APE1小分子抑制剂的筛选鉴定及其抗肿瘤活性研究

【摘要】APE1是一种多功能蛋白酶，具有DNA碱基切除修复、氧化还原生物等功能，是大分子功能复合体的一个范例。它在DNA损伤修复和氧化还原信号调控等多个重要的生物学过程中发挥着主要作用。APE1在大多数恶性肿瘤中高表达或胞浆异位表达，被认为是恶性肿瘤的重要标志物。抑制APE1可显著杀伤肿瘤细胞，同时极大地提高细胞对DNA损伤的敏感性。因此，APE1极有可能是增强肿瘤细胞对化疗敏感性的有效作用靶点。最新研究发现，APE1氧化还原抑制剂可以被用作一个药物单独使用，也可作为一种具有潜在抗增殖或细胞毒性药物与现有治疗手段联合使用，具有重要的临床转化应用价值。已发现大量的APE1小分子抑制剂，但这些化合物的研究都处于初级阶段。本研究通过对中药天然小分子化合物库进行虚拟筛选并结合体外活性筛选，以其获得APE1特异的小分子抑制剂，为以APE1为靶点的分子靶向治疗提供实验基础。目的：筛选鉴定APE1的特异性小分子抑制剂，并研究其抗肿瘤活性。方法：1.基于APE1蛋白结构，运用计算机虚拟筛选从中药天然小分子化合物库中发掘APE1的候选小分子抑制剂；2.通过电泳迁移率实验对98种小分子化合物分子进行活性筛选及鉴定；3.AP内切酶实验鉴定候选化合物对APE1损伤修复的抑制作用；4.双偏振极化干涉分析系统检测APE1与候选抑制剂的相互作用；5.CCK-8、荷瘤裸鼠实验研究棉酚抗肿瘤及协同顺铂化疗作用。结果：1.通过虚拟筛选，发现61个对APE1功能具有潜在抑制活性的小分子化和物，其中5个针对APE1的损伤修复功能，56个针对氧化还原功能。2.通过电泳迁移率实验、AP内切酶实验、双偏振极化干涉分析，发现丹参酮ⅡA、棉酚、依布硒通过与APE1直接相互作用显著抑制其氧化还原功能，其中棉酚还可显著抑制APE1修复功能。3.体内外实验表明棉酚可显著抑制宫颈癌肿瘤生长并可增强顺铂化疗敏感性。结论：1.丹参酮ⅡA和依布硒是APE1的氧化还原功能特异性小分子抑制剂。2.棉酚为APE1氧化还原和损伤修复双功能抑制剂，棉酚可通过抑制APE1抑活性制肿瘤细胞生长，增强顺铂化疗敏感性。
【作者】钱程远；
【导师】王东；
【作者基本信息】第三军医大学，肿瘤学，2014，博士
【关键词】APE1；小分子抑制剂；筛选鉴定；抗肿瘤；棉酚；丹参酮ⅡA；依布硒；

【参考文献】
[1]王森.飞机飞行模拟软件开发过程管理的研究[D].吉林大学,工业工程,2014,硕士.
[2]刘莎.胡梅尔《#f小调钢琴奏鸣曲》的技术特征和演奏处理[D].武汉音乐学院,音乐与舞蹈学,2013,硕士.
[3]阎高伟,龚杏雄,李国勇.基于振动信号和云推理的球磨机负荷软测量[J].控制与决策,2014,06:1109-1114.
[4]李轩红.国外农村养老保险制度对我国的启示[J].东岳论丛,2010,12:163-165.
[5]刘沙.非肌性肌球蛋白重链9基因多态性与中国北方汉族人群ESRD易感性相关研究[D].河北医科大学,外科学,2013,硕士.
[6]张国宏.突破传统,迈向更高层次[J].现代职业安全.2002(12)
[7]李婷婷.岑仲勉史学研究[D].湖南师范大学,史学理论及史学史,2014,硕士.
[8]李琰.28ka以来莱州湾南岸的沉积学记录及环境意义[D].中国地质大学（北京）,矿物学、岩石学、矿床学,2014,硕士.
[9]曹根.统筹城乡医疗保障体系研究[D].南昌大学,社会保障,2014,硕士.
[10]李洁,崔锦瑞.500kV变电站报警信息和事故处理流程优化[J].电力系统自动化,2009,02:101-103.
[11]汪际峰,范展滔,耿照为,陈启鑫.大电网一体化运行的经济分析架构设计[J].电力系统自动化,2014,19:74-80.
[12]郭文革,陈.信息不完全下的组合仲裁[J].自动化学报,1998,01:58-65.
[13]彭加枚.我国保障性住房融资模式研究[D].湖南师范大学,人口、资源与环境经济学,2013,硕士.
[14]丁雅莉.温经化瘀止痛方治疗原发性寒凝血瘀型痛经的临床观察[D].湖北中医学院,中医妇科学,2004,硕士.
