车身开发中应用[D].大连理工大学,动力工程,2003,硕士.
[21]梅金顺,王润秋,于志龙,张译丹.基于ω循环型预条件共轭梯度法正则化的偏移成像[J].石油地球物理勘探,2014,05:892-898+819.
[22]李兰兰.滨海新区小学校操开展现状调查与案例分析[D].天津体育学院,体育教育训练学,2014,硕士.
[23]张清周.基于模型校核的给水管网漏失定位研究[D].哈尔滨工业大学,市政工程,2013,硕士.
[24]刘迅.城市轨道交通信号与安全门控制系统(ATI-BIDI)[J].铁道通信信号.2007(01)
[25]陈柳.FDI对中国产业内贸易影响的实证研究[D].杭州电子科技大学,国际贸易学,2014,硕士.
[26]袁新苗,楼飞燕,杜学文.高校《数控加工技术》课程的阶梯式立体化教学方法的探索[J].现代物业(中旬刊),2013,04:90-92.
[27]刘文白,周健.上拔荷载作用下扩展基础的颗粒流数值模拟[J].水利学报,2004,12:69-76.
[28]蒋博.马克思社会资本再生产理论视角下的我国产业结构优化[D].曲阜师范大学,马克思主义基本原理,2013,硕士.
[29]张讴.基于交际理论的学术论文摘要的英译[D].天津商业大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[30]于玲.冀中南经济区工业园区建设研究[D].石家庄经济学院,人口、资源与环境经济学,2014,硕士.
[31]朱帆.浙江上市企业转型及其绩效的实证研究[D].浙江工业大学,2012.
[32]张彩云.鲁米诺化学发光的理论研究[D].山西师范大学,药物分析,2013,硕士.
[33]李春龙.神光工程物理诊断组件通用柔性悬挂夹持装置设计与分析[D].哈尔滨工业大学,机械工程,2014,硕士.
[34]杨成祥.电子不停车收费系统车载单元(OBU)无线信号收发模块的设计[D].北方工业大学,电路与系统,2014,硕士.
[35]江海燕.硼中子俘获治疗中细胞损伤的Monte Carlo模拟与分析[D].合肥工业大学,课程与教学论,2004,硕士.
[36]周冲.宽带内直扩信号的快速盲检测和参数估计[D].杭州电子科技大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[37]纪承志.循环训练法提高大学生蛙泳学习效果的实验研究[D].河北师范大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[38]郑磊.社会主义新农村模式研究[D].华中师范大学,农村与区域发展,2014,硕士.
[39]周海洋.功能翻译论视角下的广告翻译探究[D].辽宁大学,英语语言文学,2012,硕士.
[40]李光伟.国产电脑横机电控系统中的关键问题研究[D].杭州电子科技大学,微电子学与固体电子学,2014,硕士.
[41]LiMARGARITA(玛格丽达).中俄初级汉语教材练习设计对比研究[D].西北大学,汉语国际教育(专业学位),2014,硕士.
[42]刘鎏.对美国总统奥巴马演讲中模糊限制语的研究[D].安徽大学,英语语言文学,2014,硕士.
[43]王硕.辅助学习PDA应用程序的设计与实现[D].电子科技大学,软件工程(专业学位),2012,硕士.
[44]赵朋可.熔融石英炉装置控制系统半实物仿真应用研究[D].河南科技大学,检测技术与自动化装置,2013,硕士.
[45]李世霞.我国旅行社规模及空间格局研究[D].首都师范大学,人文地理学,2013,硕士.
[46]赵博辉.发动机参数采集器系统设计与研究[D].西北工业大学,精密仪器及机械,2004,硕士.
[47]张雄伟.2-脱氧-D-核糖的合成工艺研究[D].浙江大学,制药工程,2014,硕士.
[48]赵斌.应用生物反应器建立双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞)生产工艺的研究[D].吉林大学,制药工程,2012,硕士.
[49]蔡登峰.中小学德育系统性研究[D].福建师范大学,教育,2003,硕士.
[50]陈云.氢致脱氧对Ti-47Al-2Cr-2Nb组织和性能的影响[D].哈尔滨工业大学,材料加工工程,2014,硕士.

相关推荐
更多