牛腺病毒3型和牛副流感病毒3型对实验动物致病性的研究

【摘要】牛呼吸道传染病多表现为牛呼吸道疾病综合征，对养牛业危害严重。牛腺病毒3型与牛副流感病毒3型都是已知的牛呼吸道疾病综合征的重要病原。2009年国内首次报道从黑龙江的分离到一株BAV-3，命名为HLJ0955株。而在2008年本实验室从山东省牛群中首次在国内分离到4株BPIV3，为一新的基因型。由于牛群中BAV-3和BPIV3自然感染非常普遍，导致在进行实验感染时获取合适的实验用牛非常困难。因此，SPF实验动物也许是研究BAV-3和BPIV3致病性的有效动物模型。本研究应用病毒分离、荧光定量PCR和免疫组化检测BAV-3在实验感染BALB/c小鼠和豚鼠中的组织分布。通过滴鼻接毒（104.5TCID50）小鼠以及豚鼠（105.2TCID50），在接毒后不同时间采集肺脏等组织进行相关试验。结果表明BAV-3能够在2周龄小鼠肺脏中有效地复制。IHC结果表明在接毒后第1到第11天能够在肺脏内皮细胞检测到BAV-3抗原。荧光定量PCR能够在接毒小鼠第1到第7天的肺脏中检测到病毒DNA。BAV-3接毒小鼠会造成出血、肺泡内皮细胞增生等病理变化。而在接毒4周龄小鼠体内，肺脏病变程度较轻。所有接毒的豚鼠在接种后体温升高,剖检可见肺脏实变和出血；病毒分离和免疫组化在感染后24小时检测到病毒复制；荧光定量PCR在感染后第1天到第11天的肺脏中检测到病毒DNA。病毒中和试验表明在接毒后第11天产生中和抗体。豚鼠病理组织学变化与小鼠变化相似。本研究还利用BPIV3SD0835株接毒16只豚鼠(3.55×106TCID50)。接毒豚鼠表现出呼吸道相关的临床症状，且有2只豚鼠死亡；解剖学可见肺脏暗红、实变。组织病理学变化包括肺泡间隔增宽和纤维素性肺炎。利用病毒分离滴定、Real-timeRT-PCR和免疫组化在接毒24小时呼吸道组织中检测到了病毒复制。同时，IHC染色揭示了肺脏和气管是SD0835株主要复制的组织部位。在接毒后期能够检测到病毒特异性的中和抗体。综上所述，由研究结果可知BALB/c小鼠作为一种研究BAV-3感染的动物模型是可行的，且2周龄的小鼠相对于4周龄小鼠对HLJ0955株更加敏感,但在实验感染BALB/c小鼠中未观察到临床症状及解剖学变化。相反，BAV-3HLJ0955株能够在豚鼠肺部复制，且能引起豚鼠体温升高以及肉眼和组织学的病理变化。这些结果表明豚鼠感染模型相对于BALB/c小鼠感染模型更为理想，可以用作检测BAV-3HLJ0955株感染过程和致病性的系统。BPIV3SD0835对豚鼠具有致病性，能够导致豚鼠产生临床可见的症状以及肺脏的组织病理学变化。因此，豚鼠是一种理想的研究BPIV3感染的动物模型，为今后BPIV3基因C型感染过程、组织嗜性、致病性的深入研究提供了新的思路。
【作者】史鸿飞；
【导师】薛飞；
【作者基本信息】中国农业科学院，预防兽医学，2014，博士
【关键词】牛腺病毒3型；牛副流感病毒3型；实验动物模型；致病性；荧光定量PCR；

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