[15]郭金权.类金刚石薄膜的制备及其在太赫兹频段光学性质的研究[D].首都师范大学,材料物理与化学,2013,硕士.
[16]李金溢.扶绥县那密村官话与桂柳官话比较研究[J].桂林师范高等专科学校学报,2014,01:8-16.
[17]万雪.申克孢子丝菌双相型转换相关基因功能研究[D].吉林大学,微生物学,2014,硕士.
[18]杨琥.长春市短道速滑后备人才培养现状与对策研究[D].东北师范大学,体育,2012,硕士.
[19]杨飞.我国农村小额信贷政策研究[D].中南林业科技大学,农业推广,2013,硕士.
[20]李福乐.基于空气喷射解除过冷的冰浆连续制备系统的研究[D].山东大学,制冷及低温工程,2013,硕士.
[21]唐密.对韩汉语词汇教学中的文化导入研究[D].湖南师范大学,汉语国际教育（专业学位）,2014,硕士.
[22]高刚.新时期优化青少年学生体质健康评价指标研究[D].华东师范大学,运动人体科学,2014,博士.
[23]李敏.《凡人》中主人公生存困境之存在主义研究[D].中国矿业大学,英语语言文学,2014,硕士.
[24]李琳.全球经济一体化背景下构建企业和谐劳动关系策略研究[D].河北大学,企业管理,2014,硕士.
[25]孙涛.墨家论辩逻辑在法庭论辩中的应用[D].西南政法大学,法律逻辑学,2012,硕士.
[26]刘美奇.我国慈善事业信任危机的社会学分析[D].长春工业大学,社会学,2013,硕士.
[27]李迪.实现城镇职工基本养老保险全国统筹的阻力与对策研究[D].天津财经大学,社会保障,2012,硕士.
[28]肖玲.歌剧《唐璜》的人物塑造与启示[D].中国艺术研究院,音乐学,2013,硕士.
[29]唐蓉.孕期植物雌激素暴露及内源性雌激素水平与子代出生结局的关联性研究[D].南京医科大学,卫生毒理学,2013,硕士.
[30]刘玉昭.潘之恒女性交游与文学[D].西南大学,中国古代文学,2013,硕士.
[31]姜哲.蒙古族民间“文化符号”考察与区域文化特征[D].中央美术学院,民间美术研究,2004,硕士.
[32]吴慷.采空区无线温度传感网络通信性能实验研究[D].西安科技大学,安全工程,2014,硕士.
[33]丁振亭.大化肥德士古渣油气化碳黑洗涤设备的故障分析[J].石油化工设备.1993(06)
[34]方园.Robocup3D仿真机器人球队决策系统模型研究[D].安徽大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[35]王允.奥巴马政府对越南政策调整及美越关系走势[D].国际关系学院,国际关系,2012,硕士.
[36]何冰.基于序列的人类蛋白质泛素化修饰位点计算分析[D].南京航空航天大学,生物医学工程,2013,硕士.
[37]盛小平.图书馆知识管理对图书馆管理的创新[J].图书馆杂志,2003,06:2-7.
[38]杨奕纯.H公司人力资源管理改进研究[D].云南大学,高级管理人员工商管理（EMBA）,2012,硕士.
[39]易向军,菅志刚,马家海.数据挖掘技术在核磁共振谱谱图库中的应用[J].计算机与应用化学,2004,03:453-455.
[40]赵媛.幼儿园绘本教学中教师角色定位的研究[D].山东师范大学,教育（专业学位）,2013,硕士.
[41]张红艳.“中国式英语”的成因分析[D].上海大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[42]娄发明.中间件技术在邮政便民服务站系统中的应用[D].兰州大学,计算机技术,2012,硕士.
[43]韦巍.年龄对房间隔缺损患者临床表现及其经皮导管封堵治疗的影响[D].广西医科大学,心血管内科（专业学位）,2013,硕士.
[44]于建.钢渣吸附在分散式生活污水除磷中的研究[D].北京林业大学,环境科学,2013,硕士.
[45]刘异.基于贝叶斯网络的城市道路拥挤概率预测研究[D].北京交通大学,2015.
[46]刘宝友,苏保河.特殊状态需要特殊修理的诊断可修系统[J].自动化学报,2002,01:97-102+119.
[47]黄湘.乌鲁木齐市城市绿地生态系统研究[D].新疆师范大学,自然地理学,2004,硕士.
[48]祝培.恶劣天气环境下图像的清晰化[D].西安理工大学,模式识别与智能系统,2004,硕士.
[49]魏志刚.化学镀法制备镍包铜包覆粉末的新研究[D].兰州理工大学,有色金属冶金,2014,硕士.
[50]唐建辉.落石冲击对隧道明洞结构的影响研究[D].西南交通大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.