新城疫病毒山东流行株分子演化及抗原性变异分析

【摘要】新城疫(Newcastledisease,ND)是危害中国养禽业最重要的疫病之一。由ND引起的死亡、呼吸道症状和产蛋下降等十分严重,即使一些经过多次免疫、抗体水平较高的鸡群,仍时有发病。因此,了解NDV的流行动态,掌握我国流行的NDV的基因特性及生物学特性,探讨病毒变异对抗原性的影响,及时制定科学合理的防疫措施,对防控ND在家禽中的大流行具有重要意义。2006～2013年间,在山东省家禽NDV流行病学监测过程中从不同宿主家禽中分离并鉴定55株NDV,利用蚀斑纯化技术在鸡胚成纤维细胞上完成了49株NDV的纯化,进行了1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、最小致死量致死鸡胚平均死亡时间(MDT)和6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)生物学毒力测定,证实有44株强毒,5株中等毒力,6株弱毒。通过对不同宿主红细胞(RBC)凝集试验表明,9株鸭源NDV均能凝集4种RBC,而鸡源NDV仅6株基因Ⅱ型NDV能凝集四种RBC,而其它鸡源和鸽源NDV强毒均不能凝集马RBC。通过对NDV流行毒F、HN等基因测序、同源性比较和基因分型,结果表明：55株NDV中,有43株基因Ⅶ型,5株Ⅵ型,6株基因Ⅱ型,1株基因Ⅸ型,基因Ⅶ型仍然为主要的流行毒株,且主要为d亚型。同源性比较证实,Ⅶ型NDV流行株与疫苗株LaSota等的同源性愈来愈低,不足80%；即便同属于基因Ⅶd亚型依然存在由点突变形成的累积性变化,且这种规律伴随着年代的增加愈来愈明显。通过对NP、P、M、F、HN和L6个编码基因和各段非编码区核苷酸绘制系统进化树,不同基因的分类结果基本相同,说明NDV在基因的遗传演化规律方面是一致的。选择16个NDV流行株和3个经典株(LaSota、Clone30和F48E9),分别制备单因子血清,利用血凝抑制(HI)进行交叉反应,比较了流行株与疫苗毒LaSota株和中国经典强毒F48E9间的抗原性交叉反应,结果显示我国鸡群中流行的基因Ⅶ型流行毒与LaSota之间的相关指数为：0.31≤R≤0.66,证实流行病毒株已在抗原性上逐渐偏离疫苗LaSota株。免疫攻毒保护试验证明,基因Ⅶ型毒株免疫组攻毒后的临床症状、病毒分离率及排毒量均显著低于传统疫苗组(LaSota)。综上所述,NDV的分子变异是编码基因与非编码序列同步性变异的结果。基因Ⅶd亚型NDV是山东省家禽中的优势流行株,其F和HN基因氨基酸的突变具有累积性；传统疫苗LaSota与流行毒抗原性已出现较大差异,基因Ⅶd亚型疫苗在免疫保护、抑制病毒复制等方面具有更好的效果。
【作者】徐怀英；
【导师】刘金华；秦卓明；
【作者基本信息】中国农业大学，预防兽医学，2014，博士
【关键词】新城疫病毒；蚀斑纯化；抗原性；基因型；遗传变异；

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