S100A12在新生大鼠脓毒血症中的表达及意义

【摘要】目的：S100A12是小分子钙结合蛋白，被认为在感染性疾病中发挥重要的生物学作用。本课题拟通过建立新生大鼠脓毒血症模型，观察血清中S100A12蛋白在脓毒血症中的动态变化水平，分析肝脏组织中S100A12与促炎因子晚期糖基化终末产物受体（Receptorforadvancedglycationend-products，RAGE）、核转录因子-κB（NucleartranscriptionfactorkappaB，NF-κB）、肿瘤坏死因子-α（Tumornecrosisfactor-α，TNF-α）、白介素-6（Interleukin-6，IL-6）mRNA之间的关系，探讨S100A12在新生大鼠脓毒血症发病机制中的作用，从而为脓毒血症的早期诊断提供方向。方法：选用7日龄新生Sprague-Dawley（SD）大鼠，随机分为两组，即脓毒血症实验组、对照组。采用腹腔注射脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）建立脓毒血症模型组，对照组经腹腔注射相同容积的生理盐水。两组动物按实验后2h、4h、8h、16h、24h、48h分为6个亚组，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后，心脏采血（约1.5ml），取血清，留取肝脏组织，-80℃保存。采用ELISA法检测血清S100A12的蛋白水平。采用RT-PCR测定肝脏组织中S100A12、RAGE、NF-κB及TNF-α、IL-6mRNA的相对表达量。肝脏标本HE染色，进行病理学观察和评分。结果：1.血清S100A12检测结果：大鼠各时间点血清S100A12水平实验组较对照组显著升高（P＜0.05），实验组相邻两亚组间比较存在明显差异（P＜0.05）。血清S100A12于2h迅速升高，12h达到高峰，48h仍维持较高水平。2.肝脏病理组织观察及评分：实验组大鼠24h、48h可见肝细胞广泛变性、坏死，中性粒细胞浸润。肝脏病理组织评分实验组显著高于对照组（P＜0.05），2h（Median：1Vs0）、4h、8h（Median：2Vs0）、12h、48h（Median：3Vs0）、24h（Median：4Vs0），实验组病理评分2h开始升高，24h达最高值。3.实验组大鼠血清S100A12与肝脏病理学评分呈正相关（rs=0.659，P＜0.01）。4.肝脏促炎因子mRNA检测结果：1）与对照组相比，实验组大鼠肝脏组织S100A12、REGE、NF-κBp65及TNF-α、IL-6mRNA水平均呈现高表达；2）大鼠肝脏S100A12mRNA水平实验组显著高于对照组（P＜0.05），实验组相邻两亚组间存在明显差异（P＜0.05）。S100A12基因于2h迅速升高，8h达到高峰，直至48h仍保持高表达；3）肝脏S100A12基因水平与血清S100A12蛋白水平呈正相关（r=0.599，P＜0.05）；4）两组大鼠肝脏RAGEmRNA水平，2h、4h无明显差异（P＞0.05），其余时间点存在显著差异。实验组8hVs4h，12hVs8h，24hVs12h，48hVs24h亚组间差异有统计学意义（P＜0.05）。RAGE基因水平4h内表达不明显，至8h缓慢升高，12h达到峰值，至48h仍高于对照组；5）两组大鼠肝脏NF-κBp65mRNA水平，48h无明显差异（P＞0.05），其余时间点差异有统计学意义（P＜0.05）。实验组相邻两亚组间存在明显差异（P＜0.05）。NF-κB基因于2h开始升高，4h明显升高，至8h达最高峰，48h基本降至正常；6）大鼠肝脏TNF-αmRNA水平实验组显著高于对照组（P＜0.05）。实验组相邻两亚组间比较，存在明显差异（P＜0.05）。TNF-a基因于2h迅速升高，8h达到高峰，48h仍稍高于对照组；7）两组大鼠肝脏IL-6mRNA水平，2h无明显差异（P＞0.05），其余时间点差异有统计学意义（P＜0.05）。实验组相邻两亚组间存在明显差异（P＜0.05）。IL-6基因于4h开始升高，至24h出现高峰，48h表达仍高于对照组；8）肝组织S100A12mRNA与促炎因子mRNA之间呈正相关：S100A12/RAGE（rs=0.511,P＜0.01）、S100A12/NF-κB（rs=0.468,P＜0.01）、S100A12/TNF-α（rs=0.881,P＜0.01）、S100A12/IL-6（rs=0.521,P＜0.01）。结论：1.LPS诱导的新生大鼠脓毒血症过程中，随着病情进展，肝脏组织病理损伤逐渐加重，引起S100A12、RAGE、NF-κB、TNF-α及IL-6促炎因子基因表达的增加，表明促炎因子的过度表达是造成脓毒血症的重要原因。2.实验组新生大鼠血清S100A12蛋白水平和肝脏组织S100A12基因水平的变化趋势一致，提示S100A12可能在机体促炎反应中起到重要的作用。3.实验组大鼠血清S100A12与肝脏损伤程度呈正相关，肝脏组织S100A12mRNA与促炎因子RAGE、NF-κB、TNF-α、IL-6mRNA呈正相关，提示血清S100A12可能与促炎因子产生协同作用，可能成为脓毒血症早期诊断的生物学标记物。
【作者】刘志华；
【导师】俞生林；
【作者基本信息】苏州大学，儿科学（专业学位），2014，硕士
【关键词】新生大鼠；脓毒血症；S100A12；RAGE；NF-κB；TNF-α；IL-6；

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