Hcy及其代谢关键酶基因多态性与河南汉族脑梗死的相关性研究

【摘要】目的：探讨同型半胱氨酸（homocysteine,Hcy）水平及亚甲基四氢叶酸还原酶（Methylenetetraphydrofolateruductase,MTHFR）、甲硫氨酸合成酶（Methioninesynthase，MS）、胱硫醚β-合成酶（cystathionineβ-synthase，CBS）基因多态性与河南汉族人群脑梗死的相关性，以及基因突变对同型半胱氨酸水平的影响，进一步确定遗传因素在高同型半胱氨酸血症及脑梗死发病中的意义。方法：选取年龄与性别基本匹配的脑梗死患者300例，健康对照组261例，运用循环酶法检测两组人群的血浆Hcy水平，采用酚-氯仿法提取外周血白细胞基因组DNA，应用聚合酶链反应（PCR）或-聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法，检测研究对象MTHFRC677T、MSA2756G及CBS844ins68多态位点的基因型，并进行测序验证，分析患者组和对照组中基因型、等位基因的频率分布特点，比较上述基因多态位点各基因型携带者之间血浆Hcy水平的差别及其与脑梗死的相关性。结果：1.河南汉族人群脑梗死患者血浆Hcy水平（19.3±7.2）umol/L高于对照组（15.1±4.9）umol/L，两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。按性别分层比较，男性、女性病例组的血浆Hcy水平均高于对照组，两组比较差异有统计学意义（P<0.01）。按卒中类型分层后比较，各卒中类型之间Hcy水平差异无统计学意义（P>0.05）。相关分析显示,血浆Hcy水平与脑梗死的发生相关(相关系数r=0.39,P<0.001)，进行血浆Hcy水平与脑梗死多因素的Logistic回归分析发现，高Hcy血症是河南汉族脑梗死的独立危险因素（OR=1.156,95%CI1.105-1.209,P<0.01)。2.MTHFRC677T三种基因型在病例组和对照组间的分布总体比较差异有统计学意义（P<0.01），其中突变纯合子TT型在病例组的分布频率31.6%显著高于对照组17.2%（2=24.122，P<0.001），TT基因型的优势比OR值为3.152（95%CI为1.98-5.017）；CT基因型在病例组的分布频率44.7%高于对照组42.2%（2=9，P<0.01），CT基因型的优势比OR值为1.819（95%CI为1.228-2.692）。病例组T等位基因（54%）显著高于对照组（38.3%），两组比较差异有统计学意义（P<0.01），T等位基因的优势比OR值为1.89（95%CI为1.489-2.399）；CC、CT和TT基因型相应的Hcy浓度分别为（15.5±4.7）、（17.0±5.5）和（19.8±8.6）umol/L，差异有统计学意义（P<0.01），TT型与CT型显著高于CC型（P<0.01)。相关分析显示MTHFR基因C677T多态性与脑梗死的发生相关(相关系数r=0.22,P<0.001)。Logistic回归分析结果显示，在调整传统危险因素后，MTHFRC677T基因突变是河南汉族脑梗死的独立危险因素（OR=1.578,95%CI1.013-2.457,P<0.05)。3.MSA2756G三种基因型在病例组和对照组间的分布总体比较差异无统计学意义（P>0.05）。病例组AA型254例，AG型43例，GG型3例；对照组AA型220例，AG型41例，GG型0例，AG基因型的优势比OR值为0.908（95%CI为0.571-1.445），GG基因型的优势比OR为0.988（95%CI为0.975-1.002）；两组G等位基因频率分别为8.2%和7.9%，差别无统计学意义（P>0.05），G等位基因的优势比OR值为1.043（95%CI为0.677-1.608）,三种基因型AA、AG和GG基因型相应的Hcy浓度分别为（17.6±6.7）、（16.2±5.5）和（20.0±5.9）umol/L，相关分析显示MSA2756G基因多态性与血浆Hcy水平无明显相关(相关系数r=0.036,P>0.05)，与脑梗死的发生无明显相关(相关系数r=-0.003,P>0.05）。Logistic回归分析结果显示，在调整传统危险因素后，MSA2756G基因突变与脑梗死的发生无相关性。4.在河南汉族人群中，CBS844ins68基因多态位点只存在两种基因型D/D型和I/D型，未检出II型，脑梗死组D/D型和I/D型频率分别为98.7%和1.3%，对照组分别为97.7%和62.3%，二种基因型在病例组和对照组间的分布总体比较差异无统计学意义（P>0.05），I/D基因型的优势比OR为0.574（95%CI为0.160-2.058）；两组I等位基因频率分别为0.7%和1.1%，差别无统计学意义(P>0.05），I等位基因的优势比OR为0.593（95%CI为0.163-2.063）。D/D基因型血浆Hcy水平为（17.36±6.61）umol/L，而I/D型血浆Hcy水平为（15.89±2.45）umol/L，两种基因型对应的血浆Hcy水平总体差异无统计学意义(P>0.05)，相关分析显示：CBS844ins68基因多态性与血浆Hcy水平无明显相关(相关系数r=0.21,P>0.05)，与脑梗死的发生无明显相关(相关系数r=0.22,P>0.05)。采用Logistic回归模型进行多因素分析，CBS844ins68基因突变不增加脑梗死的发病风险。结论：1.河南汉族人群血浆同型半胱氨酸水平与脑梗死相关，梗死亚型间无明显差异，高Hcy血症是河南汉族脑梗死的独立危险因素。2.MTHFRC677T基因突变与血浆Hcy水平升高及脑梗死呈正相关，提示MTHFRC677T基因突变可能是河南汉族人群脑梗死的遗传危险因子。3.在河南汉族人群中，MS基因A2756G基因突变与同型半胱氨酸水平无明显相关。MS基因A2756G基因突变与脑梗死的发生无明显相关。MSA2756G基因突变可能不是河南汉族人群脑梗死的遗传危险因子。4.在河南汉族人群中，CBS844ins68基因突变与血浆同型半胱氨酸水平无明显相关，CBS844ins68基因突变与脑梗死的发生无明显相关，可能不是河南汉族人群脑梗死的遗传危险因子。
【作者】李艾帆；
【导师】许予明；
【作者基本信息】郑州大学，神经病学（专业学位），2014，博士
【关键词】脑梗死；同型半胱氨酸；亚甲基四氢叶酸还原酶；甲硫氨酸合成酶；胱硫醚；β-合成酶；基因多态性；

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