17β-雌二醇联合去势建立大鼠慢性前列腺炎模型评价及神经内分泌分化初步研究

【摘要】目的采用17p-雌二醇联合去势建立SD大鼠慢性非细菌性前列腺炎模型(ChronicNonbacterialProstatitis,CNBP),评价造模结果。方法取2月龄SPF级雄性SpragueDawley(SD)大鼠80只,随机分为8组,即A组：空白对照组(blankcontrol)(n=10);B组：生理盐水组(saline)(n=10);C组：假手术组(shamoperation)(n=10);D组：单纯去势组(Castration)(n=10);E组：单纯17β-雌二醇(17β-Estradiol)(0.25mg/2ml/kg)(n=10);F组：17p-雌二醇(0.15mg/2ml/kg)(低剂量组)联合去势(n=10)、G组：17β-雌二醇(0.20mg/2ml/kg)(中剂量组)联合去势(n=10)；H组：17β-雌二醇(0.25mg/2ml/kg)(高剂量组)联合去势(n=10)。按照国际前列腺炎组织学诊断与分度标准评估造模结果,并分析不同浓度17β-雌二醇联合去势建模效果。结果大体形态观察可见H组大鼠前列腺与周围组织粘连较紧密,充血水肿,前列腺包膜不完整。光镜下观察见前列腺组织结构破坏,伴有不均匀淋巴样组织增生,前列腺导管破坏或者部分基底膜破坏,炎性细胞多成群状分布,可见淋巴小结或滤泡形成。D组、E组、F组及G组光镜下可见散在淋巴细胞及单核细胞浸润,表现为轻度或中度炎症。A组、B组、C组大鼠前列腺大体形态观察可见包膜完整腺体表面较光滑、平整。光镜下观察未见明显组织炎症表现。在评价炎症的核心指标方面,H组大鼠慢性前列腺炎组织学炎症分级与D组、E组、F组及G组比有统计学差异(P<0.05),表现出中、重度的炎症反应。而D组、E组、F组及G组两两相比无统计学差异(P>0.05)。炎症范围而言,H组大鼠慢性前列腺炎炎症分级同D组、E组、F组及G组比有统计学差异(P<0.05),表现出多灶性或弥漫性的炎症反应,而其他组表现为局灶性或多灶性表现。结论17β-雌二醇联合去势可以诱导建立SD大鼠慢性非细菌性前列腺炎(CNBP)模型,建模成功后组织病理学表现与临床非细菌慢性前列腺炎病理表现相似,其组织病理炎症与17β-雌二醇浓度有一定的正相关性。单一采用17p-雌二醇或者去势可以诱导大鼠前列腺产生轻度的、局灶性炎症,临床代表性较差。从评价炎症的核心指标来说,单一采用17β-雌二醇或者去势手术诱导的SD大鼠的慢性非细菌性前列腺炎效果不够稳定,不适合作为动物模型。背景及目的前列腺炎,特别是慢性前列腺炎(CP)一直是泌尿外科和男科的主要问题。该病发病机制尚不明确,而且治愈率低、复发率高,可以影响男性性功能及生殖功能,给患者身心健康及家庭带来不利影响,因此了解其发病机制对于慢性前列腺炎的治疗十分必要。目前有关慢性前列腺病因学研究多集中于病原学、尿液返流、上皮功能异常、神经内分泌异常等方面。近年相关研究表明,慢性前列腺炎的发生与神经内分泌之间有一定的联系。前列腺神经内分泌细胞(Neuroendocrinecell,NEC)又称胺前体摄取及脱羧(AminePrecursorUptakeAndDecarboxylation,APUD)细胞,研究发现前列腺神经内分泌细胞存在分泌上皮细胞之间,可以通过分泌激素多肽及5-羟色胺发挥作用,调节前列腺细胞生长及分泌活动。本文主要通过采用17β-雌二醇联合去势手术(双侧睾丸切除)建立SD大鼠非细菌性慢性前列腺炎(CNBP)模型,研究神经内分泌细胞重要标志性蛋白：嗜铬粒蛋白A(ChromograninA,CgA)、神经醇化酶(Neuronalspecificenolase,NSE)、神经生长因子(Nervegrowthfactor,NGF)及P物质(SubstanceP,SP)在慢性前列腺炎组织中的改变及其相关性,以了解神经分泌分化在慢性前列腺炎发病中的作用。方法利用建立的SD大鼠的慢性非细菌性前列腺炎动物模型,分别利用免疫组化组织化学(Immunohistochemical,IHC)、免疫印迹(Westernblot,WB)、酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELLSA)及实时定量PCR(Real-timequantitativePCR,qPCR)从蛋白及基因表达水平研究A组、B组、C组、D组、E组、H组不同组别大鼠神经内分泌细胞重要标志蛋白：嗜铬粒蛋白A(CgA)、神经醇化酶(NSE)、神经生长因子(NGF)及炎症相关P物质(SP)的变化,并分析嗜铬粒蛋白A(CgA)、神经醇化酶(NSE)、神经生长因子(NGF)分别与P物质(SP)的相关性。