不同佐剂对金黄色葡萄球菌CP8-FnBPB-ClfA多价毒力因子疫苗免疫效果影响的研究

【摘要】奶牛乳房炎(Bovinemastitis)是由于奶牛乳腺组织被外界因素所刺激而发生的炎症反应。奶牛患乳房炎后,乳腺组织遭到损伤,导致组织病变、乳中体细胞数增加、产奶量和牛奶品质下降。由于病原微生物是导致奶牛乳房炎的最主要因素,因此,本研究针对金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎,在本实验室过去的研究基础上,自制了CP8-FnBPB-ClfA金黄色奶牛乳房炎疫苗,并通过兔乳房炎模型对佐剂进行筛选,确定其免疫途径后,与CP8-FnBPB-ClfA配合免疫奶牛,评价其免疫效果,结果如下：1.在以前的基础上,提取出已被本实验室鉴定为血清8型S.aureus的荚膜多糖1.7970g,将含FnBPB-ClfA融合蛋白的质粒在大肠杆菌中表达并将其与CP8偶联,得到CP8-FnBPB-ClfA。2.以CP8-FnBPB-ClfA为疫苗,分别配合弗氏佐剂、铝胶盐水佐剂、脂质体佐剂和大肠杆菌不耐热肠毒素B(LTB)佐剂,对新西兰大耳白兔进行免疫,在免疫后不同时期,通过间接ELISA法和Westernblot对各组兔血清中的抗体进行监测,评价体液免疫效果；通过检测Th1/Th2类细胞因子水平检测及T淋巴细胞增殖试验评价细胞免疫效果。抗体检测结果显示,以脂质体为佐剂的试验组7d时开始产生抗体,产生抗体最早,但14d后抗体水平就开始下降；以LTB为佐剂的试验组抗体水平最高,持续时间最长。Th1/Th2类细胞因子水平检测结果显示,各试验组Th1/Th2类细胞因子水平均有不同程度的提高,以ALUM与LTB作为佐剂,免疫效果优于弗氏佐剂及脂质体试验组,但ALUM与LTB试验组差别不大。T淋巴细胞增殖试验结果显示,经ConA刺激后,各组T淋巴细胞普遍增殖,无显著差异,刺激指数都在1.0左右；用抗原刺激的组中,以LTB为佐剂的组T淋巴细胞增殖能力最强,刺激指数为2.23。在对免疫部位进行筛选后,进行攻毒试验。结果证实,3次免疫部位均为肌肉时,所产生的抗体滴度最高,能够在最大程度上提高Th1/Th2类细胞因子水平。攻毒试验结果所示,自制疫苗保护率可达80%。3.用铝胶盐水(ALUM)佐剂配合CP8-FnBPB-ClfA偶联物免疫本动物,通过检测发现,将免疫组与对照组相比,免疫组的体细胞数下降至正常范围或保持在正常范围内不变,对照组体细胞数升高超出正常范围或在非正常范围内不变；通过对免疫组与对照组乳汁中的细菌分离鉴定结果发现,免疫组乳汁中的金黄色葡萄球菌随免疫天数的增加逐渐减少,而对照组乳汁中的金黄色葡萄球菌随天数的增加呈逐渐增多的趋势。通过ELISA,评价奶牛血清及乳汁中的抗体水平,结果显示,免疫组血清及乳中的抗体水平,与对照组相比差异显著(p<0.05)。
【作者】杨岚；
【导师】郝永清；
【作者基本信息】内蒙古农业大学，预防兽医学，2014，博士
【关键词】金黄色葡萄球菌；奶牛乳房炎；疫苗；CP8-FnBPB-ClfA；佐剂；

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