RGD修饰、AFP启动子介导的E1A和IL-24双基因腺病毒载体用于肝癌基因治疗的研究

RGD修饰、AFP启动子介导的E1A和IL-24双基因腺病毒载体用于肝癌基因治疗的研究

作者:师大云端图书馆 时间:2022-05-26 分类:参考文献 喜欢:2017
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【摘要】目的:构建RGD修饰,AFP启动子介导的E1A和IL-24双基因共表达腺病毒载体(Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24),研究其感染效率及对肝癌的选择性抑瘤增效效应与分子机制。方法:在本科室已成功构建pAdTrack-CMV-E1A-PolyA-promoter-IL24、pAdTrack-CMV-PolyA-promoter转移质粒的基础上,在多克隆酶切位点的XbaⅠ、HindⅢ酶切位点间插入hAFP片段,构建pAdTrack-AFP-E1A-polyA-promoter-IL-24重组转移载体,与RGD-4C修饰的腺病毒骨架质粒pAd.RGD经同源重组、包装和扩增获得Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24双基因共表达重组腺病毒。体外检测对比未经修饰的重组腺病毒与RGD修饰的重组腺病毒对多种细胞的感染复数,MTT法和FCM对比检测不同感染复数下RGD修饰与未经RGD修饰的重组腺病毒对多种细胞的增殖影响和在同一感染复数下对不同细胞诱导凋亡的效果。对比Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24与Ad.RGD-CMV-E1A-IL-24重组腺病毒在不同细胞中的复制能力,通过MTT和FCM验证其对不同细胞增殖影响及诱导细胞凋亡的靶向性。将Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24体外感染HepG2肝癌细胞,RT-PCR和Westernblot检测目的基因E1A和IL-24在细胞中的表达,MTT法和FCM检测其体外抑制神肝癌细胞生长和诱导凋亡的增效效应,RT-PCR法检测细胞周期和凋亡相关基因Bax、Bcl-2、p53、p21和survivin的表达,Westernblot检测凋亡相关蛋白CleavedCaspase-3的表达。结果:成功构建了RGD-4C修饰、AFP启动子介导的E1A和IL-24双基因共表达腺病毒载体Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24。与未经修饰的腺病毒比较,RGD明显提高了腺病毒对细胞的感染能力,使腺病毒在相同的感染复数下对细胞增殖的抑制能力以及诱导细胞凋亡的能力显著增强。以AFP为启动子的Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24相比Ad.RGD-CMV-E1A-IL-24重组腺病毒,具有在肝癌细胞中选择性复制的能力,以及对肝癌细胞具选择性生长抑制和诱导凋亡,具备了针对肝癌细胞的靶向性。双基因重组腺病毒Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24能明显抑制HepG2肝癌细胞的生长、诱导凋亡。分子机制检测结果表明:Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24能明显上调HepG2细胞p53、p21、Bax、CleavedCaspase-3和下调Bcl-2、Survivin等细胞周期和凋亡相关表达因子;且其效应较Ad.RGD-AFP-E1A、Ad.RGD-AFP-IL-24单基因重组腺病毒更为显著。结论:1、成功构建了RGD修饰、AFP启动子介导的E1A和IL-24双基因共表达腺病毒载体Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24。2、RGD修饰的腺病毒载体对细胞具有更好的感染能力,更强的抑制细胞增殖能力及诱导细胞凋亡能力。3、AFP为启动子的腺病毒具备了在肝癌细胞中选择性增殖、抑制肝癌细胞生长、诱导细胞凋亡的靶向杀伤能力。4、Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24双基因表达更显著抑制HepG2细胞生长和诱导凋亡,双基因呈现出叠加的抑瘤增效作用。5、Ad.RGD-AFP-E1A-IL-24双基因表达更具显著上调p53、p21、Bax、CleavedCaspase-3和下调Bcl-2、Survivin等细胞周期和凋亡相关表达因子,这可能是其双基因表达对肝癌细胞生长抑制具有叠加抑瘤增效作用的重要机制之一。
【作者】徐寅凯;
【导师】钱海鑫;
【作者基本信息】苏州大学,普通外科学,2014,硕士
【关键词】腺病毒;RGD;肝癌;AFP;E1A;IL-24;