结果1.免疫组织化学结果显示CgA、CgA、NSE、SP在模型组H组表达较A组、B组、C组、D组、E组增强。2.免疫印迹半定量研究发现神经内分泌细胞代表性蛋白CgA、NSE、NGF在慢性前列腺炎模型组(H组)表达上调,与其A组、B组、C组、D组、E组比较有统计学差异(P<0.05)。3.酶联免疫吸附法定量检测大鼠血清模型组(H组)CgA、NSE、NGF、SP物质含量在慢性前列腺炎模型组(H组)表达上调,与其它各组两者相比有统计学意义(P<0.05)。相关性分析得出CgA与SP的表达成正相关性(γ,=0.35,P<0.01)；NSE与SP的表达成正相关(γ=0.29,P<0.01);NGF与SP的表达正相关(γ,=0.50,P<0.01)。4.实时定量PCR定量研究发现CgA(F=109.4)、NSE(F=68.4)、NGF(F=65.4).SP(F=61.1)在慢性非细菌性前列腺炎模型组中表达上调,与其他各组相比有统计学意义(P<0.05)。相关性分析得出CgA与SP的表达成正相关性(γ=0.45,P<0.01);NSE与SP的表达成正相关(γ=0.53,P<0.01)；NGF与SP的表达正相关(γ=0.37,P<0.01)结论1.17β-雌二醇皮下注射联合去势手术建立慢性非细菌性前列腺炎模型组中神经内分泌细胞标志性蛋白CgA、NSE、NGF表达上调,提示慢性前列腺炎中存在神经内分泌分化现象,推测由17p-雌二醇和(或)去势诱导产生。2.CgA、NSE、NGF分别与SP存在相关性,提示神经内分泌分化可能与炎症相关,SP是重要的致痛因子,推测神经内分泌细胞可能参与引起慢性非细菌性前列腺炎的神经原性疼痛。
【作者】樊松；
【导师】梁朝朝；
【作者基本信息】安徽医科大学，老年病学，2014，博士
【关键词】慢性前列腺炎；慢性非细菌前列腺炎；动物模型；激素；神经内分泌；炎症；发病机制；

【参考文献】
[1]刘聃.南天山西段新生代沉积特征及其构造意义[D].浙江大学,构造地质学,2013,硕士.
[2]张凌霞.V-LINE（中国）客户关系管理研究[D].北京交通大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[3]魏发孔.剪叉式重型升降设备的结构工艺性设计[J].演艺设备与科技.2005(05)
[4]万凤奇.利用秀丽隐杆线虫评价传统补益类中药复方的抗衰老药效及其机制研究[D].兰州大学,微生物与生化药学,2012,硕士.
[5]孙明军,杨建林.竞争情报工具现状分析[J].情报杂志,2004,12:119-121.
[6]余振东.阳光体育运动下的江西省普通高校独立学院定向运动选项课开展现状及对策研究[D].南昌大学,体育人文社会学,2012,硕士.
[7]庄玲燕,张文安,俞立.基于GPC的NCS非整数倍采样周期时延补偿方法[J].控制与决策,2009,08:1273-1276.
[8]谢岚.波形钢腹板箱梁桥受力性能参数分析[D].中南林业科技大学,结构工程,2013,硕士.
[9]朱兴曦.宁夏引黄灌区水稻节水控灌技术应用研究[D].西安理工大学,水利工程,2003,硕士.
[10]黄丽文.大学章程法律效力研究[D].首都师范大学,宪法学与行政法学,2014,硕士.
[11]张范守.顾客感知价值与超市自有品牌购买意愿关系研究：信息搜寻行为的调节效应[D].浙江理工大学,企业管理,2013,硕士.
[12]彭化.石墨烯复合物的制备及其电催化氧化甲醇性能研究[D].湖南大学,2014.
[13]张康.产业R&D投入的影响效应分析[D].山西财经大学,技术经济及管理,2013,硕士.
[14]严国安,马剑敏,邱东茹,吴振斌.武汉东湖水生植物群落演替的研究[J].植物生态学报,1997,04:24-32.
[15]姚莹.论美国单边主义政策对国家主权原则的挑战[D].吉林大学,国际法学,2004,硕士.
[16]高敏.碳会计信息披露与资本成本关系研究[D].北京交通大学,2014.
