基质交联分子1对前列腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响

基质交联分子1对前列腺癌细胞迁移侵袭及上皮间质转化的影响

作者:师大云端图书馆 时间:2022-05-18 分类:参考文献 喜欢:1387
师大云端图书馆

【摘要】背景与目的:基质交联分子1(STIM1)在多种肿瘤组织中表达增高,并参与肿瘤生长、血管形成及远处转移。本课题组前期研究表明,前列腺癌组织中STIM1表达明显增高,且与肿瘤分期相关。抑制前列腺癌PC-3细胞中STIM1表达可抑制PC-3细胞增殖、诱导凋亡。为此,我们以短发夹RNA(shRNA)抑制STIM1表达,检测其表达抑制后对激素非依赖型人前列腺癌DU145、PC-3细胞迁移、侵袭能力的影响,并初步探讨在上皮间质转化(EMT)阳性的DU145细胞中,抑制STIM1表达对其上皮及间质标记物表达变化的影响。方法:合成携带STIM1基因shRNA的慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP,该载体已证明可有效抑制PC-3细胞中STIM1表达。以激素非依赖型人前列腺癌DU145、PC-3细胞株为研究对象,将慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP分别转染DU145、PC-3细胞(si-STIM1组),设计空白对照组(Mock组)及阴性对照组(NC组)。转染72h后选取转染效率大于80%的细胞扩大培养用于后续实验。采用RT-PCR及Westernblot验证转染慢病毒载体STIM1-pGCSIL-GFP后STIM1抑制情况。划痕实验及Transwell迁移、侵袭实验检测抑制STIM1表达后DU145、PC-3细胞运动、迁移及侵袭能力的变化。以EMT阳性的DU145细胞株进一步研究,采用RT-PCR及Westernblot分别在mRNA及蛋白水平检测EMT标记物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA)在STIM1被抑制前后表达的变化。结果:转染72h后荧光倒置显微镜下见病毒转染效率大于80%,感染复数(MOI)=20。RT-PCR及Westernblot结果均显示DU145、PC-3细胞si-STIM1组STIM1表达明显降低。与NC组相比,DU145细胞中STIM1mRNA和蛋白水平抑制率分别为72%、64%;PC-3细胞中STIM1mRNA和蛋白水平抑制率分别为81%、85%,差异均有统计学意义(P<0.05)。划痕实验显示两种细胞STIM1抑制后运动能力均明显降低。细胞迁移结果发现,DU145细胞中Mock组、NC组、si-STIM1组每视野细胞数分别为87.2±7.3个、85.4±8.5个、45.6±4.3个;PC-3细胞中Mock组、NC组、si-STIM1组每视野细胞数分别为61.8±3.3个、58.4±6.2个、34.1±6.3个。分别与各自NC组相比,两种细胞si-STIM1组迁移细胞数目显著减少(P<0.05)。细胞侵袭实验提示,DU145细胞Mock组、NC组和si-STIM1组每视野细胞数目分别为96.6±9.3个、99.1±10.4个、52.6±6.7;PC-3细胞Mock组、NC组和si-STIM1组每视野细胞数目分别为32.4±4.6个、35.1±3.9个、19.3±3.2个。si-STIM1组与各自NC组相比,细胞侵袭数目明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。对DU145细胞株进一步研究,RT-PCR和Westernblot结果显示,si-STIM1组上皮标记物E-cadherin的mRNA及蛋白表达增高(分别为NC组的1.81倍、3.81倍);间质标记物N-cadherin的mRNA及蛋白表达降低(分别为NC组的0.44倍、0.69倍),Vimentin的mRNA及蛋白表达降低(分别为NC组的0.50倍、0.77倍),α-SMA的mRNA及蛋白表达降低(分别为NC组的0.49倍、0.67倍),各组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.前列腺癌DU145、PC-3细胞的细胞运动、细胞迁移及细胞侵袭能力与细胞中STIM1表达水平密切相关;2.抑制DU145细胞中STIM1表达后,上皮标记物E-cadherin表达增高,间质标记物N-cadherin、Vimentin和α-SMA的mRNA及蛋白表达均降低;3.在前列腺癌DU145细胞中抑制STIM1表达可抑制前列腺癌细胞远处转移,其机制可能与逆转EMT相关。
【作者】顾鹏;
【导师】阳东荣;单玉喜;
【作者基本信息】苏州大学,外科学,2014,硕士
【关键词】基质交联分子1;前列腺癌;肿瘤转移;上皮间质转化;

【参考文献】
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