γ-分泌酶在反常性痤疮皮损中的表达及TNFA-308基因多态性与寻常性痤疮相关性的meta分析

【摘要】研究背景：反常性痤疮(Acneinversa,AI)又称化脓性汗腺炎、毛囊闭锁三联征,是一组以反复发生皮肤脓肿、窦道及瘢痕形成为特征的慢性化脓性皮肤毛囊炎症。皮损常发生在有大汗腺分布的皮肤皱褶部位,如腋窝、乳腺褶、腹部褶皱、腹股沟、臀部及颈项部。皮肤损害早期的特征性表现为多孔的黑头粉刺,而后形成脓肿、窦道、瘘管、皮肤瘢痕挛缩,少数患者可继发鳞状细胞癌。常于青春期后起病,可呈家族性或散发,家族遗传模式为常染色体显性遗传。反常性痤疮的发病机制目前尚未阐明,可能是由遗传因素、免疫因素、抽烟、肥胖、雄激素等多种因素共同作用的结果。γ-分泌酶是一种由四个亚基组成的蛋白酶复合体,可切割30余种Ⅰ型跨膜蛋白,包括淀粉样蛋白前体蛋白、Notch受体、CD44、N-钙粘蛋白和E-钙粘蛋白。γ-分泌酶的四个亚基分别为早老素(presenilin,PS)、早老素增强子-2(presenilinenhancer-2,PEN-2)、纳卡斯楚因蛋白(nicastrin,NCT)和前咽缺陷蛋白-1(anterior-pharynx-defective-1,APH-1)。分别由PS-1/PS-2、PSEN-2、NCT和APH-1a/APH-1b编码。PS可由PS-1或PS-2编码,APH-1可由APH-1a或APH-1b编码,但是每个γ-分泌酶中只可能出现两者之中的一个。所以至少有6种不同的Y-分泌酶变种存在,可能是组织或细胞特异的。本课题组前期研究了6个中国人AI家系,发现在1个家族中出现了PS-1基因的移码突变,在2个家族中出现了PSEN-2的移码突变,在3个家族中分别出现了NCT基因的无义突变、移码和剪接突变。此发现使AI发病机制和γ-分泌酶的关系成为研究热点,但是γ-分泌酶在皮肤中的表达尚未见研究报道。目的：(1)检测PS-1,PS-2,PSEN-2,NCT和APH-1a在AI患者皮损组织和正常皮肤组织中的差异表达。(2)定位PS-1,PS-2,PSEN-2和NCT在AI患者皮损组织和正常皮肤组织中的差异表达部位。方法：(1)提取正常皮肤组织和AI皮损组织总蛋白,用蛋白质免疫印迹法(Westernbloting,WB)检测PS-1,PS-2,PSEN-2,NCT和APH-1α的表达。(2)用免疫组化法(Immunohistochemisty,IHC)定位PS-1,PS-2,PSEN-2和NCT这4种蛋白在AI组织中的表达。结果：(1)PS-2在患者的汗腺和表皮部位显著低表达(汗腺：t=-11.145,p=0.000<0.05；表皮：t=-3.051,p=0.038<0.05),NCT在患者的毛囊和表皮部位低表达(毛囊：t=2.594,p=0.081<0.1；表皮t=-2.376,p=0.098<0.1)。(2)NCT在2名患者(HS3,HS4)和个别对照组正常皮肤中(IVD5)都观察到不表达。(3)APH-1α在2例对照组正常皮肤中(IVD4、IVD5)不表达。结论：(1)PS-2在汗腺部位和表皮的低表达可能与AI发病相关。NCT在毛囊部位和表皮的低表达可能与AI发病有关,NCT蛋白不表达可能并不能独立致病。APH-1a蛋白的不表达可能并不能独立致病。(2)γ-分泌酶在AI发病机制中的作用可能同时影响两个部位,即毛囊和汗腺。研究背景：寻常性痤疮为慢性炎症性毛囊皮脂腺疾病,是皮肤科最常见的疾病之一。寻常性痤疮是多因素致病的共同结果,主要包括性激素水平、皮脂大量分泌、痤疮丙酸杆菌增殖,毛囊皮脂腺导管的角化异常及炎症。近期有关发病机制的文献报告较多,有报道模式识别受体被活化之后,角质形成细胞的细胞质中开始一个快速的信号级联放大反应,导致下游靶基因的增强表达,这些基因编码的细胞因子主要包括肿瘤坏死因子(Tumournecrosisfactor,TNF)和IL-1。编码TNF-α的TNFA基因位于6号染色体短臂(6p21.3)主要组织相容性Ⅲ类区域,此区域以丰富的基因多态性为特点。TNFA启动子存在不同类型的基因多态性,包括单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism,SNPs)和微随体。细胞因子TNF-α是多种生物学进程的关键分子,他的错误调控可损害宿主,启动子区的SNPs可以在基因表达的等位基因调节中发挥作用,并且常被认为是炎症性疾病、感染性疾病以及某些肿瘤性疾病的保护性因素或易感性因素。目的：近年来关于基因多态性与寻常性痤疮易感性的研究文献增多,得到不同结果,但尚无相关meta分析研究。为了更深入的理解基因多态性与寻常性痤疮的相关性,我们进行了本次研究。迄今为止有6篇文献报道TNFA启动子区域SNPs在寻常性痤疮发病机制中的作用。TNFA-308G>A基因多态性在6个报道中都有研究,但得出了不同的结论。此meta分析研究’INFA-308基因多态性是否和寻常性痤疮具有相关性。方法：(1)充分检索寻常性痤疮易感性和基因多态性文献,筛选出符合纳入条件的病例对照研究。(2)对TNFA-308G>A基因多态性和寻常性痤疮相关性研究进行meta分析并按人种进行亚组分析。结果：6篇TNFa-308G>A基因多态性和寻常性痤疮相关性的研究中共801例患者和909例对照被纳入分析。在总体人口中未发现TNFA-308G>A的等位基因A和寻常性痤疮有相关性。但是在亚组分析中,蒙古人种以及高加索和蒙古混血人种(土耳其人)的等位基因A与G对比研究中发现次等位基因A与寻常性痤疮的发病显著相关(蒙古人种OR=2.61,95%CI=1.57-4.33,高加索和蒙古混血人种OR=4.14,95%CI=2.25-7.61)。蒙古人种以及高加索和蒙古混血人种(土耳其人)的TNFA-308A主导基因型(AA+GAvsGG)对比发现主导基因型与寻常性痤疮的发病显著相关(蒙古人种OR=2.55,95%CI=1.44-4.51,高加索和蒙古混血人种OR=4.70,95%CI=2.43-9.09)。在亚组分型高加索人中未发现TNFA-308A等位基因和寻常性痤疮的相关性。结论：(1)中国人和土耳其人中TNFA-308G>A的次等位基因A可能和寻常性痤疮易感性相关,但高加索人次等位基因A和寻常性痤疮易感性无相关。(2)中国人属蒙古人种,土耳其人属高加索人种地中海类型,混有蒙古人种成分。提示TNFA-308G>A的次等位基因A在蒙古人种中和寻常性痤疮的发病有相关性。
【作者】仓田；
【导师】王宝玺；
【作者基本信息】北京协和医学院，皮肤性病学，2013，博士
【关键词】γ-分泌酶；反常性痤疮；化脓性汗腺炎；毛囊闭锁三联征；早老素；早老素增强子-2；纳卡斯楚因蛋白；前咽缺陷蛋白-1a；TNFA-308；基因多态性；寻常性痤疮；meta分析；

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