牛主要呼吸道病毒病血清学调查、牛病毒性腹泻病毒分离株鉴定及疫苗研究

【摘要】牛呼吸道疾病综合征（Bovinerespiratorydiseasecomplex，BRDC)是世界范围内对养牛业危害严重的疫病之一。病毒隐性感染是诱发该病的重要因素，引起该病的主要病毒包括牛病毒性腹泻病毒（Bovinevirusdiarrheavirus,BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（Infectiousbovinerhinotracheitisvirus,IBRV）、牛副流感3型病毒（Bovineparainfluenzavirustype3,BPIV3）和牛呼吸道合胞体病毒（Bovinerespiratorysyncytialvirus,BRSV）等。其中BVDV感染不仅能造成严重的临床症状，并且造成感染牛免疫力降低容易继发其他病原感染导致疾病的发病率和死亡率增加，尤其是形成持续性感染的牛没有任何临床症状但可以排毒形成传播源，给疫病的防控造成极大的困难。本研究在我国14个省份采集牛血清对上述4种病毒病进行了血清学调查，对分离到的BVDV1a和2b亚型毒株的分子遗传特性和致病性进行了研究，研制出了一种BVDV灭活疫苗。从14个省区的147个牛场共采集血清3503份，采用中和试验检测血清BVDV、IBRV、PI3和BRSV中和抗体效价。结果显示，4种病毒病的总抗体阳性率分别为BVDV（56.5%），IBRV（33.3%），PI（367.2%）和BRSV（69.6%）。其中不同地区的血清阳性率为BVDV为5.2%~84.9%，3.1%~95.8%，BRSV为41.2%~94.4%，BPIV3为27.8%~97.3%。该研究首次在我国进行了BRSV和BPIV3的血清学调查。结果显示，我国上述4种病毒病流行广泛。对分离到的HN01株和SD1301株进行分子和致病性分析。HN01株（基因序列登录号：KF925365）病毒属于致细胞病变性BVDV1a基因亚型，是国内首次报道从牛群中分离得到。将纯净性检验合格的HN01株病毒回归动物后，攻毒牛直肠体温超过40℃，白细胞下降超过40%。攻毒牛剖解后观察，脾脏，淋巴结出现病理变化。SD1301株为非致细胞病变型BVDV2b基因亚型，在我国首次分离得到。病毒基因全长12258nt，基因序列登录号（KJ000672）。将纯净性检验合格的SD1301株病毒回归动物后，攻毒牛直肠体温升高超过40℃，白细胞和血小板下降均超过40%。剖解观察和病理组织切片结果显示攻毒牛的脾脏、淋巴结出现了典型的BVDV病理性变化。采用本实验保存的、经纯净性检验合格的NM01株BVDV病毒接种MDBK细胞扩繁收获病毒液，用BEI灭活后加入206佐剂制成BVD灭活疫苗。疫苗经性状、无菌检验合格后进行效力研究。将检验合格的疫苗注射2~4月龄BVDV健康易感牛5头，2mL/头，21日后以相同剂量进行二免，二免后21日，用中和试验方法测定牛中和抗体，并用强毒JL株进行攻毒。结果，免疫牛能够有效保护牛免受强毒攻击。流行病学研究证实，BVDV、IBRV、BPIV3和BRSV4种牛呼吸道病毒病在我国不同地区广泛存在，研究了分离株BVDV1a和BVDV2b遗传特性和致病性，研制出牛病毒性腹泻灭活疫苗，为我国牛呼吸道疾病的防控提供了技术支撑。
【作者】王炜；
【导师】武华；
【作者基本信息】中国农业科学院，预防兽医学，2014，博士
【关键词】牛呼吸道疾病综合征；牛病毒性腹泻病毒；流行病学；病毒分离；疫苗；

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