【参考文献】
[1]何庆元.不同生态区苜蓿根瘤菌对宿主竞争结瘤能力变异的研究[D].西南农业大学,动物营养与饲料科学,2004,硕士.
[2]倪加付.中国股票市场的日历效应分析[D].云南财经大学,金融学,2013,硕士.
[3]孙俊君.论新时期我国廉政文化建设[D].新疆大学,行政管理,2013,硕士.
[4]王瑞鑫,刘万春.商业数据挖掘中的核心算法[J].北京工业大学学报,2004,04:510-514.
[5]孙伟东.斯特林发动机多热源系统研制与整机性能实验研究[D].上海电力学院,热能工程,2014,硕士.
[6]杜江.支持异构无线网络融合的移动性管理关键技术研究[D].华中科技大学,信息安全,2013,硕士.
[7]梅凯.苏州博习医院早期历史研究(1883-1927)[D].苏州大学,中国近现代史,2013,硕士.
[8]孟岩.高校办公即时通信系统设计与实现[D].山东大学,软件工程(专业学位),2013,硕士.
[9]赵云昆.利用SSR分子标记研究玉米自交系的遗传多样性[D].内蒙古农业大学,作物遗传育种,2012,硕士.
[10]李士娟.基于城市新移民社区资源需求视角下的居住社区更新研究[D].西安外国语大学,人文地理学,2014,硕士.
[11]程红伟.少数民族传统体育实现教育价值取向的研究[D].西南大学,体育人文社会学,2013,硕士.
[12]彭燕.合作作品概念的比较法分析[D].中国政法大学,比较法学,2013,硕士.
[13]马建春.基于Web挖掘的SNS网站服务模型的研究[D].大连海事大学,计算机科学与技术,2013,硕士.
[14]陈开林.《左传》贤相研究[D].湖北大学,中国古代文学,2012,硕士.
[15]于艳平.面向移动地图表达的POI动态综合方法研究[D].南京师范大学,地图学与地理信息系统,2012,硕士.
[16]张万东.酉阳、石砫土司与明朝关系考论[D].吉林大学,专门史,2013,硕士.
[17]王梅,张双玲.《传感器》课程项目教学改革初探[J].轻工科技,2014,09:156-157.
[18]尹晓倩.微博用户关系网络结构特征研究[D].中国地质大学(北京),管理科学与工程,2013,硕士.
[19]刘靖.高产纤维素酶菌株的筛选及其发酵条件的优化[D].湖南农业大学,作物,2012,硕士.
[20]袁媚.浙江省制造业集聚机理及其空间计量分析[D].浙江工商大学,区域经济学,2012,硕士.
[21]翁荔芳.脊柱手术并发脑脊液漏的预防与处理[D].福建医科大学,外科学,2014,硕士.
[22]陈瑞瑞.国外山地城市空间形态研究[D].重庆大学,城市规划与设计,2014,硕士.
[23]汪宁璋,朱云.轨道交通机车牵引电流谐波测试软件的实现[J].安全与电磁兼容,2014,05:21-24.
[24]陈炳地,彭成信,崔征.高性能锂离子电池负极材料CoO/石墨烯纳米复合结构的超声法制备(英文)[J].TransactionsofNonferrousMetalsSocietyofChina,2012,10:2517-2522.
[25]鲁刚.脐带间充质干细胞对重度烧伤大鼠肾脏及肺保护作用的研究[D].中国人民解放军医学院,外科学,2013,硕士.
[26]田明星.路径规划在车辆导航系统中的应用研究[D].北京交通大学,2009.
[27]温永新.12米天线结构有限元分析与精度测量[D].西安电子科技大学,机械工程,2011,硕士.
[28]李青青.城市轨道交通对城市空间的引导作用研究[D].沈阳建筑大学,城市规划与设计,2013,硕士.
[29]徐鑫.新疆文化建设问题研究[D].新疆师范大学,马克思主义民族理论与政策,2013,硕士.
[30]王巧焕.Genistein对裸鼠卵巢癌移植瘤的影响[D].河北医科大学,妇产科学,2014,硕士.
[31]张建杰.大庆油田气的集输实践与认识[J].油田地面工程.1989(01)
[32]李真真.二维应变成像技术评价左心室构型正常高血压患者的心肌功能[D].青岛大学,影像医学与核医学,2013,硕士.
[33]牛新会.榆林尚郡苑房地产项目投资风险研究[D].西北大学,高级工商管理(EMBA)(专业学位),2012,硕士.
[34]鲁俊.兰州市妇幼医院住院管理系统的分析与开发[D].兰州大学,计算机技术(专业学位),2013,硕士.
[35]吴亚楠.不纯正不作为犯罪主要争议问题研究[D].内蒙古大学,法律,2013,硕士.
[36]白旭明,李培明,邢国栋,胡建强,张宇生,张华才.低信噪比强线性干扰区地震采集方法探讨——南鄱阳凹陷西区地震采集方法初探[J].石油地球物理勘探,2003,02:122-125+220-105.
[37]张静.会计政策选择与经理人特征关系的实证研究[D].哈尔滨工业大学,会计学,2014,硕士.
[38]陈飞.物欲都市的困厄与挣扎[D].河北师范大学,中国现当代文学,2014,硕士.
[39]古丽加孜·艾力肯.从功能语法的视角探析俄语愿望范畴及其表达方式[D].新疆大学,俄语语言文学,2013,硕士.
[40]夏顺明.介绍一种新的油气润滑装置[J].武钢技术.1987(01)
[41]李杰.湖南飞碟新材料有限责任公司员工关系管理研究[D].湖南大学,工商管理,2012,硕士.
[42]唐韵.中国民营上市公司治理结构和公司绩效关系的研究[D].成都理工大学,企业管理,2013,硕士.
[43]严富国.银行内部信用评级应用研究[D].西安理工大学,工商管理,2004,硕士.
[44]丁艳.动画电影美术的艺术特征探析[J].美术教育研究,2014,18:109.
[45]陈国华.基于工业以太网的架空乘人装置无人值守运行研究[D].电子科技大学,软件工程(专业学位),2012,硕士.
[46]牛翔.赖特与苏俄民族形式建筑理念今昔的释义与解读[D].北京交通大学,2014.
[47]张威威.晶振老化漂移的建模与补偿[D].西安电子科技大学,电机与电器,2012,硕士.
[48]姚志东,李炜,高先龙.点缺陷扶手型石墨烯量子点的电子性质研究[J].物理学报,2012,11:449-454.
[49]易红伟.基于DEM的黄土高原沟壑信息挖掘研究[D].西北大学,2004.
[50]刘韬,王耀才,王致杰.一种基于人工免疫系统的聚类算法[J].计算机工程与应用,2004,19:182-184.

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