Lactobacillus casei AST18抗真菌代谢产物分析及抑菌作用研究

【摘要】Lb.caseiAST18是本实验室筛选到的一株对食品腐败真菌具有良好抑制作用的乳酸菌菌株。在获得此菌株基础上，本论文对发酵液中成分进行了初步分离纯化，利用液相质谱对分离纯化部分进行了鉴定；结合不同时间段发酵液的抑菌效果，采用代谢组学技术和思路，利用核磁共振及液质联用对发酵液中主要差异代谢物进行分析；并以产黄青霉为指示菌株，研究Lb.caseiAST18对产黄青霉的抑制作用，推测其在产黄青霉体内的作用方式；利用N+注入对Lb.caseiAST18进行诱变，以期获得具有更加良好抗真菌效果的乳酸菌菌株；最后利用诱变后的正突变菌株，将其作为干酪附属发酵剂应用到干酪制作中，并考察其对干酪贮藏期内主要理化指标及感官品质的影响，对Lb.caseiAST18（1-3）作为附属发酵剂在干酪中抑菌情况进行了研究，论证了其应用在干酪防霉上的可行性，为其在干酪中的应用打下理论基础。本研究主要结论如下：（1）发酵液中除乳酸外，存在大量其它分子量小于1000Da的抑真菌物质。本实验初步分离纯化具有抑菌性能的5部分物质，并通过液质联用对其进行分析，检测到潜在抗真菌物质主要为：乳酸、乙酸等小分子有机酸、小分子酯类、芳香杂环类物质、生物碱以及多种含苯环的小分子有机物。实验证明，乳酸菌发酵液抑真菌性能是由多种小分子化合物协同作用的效果。（2）通过不同时间发酵液抑菌效果及结合代谢组学技术分析发现，在乳酸菌发酵初期抑菌效果增长主要是由于乳酸、乙酸的大量产生对霉菌造成的抑制；在乳酸菌稳定期之后，通过液质代谢组学手段结合第二章实验分析结果发现，对抑菌效果的增长起较大贡献作用的主要物质有：肉桂酸、羟基肉桂酸（香豆酸）、L-3-苯乳酸、苯乳酸、苯乙酸、对香豆酸、壬二酸、水杨酸、4-羟基苯甲酸、(R)2,3-二羟基-3-甲基戊酸、甲羟戊酸、cyclo(L-Leu-L-Pro)等。（3）Lb.caseiAST18对青霉、曲霉、镰刀霉均有抑制效果，可以抑制菌丝生长及孢子萌发，同时导致青霉属菌落生长形态异常；Lb.caseiAST18引起了P.chrysogenum自噬性死亡，观察到的主要变化过程为：液泡增大，同时部分细胞质凝集颜色加深；在液泡边缘出现包裹大量细胞质的自噬小体并慢慢进入液泡，在液泡中被消化；在衰亡后期的菌体中，细胞中只剩下大量的双层膜，观察不到任何细胞器结构。（4）Lb.caseiAST18（1-3）作为辅助发酵剂添加到切达干酪中，对切达干酪感官品质影响较小，能够增加干酪水解度，增加干酪中乳杆菌数，且能够使干酪具有良好的防霉效果。
【作者】李红娟；
【导师】吕加平；
【作者基本信息】中国农业科学院，农产品质量与食物安全，2014，博士
【关键词】乳酸菌；抗真菌；青霉；干酪；

【参考文献】
[1]Ze‐DaMeng,LeiZhu,KefayatUllah,ShuYe,QianSun,Won‐ChunOh.Ag_2S-石墨烯/TiO_2的声化学法合成及可见光催化活性(英文)[J].催化学报,2013,08:1527-1533.
[2]党龙.细化处理对铸造无铅黄铜组织和性能的影响[D].西安工业大学,材料学,2014,硕士.
[3]许琳.悬索桥施工过程中缆索系统的精细模拟[D].大连理工大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[4]刘伟国,胡祥培,王旭茵.物流配送问题的知识表示及其在GIS中的映射研究[J].控制与决策,2007,01:85-90.
[5]方霞.表情效价和竖直方位知觉的联系[D].华东师范大学,基础心理学,2013,硕士.
[6]杨露璐.非小细胞肺癌新的治疗性靶点的探索[D].南方医科大学,肿瘤学,2014,博士.
[7]江晶,杨军,马晓岩,孙洪.分布式自适应CMLWCACFAR检测方法[J].控制与决策,2006,04:421-424+429.
[8]谭志成.DJS-154计算机数据收集网的设计[J].冶金自动化,1983,02:4-8.
[9]倪立帅.天津邮轮母港与城市互动发展的评价研究[D].大连海事大学,交通运输工程,2013,硕士.
[10]姜金利.电子政务环境下的政府信息资源共享问题研究[D].山东师范大学,行政管理,2013,硕士.
[11]马骏.我国物流业发展中存在的问题[J].科技创新导报,2014,17:202-203.
[12]黄靖.小学英语文化教学现状调查与改革初探[D].内蒙古师范大学,英语课程与教学论,2012,硕士.
