温阳化饮和温阳利水对肾病综合征水通道蛋白影响的研究

【摘要】目的：水肿是肾病综合征的常见症状,脾肾阳虚是肾病综合征水肿的常见病机之一临床上医家常运用温阳化饮法、温阳利水法治疗肾病综合征水肿,取得良好的疗效。从中医学的角度看,两类治法既有相同亦有差别,两者同属于温法,均适用于因阳虚所致的水液代谢失衡病证,不同在于温阳化饮法针对的主要病机是心脾阳虚,水饮上泛或中阳不足水饮内停,病位偏于中上焦,而温阳利水法多用于以肾阳虚衰,水湿内停,病位偏于下焦。但从现代医学研究来说,两类治法作用机制的异同仍不清楚,结合中医理论以及现代医学对水通道蛋白(AQP)的认识,本研究推测两类治法对水液代谢的调节作用是通过对水通道蛋白的调节来实现,提出“温阳化饮法对胃肠道水通道蛋白具有较强的调节作用,温阳利水法对肾脏水通道蛋白具有较强的调节的作用”的假说。因此拟从其对消化道、肾脏水通道蛋白的表达和对AVP、cAMP等水通道主要调节因素的影响,阐明两者功效差异的内在基础。本研究首先通过临床研究比较原发性肾病综合征水肿与慢性肾小球肾炎非水肿患者水通道蛋白表达及其调节因素的差异。随后进一步通过对比研究,观察温阳化饮法和温阳利水法对肾病综合征模型——阿霉素肾病大鼠模型的水通道蛋白表达及其调节影响,探讨温阳化饮法和温阳利水法作用机制的异同,比较二者在调节肾病综合征水通道蛋白的异同,冀以揭示二者临床功效差异产生的内在基础。方法：临床研究方面,研究病例来自广东省中医院大学城分院肾病科2013年6月至2014年2月住院经肾脏穿刺活检诊断为原发性肾小球疾病的患者,分为原发性肾病综合征水肿组及慢性肾小球肾炎非水肿组,健康对照来自广东省中医院治未病中心2012年5月社区调查的健康居民。原发性肾病综合征水肿组及慢性肾炎非水肿组均留取患者尿液、血液标本及肾脏组织标本,健康对照组均留取尿液、血液样本,统一检测血清AVP、cAMP水平以及尿液AQP2水平,免疫组织化学法检测肾脏组织AQP1表达情况。实验研究方面,将32只雄性SD大鼠平均分为4组：空白对照组、病理对照组、温阳利水法组、温阳化饮法组。其中病理对照组、温阳利水法组、温阳化饮法组均采用阿霉素肾病模型。分别使用真武汤、苓桂术甘汤作为温阳利水法、温阳化饮法的载体,大鼠成模后药物干预4周,实验结束时检测血清AVP、cAMP水平以及尿液AQP2水平,免疫组织化学法以及westonblot法检测肾脏组织、胃体及回肠AQPs蛋白表达情况,realtimePCR检测肾脏组织、胃体及回肠AQPsmRNA相对表达量。结果：临床研究方面,原发性肾病综合征水肿组及慢性肾小球肾炎非水肿组各纳入15例,健康对照10例。与健康对照组相比,原发性肾病综合征水肿组的尿液AQP2水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),慢性肾小球肾炎非水肿组的尿液AQP2水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。影响因素方面,与健康对照组相比,原发性肾病综合征水肿组血清cAMP水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),慢性肾小球肾炎非水肿组血清cAMP水平亦有所下降,差异有统计学意义(P<0.05),但三组间血清AVP水平没有统计学差异。免疫组织化学法提示原发性肾病综合征水肿组患者较慢性肾小球肾炎非水肿组患者肾脏皮质AQP1的表达量增高(P<0.05)。实验研究方面,Elisa法提示温阳利水法与温阳化饮法对阿霉素肾病模型大鼠尿量以及血清cAMP水平、血清AVP水平的影响无统计学差异。与空白对照组相比,温阳利水法组24h尿液AQP2总量明显增多,差异有统计学意义(P<0.01),温阳化饮法组24h尿液AQP2总量增多,差异有统计学意义(P<0.05)。在蛋白水平上,免疫组织化学法提示温阳利水法可下调阿霉素肾病模型大鼠肾脏组织AQP2,差异有统计学意义(P<0.05),温阳化饮法可下调阿霉素肾病模型大鼠回肠腺体AQP1的过表达,差异有统计学意义(P<0.05);westonblot法提示温阳利水法可下调阿霉素肾病模型大鼠肾脏组织AQP4的过表达,差异有统计学意义(P<0.05)。在基因水平上,realtinePCR法提示温阳利水法与温阳化饮法对肾脏组织AQP1/2/3/4mRNA以及胃体、回肠AQP1/3/4mRNA相对表达量的影响无统计学差异。结论：原发性肾病综合征水肿患者存在肾脏组织AQP1表达增加、尿液AQP2含量增多的改变,可为深入研究温阳化饮法和温阳利水法干预原发性肾病综合征水肿的作用机制提供临床依据。实验方面,针对阿霉素肾病模型,温阳化饮法可调节消化道AQP1的表达,温阳利水法可调节肾脏AQP2、AQP4的表达。这与我们提出的假说“温阳化饮法对胃肠道水通道蛋白具有较强的调节作用,温阳利水法对肾脏水通道蛋白具有较强的调节的作用”基本相符。
【作者】梁星；
【导师】毛炜；
【作者基本信息】广州中医药大学，中医内科学（专业学位），2014，博士
【关键词】温阳化饮法；温阳利水法；肾病综合征；水通道蛋白；阿霉素肾病；

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