黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

【摘要】肺癌是当今世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，包括了非小细胞肺癌和小细胞肺癌两大类，其中非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer,NSCLC）占肺癌的75%~85%，大部分肺癌患者就诊时已属晚期，即多已发生了转移，而错失手术机会，而传统放化疗疗效不理想，一线化疗的有效率为20%~40%，中位生存期为8~10个月，现有化疗药物的疗效已达到平台，治疗效果仍不理想，且副作用大。因此从天然化合物中寻找安全、有效、低毒的抗肿瘤药物成为重要发展战略之一。黄连素（Berberine,BBR）是从植物中提取的单体异喹啉类生物碱，研究表明BBR有抗肿瘤药理活性，但是BBR抑制肺癌增殖、转移的潜在作用及相关机制尚未见报道，近些年研究表明上皮间质转化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）的发生跟肿瘤转移有密切的关系[1]，本文通过研究BBR对EMT相关蛋白的调控来探讨相关机制。目的观察BBR作用于人肺腺癌A549细胞后，对细胞增殖和凋亡的影响，以及EMT相关蛋白的调控作用，来研究BBR抑制肺癌增殖、转移的潜在作用及相关机制。方法1、BBR对细胞增殖的影响：不同浓度BBR作用于人肺腺癌A549细胞不同的时间，应用MTT法检测细胞的增殖抑制率。2、BBR对细胞凋亡的影响：不同浓度BBR作用A549细胞后，用AnnexinV-FITC/PI双染，通过流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测BBR对细胞凋亡的影响。3、BBR对细胞侵袭和转移的影响：不同浓度的BBR作用于A549细胞后，应用Transwell小室观察BBR对A549细胞迁移和侵袭数目的影响。4、BBR对EMT标记分子的影响：不同浓度的BBR作用于A549细胞后，应用蛋白质印迹法检测EMT标记分子E-cadherin、Vimentin、的表达。5、BBR对EMT相关转录因子的影响：不同浓度的BBR作用于A549细胞后，应用蛋白质印迹法检测EMT相关转录因子Snail，Slug的影响。结果1、BBR对细胞增殖的影响：不同时间、不同浓度BBR作用A549细胞后，能抑制细胞的增殖，且呈时间-浓度依赖性（P＜0.05）。2、BBR对细胞凋亡的影响：不同浓度BBR作用A549细胞24h后，随着药物浓度的增加，细胞早期凋亡率显著增加（P＜0.05）。3、BBR对细胞迁移和侵袭的影响：不同浓度的BBR作用于A549细胞后，BBR对A549细胞迁移和侵袭数目有显著的抑制作用，且呈浓度依赖性（P＜0.05）。4、BBR对EMT标记分子的影响：不同浓度的BBR作用于A549细胞后，Westernblot显示上皮的标记分子E-cadherin上调，间质的标志分子Vimentin表达下调。5、BBR对EMT相关转录因子的影响：不同浓度的BBR作用于A549细胞后，Westernblot显示活化后可诱导EMT发生的转录因子Snail、Slug表达下调。结论1、BBR能抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其凋亡。2、BBR能够抑制A549细胞的侵袭和迁移，可能与调控EMT发生的相关蛋白表达有关，具体的通路有待于进一步研究。
【作者】辛灵艳；
【导师】范理宏；
【作者基本信息】苏州大学，内科学，2014，硕士
【关键词】黄连素；肺癌；凋亡；上皮-间质转化(EMT)；迁移和侵袭；

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