[13]刘敏.重、磁联合勘探接触交代型铁矿试验研究[D].长安大学,地质工程（专业学位）,2014,硕士.
[14]梁济朋.长春伪满皇宫、东北沦陷史陈列馆导游口译实践报告[D].吉林大学,翻译,2014,硕士.
[15]温凯迪.我国证券市场板块联动效应研究[D].安徽大学,金融,2013,硕士.
[16]柳悦霄.潜意识作用于书法创作之研究[D].沈阳师范大学,美术,2014,硕士.
[17]阿杰（AjayKumarSinghRajbhandari）.基于云计算平台的Navigenics研究与开发[D].东华大学,计算机软件与理论,2014,硕士.
[18]赵杰辉.电力市场营销分析理论研究及决策支持系统开发[D].天津大学,电力系统及其自动化,2004,硕士.
[19]张群.二氧化硅大孔材料的表面改性及应用[D].宁波大学,物理化学,2013,硕士.
[20]邹卉.洋河下游地区地下水及营养盐向海输送研究[D].青岛大学,环境科学,2013,硕士.
[21]薛亚莉.自动化立体仓库调度策略优化研究[D].西安科技大学,模式识别与智能系统,2014,硕士.
[22]姜方.大管径直埋热力管道在实际工程中应力分析[D].长安大学,建筑与土木工程（专业学位）,2014,硕士.
[23]许琦.河南建业集团竞争战略研究[D].兰州商学院,国际商务,2014,硕士.
[24]黄佳果.世纪证券公司IT服务管理研究[D].西北大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[25]张媛.B2C电子商务下家电连锁业物流配送模式选择[D].南京农业大学,物流工程,2013,硕士.
[26]蒋全通.石墨烯基燃料电池催化剂的制备、表征及性能研究[D].青岛科技大学,2011.
[27]李进.秦汉墓葬围沟问题初探[D].西北大学,考古学及博物馆学,2013,硕士.
[28]张延景.低密度奇偶校验码的构造方法研究[D].北京交通大学,信息网络与安全,2013,硕士.
[29]秦力,菅文磊,崔日秀,陈景丽,卢钢.壳聚糖诱导芦笋对茎枯病的抗性研究[J].北方园艺,2014,20:121-125.
[30]聂施恒.黑社会性质组织犯罪预防论[D].吉林大学,法律,2004,硕士.
[31]于恩超.滚柱导轨的变型设计及其关键技术研究[D].东北大学,机械制造及其自动化,2010,硕士.
[32]贺剑.国有部门和非国有部门收入性别差异的对比及其影响因素研究[D].兰州大学,社会学,2013,硕士.
[33]陈玉斌.X物流公司虚拟经营合作伙伴选择研究[D].兰州理工大学,工商管理,2013,硕士.
[34]王益谦.TS有限责任公司人力资源成本管理研究[D].天津大学,工商管理,2013,硕士.
[35]郭艳菊.最小距离d=4的量子MDS码[D].扬州大学,应用数学,2011,硕士.
[36]赵海洋.生长因子基因在损伤兔关节软骨细胞中的表达[D].蚌埠医学院,人体解剖与组织胚胎学,2013,硕士.
[37]侯永利,郑刚,梁青.大流动性再生粗集料混凝土配合比设计方法[J].建筑材料学报.
[38]朱丽娜.油田注水水质劣化因素与处理技术研究[D].东北石油大学,油气田化学工程,2013,硕士.
[39]李永.MIC-1、PCNA在人脑星形细胞性肿瘤中的表达及意义[D].山西医科大学,外科学（专业学位）,2013,硕士.
[40]倪传仁.西藏建设工程安全质量监督工作探索[J].住宅科技.2007(12)
[41]邹安怡.元代的文化政治对元代陶瓷艺术的影响[D].湖南师范大学,美术学,2014,硕士.
[42]李研.锦州市社区保障体系研究[D].大连理工大学,技术经济及管理,2003,硕士.
[43]杜军.论王国维文艺思想的现代性[D].青岛大学,中国现当代文学,2004,硕士.
[44]周晓峰.手助腹腔镜与开放肾脏肿瘤手术的比较研究[D].浙江大学,外科学,2004,硕士.
[45]袁淼丽.基于认知负荷理论的高中英语写作教学研究[D].西北师范大学,课程与教学论,2013,硕士.
[46]闫石.生物质燃料压缩成型技术与燃烧特性研究[D].河北科技大学,环境科学与工程,2013,硕士.
[47]张甜.重庆北部新区工业楼宇用途变更调控机制研究[D].西南大学,人文地理学,2014,硕士.
[48]史文俊.软件开发过程在客户关系管理中的应用[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[49]吴浩瀚,金福江,赖联有,汪亮.基于薛定谔方程的随机滤波算法(英文)[J].自动化学报,2014,10:2370-2376.
[50]杭利军.可移动式风蚀风洞数据采集处理系统的研究与开发[D].内蒙古农业大学,农业机械化工程,2004,硕士.