[17]赵文哲.浙江舟山群岛新区行政管理体制改革研究[D].浙江海洋学院,农村与区域发展（专业学位）,2014,硕士.
[18]高玲.商业银行个人理财业务发展研究[D].重庆大学,工商管理,2003,硕士.
[19]王晓燕.堆料机来料车结构有限元分析[D].大连理工大学,机械工程（专业学位）,2012,硕士.
[20]赵佳.基于会计政策选择的企业纳税筹划研究[D].内蒙古大学,会计,2014,硕士.
[21]熊娜.若干非线性系统的相似变换、精确解及其应用[D].宁波大学,应用数学,2013,硕士.
[22]陈培侨.乳品业的倾销与利润[J].粤港澳价格.2001(09)
[23]邓彬.缺氧诱导胃癌调节性T细胞转化及汉黄芩素干预的实验研究[D].扬州大学,中西医结合临床,2014,博士.
[24]李畅.优化供给治理通货紧缩问题研究[D].湖南大学,金融学,2003,硕士.
[25]仇婷婷.基于椭圆曲线加密体制的ONS安全研究[D].郑州大学,计算机应用技术,2013,硕士.
[26]安兵.需求与供给视角下的城市社区养老服务研究[D].湖南师范大学,社会保障,2013,硕士.
[27]綦慧娟.语块输入在中师英语写作教学中的运用[D].山东师范大学,学科教学（专业学位）,2013,硕士.
[28]宋玮.公共照明能效评价与节能优化研究[D].哈尔滨工业大学,计算机科学与技术,2014,硕士.
[29]陈一雷,王俊杰.ASI从站的结构和工作流程[J].冶金自动化,2000,06:34-36+40.
[30]高晗.基于车地频谱地图的GSM-R干扰源与克隆基站定位技术[D].西南交通大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[31]李艳涛.基于数据仓库和Web技术的继电保护管理信息系统[D].华北电力大学（河北）,2004.
[32]李智.高中历史教学中科学素养培养探究[D].渤海大学,学科教学（专业学位）,2014,硕士.
[33]魏宇明.基于协作通信的中继计算转发网络编码策略研究[D].哈尔滨工业大学,电子与通信工程,2014,硕士.
[34]韦佳丽.民族纠纷及其法律解决机制创新研究[D].广西师范大学,法律（专业学位）,2013,硕士.
[35]何光宇,董树锋.基于测量不确定度的电力系统状态估计(一)结果评价[J].电力系统自动化,2009,19:21-24+35.
[36]赵一杰.卤化银的负载及其增强的可见光催化活性机理研究[D].淮北师范大学,物理化学,2014,硕士.
[37]陈晓华.程乃珊笔下上海想象的变迁及其社会文化语境[D].首都师范大学,文艺学,2004,硕士.
[38]赵中车.复杂条件下序列图像跟踪算法应用研究[D].新疆大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[39]赵媛.上海市医疗卫生投入的绩效测评研究[D].上海工程技术大学,社会保障,2010,硕士.
[40]刘强.基于改进聚类算法的个别小区无线网络载频配置优化[D].新疆大学,信号与信息处理,2013,硕士.
[41]李鹏飞.我国封闭式基金和上市型开放式基金量价间的波动溢出效应研究[D].山东财经大学,金融学,2014,硕士.
[42]刘志刚,汪晋宽.基于粒子群优化的大规模传感器网络节点调度策略[J].控制与决策,2012,12:1903-1906.
[43]廖信优.大陆高中语文与台湾高中国文教材文言文选篇比较[D].华中师范大学,学科教学,2014,硕士.
[44]崔怀愈.超环面镜聚焦46.9nm软X射线激光烧蚀固体靶的实验研究[D].哈尔滨工业大学,物理电子学,2013,硕士.
[45]翟维佳.NBA的媒介奇观化传播研究[D].苏州大学,新闻与传播（专业学位）,2014,硕士.
[46]王禹基.股骨头表面置换术的系列研究[D].苏州大学,外科学,2003,硕士.
[47]张庆广.我国武术创意影视产业初步发展研究[D].山东体育学院,民族传统体育学,2012,硕士.
[48]杨欣.纳米晶上转换发光规律和单色近红外上转换发光的实现[D].哈尔滨工业大学,光学,2013,硕士.
[49]张欣.固定式左炔诺孕酮宫内缓释剂对子宫腺肌病患者避孕及治疗效果观察[D].青岛大学,妇产科学,2013,硕士.
[50]王冲.牛布鲁氏菌S19株VirB12分子标记疫苗的构建及其功能分析[D].吉林大学,临床兽医学,2013,硕士.