硼替佐米联合5-氟尿嘧啶对Hela细胞的抑制作用及其机制的研究

【摘要】目的：宫颈癌为大家所熟知,也是目前所知的妇科最为常见的恶性肿瘤,每年全球都约有二十几万的妇女以为此而去世,宫颈癌对妇女的身心健康和生存品质都有着严重的负面影响,给许多家庭带来了巨大的经济负担。宫颈癌一般的治疗手段主要是以手术和放化疗,这些手段可以使一部分病患得到根治或着相对的缓解病情,但大多数的病患经过手术或者放化疗措施后的远期预后并非特别理想,且部分人群对化疗又不是很敏感,甚至产生抵抗,故预后不良。因此为了全人类的健康及生存环境,迫切需要寻找对宫颈癌较为有效的方法从而大大改善宫颈癌患者的预后。硼替佐米(Bortezomib)是一种细胞内蛋白酶体抑制剂的抑制剂,人体细胞内的蛋白酶体的糜蛋白酶样活性和胰蛋白酶样活性这两者都可以受到Bortezomib的抑制作用。5-FU脱氧核苷酸,5-FU核苷等代谢产物可以由5-氟尿嘧啶(5-FU)在人体细胞内转化而成,这些物质由于和DNA及蛋白质的合成所需底物相似,从而影响或干扰细胞内正常的代谢过程,故5-FU作为一种通过影响细胞代谢而抗肿瘤的药物,在临床恶性肿瘤的治疗方面已被广泛地采用,本文主要探讨的是Bortezomib这一血液肿瘤常用的化疗药物和常见的临床肿瘤化疗药物5-氟尿嘧啶(5-FU)对于Hela细胞的作用是怎样的,并浅表分析其作用机制。方法：将人的宫颈腺癌Hela细胞培养于培养瓶中,呈单层贴壁样生长,培养基为含10%新生牛血清的DMEM-H(高糖)完全培养基,并将培养瓶放置于拥有饱和的湿度、温度为37摄氏度、含5%二氧化碳环境适合人类细胞生存的培养箱中进行传代培养。分为空白对照组,单纯Bortezomib组,单纯5-FU组及联合组(Bortezomib和5-FU联合应用组)4大组。并通过MTT法来测定各个组别的细胞抑制率情况。采用RT-PCR法测定不同组别中hela细胞的Bcl-2、Survivn、IGF-1及HIF-lamRNA的表达；PI标记流式细胞术(FCM)分析不同组别的细胞周期、AnnexinV/PI双染法法测定不同组别的凋亡的变化。结果：(1)MTT检测法的检测结果显示,Bortezomib及5-FU单独使用时均可抑制Hela细胞的增殖,且抑制作用与作用的时间及浓度呈正相关,两者联合作用后抑制增殖作用更显著(P<0.05);(2)RT-PCR结果显示Bortezomib及5-FU均可使BCL-2、IGFmRNA及SurvivnmRNA的表达下降,且与药物浓度呈正比,并且联合化疗组较单独化疗组的抑制作用更为显著(P<0.05);Bortezomib及5-FU对HIF1αmRNA表达无抑制作用,但两者联合应用后其表达量较对照组显著降低(P<0.05)。(3)细胞周期结果显示Bortezomib及5-FU可影响Hela细胞的周期比例发生变化,使其处于S期的细胞比例减少,联合化疗组较单独化疗组更加显著(P<0.05)。(4)凋亡结果显示Bortezomib和5-FU单独使用时均可引诱导Hela细胞发生凋亡,联合化疗组诱导凋亡的作用较单独化疗组效果更加显著(P<0.05)。结论：本实验结果表明,Bortezomib联合5-FU应用可以明显的增加人宫颈腺癌Hela细胞的凋亡率,而降低Hela细胞的增殖率。
【作者】王超萍；
【导师】钱志红；
【作者基本信息】苏州大学，妇产科，2014，硕士
【关键词】硼替佐米；蛋白酶体抑制剂；蛋白酶体；5-氟尿嘧啶；宫颈肿瘤；

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