血小板膜糖蛋白唾液酸化及MicroRNA在原发免疫性血小板减少症发病中的意义及作用机制

【摘要】第一部分血小板膜糖蛋白唾液酸化在原发免疫性血小板减少症中的表达和临床意义目的：探讨血小板膜糖蛋白唾液酸化在原发免疫性血小板减少症（ITP）发病机制中的作用。方法：应用流式细胞仪检测43例初治成人ITP患者治疗前后（其中包括15例大剂量地塞米松（HD-DXM）冲击治疗有效的ITP患者）和21例健康对照者血浆中血小板膜表面α2,3-唾液酸（α2,3-SA）和α2,6-唾液酸（α2,6-SA）表达阳性百分率；并运用ELISA方法对血清中唾液酸含量及唾液酸酶活性和含量进行测定。结果：ITP患者血小板膜糖蛋白表面α2,6-SA表达水平降低（80.79±15.51）%，与正常对照组（98.73±2.43）%比较，差异有统计学意义（P<0.001）；α2,3-SA表达水平为(85.43±13.22)%，与正常对照组（87.56±7.23）%比较，差异无统计学意义（P>0.05)。15例HD-DXM有效治疗的ITP患者治疗后α2,6-SA表达水平较治疗前显著升高（P<0.05）；而α2,3-SA表达水平治疗前后无差异（P>0.05)。ITP患者外周血清中SA含量、唾液酸酶含量及活性均显著增高。SA浓度为(799.77±126.64)μl/ml，唾液酸酶浓度和活性为(5207.06±2306.29)pg/ml、(84.32±48.33)u/l，分别与正常对照组比较（565.80±131.06）μl/ml、(3851.91±1769.91)pg/ml、(60.53±31.79)u/l，均有显著性差异（P<0.001，P<0.05，P<0.05）。15例HD-DXM有效治疗的ITP患者SA及唾液酸酶含量、活性治疗前后均无显著差异（P均>0.05）。结论：血小板膜糖蛋白唾液酸化可能参与了ITP的发病机制。第二部分MicroRNA在原发免疫性血小板减少症中的表达及作用机制目的：本研究通过分析ITP患者Treg细胞中miRNA基因表达谱，探讨miRNA是否参与了ITP中Treg的免疫调控。方法：选取常州市第一人民医院收治的初诊ITP患者20例及正常对照者15例，应用免疫磁珠分选技术分选出ITP患者及正常对照者外周血Treg细胞；提取Treg细胞中总RNA，应用miRBase18.0数据库的芯片探针微阵列芯片技术及VolcanoPlotfiltering软件分析miRNA表达谱，筛选出两组Treg细胞中差异性表达的miRNA；应用荧光实时定量PCR技术进一步验证ITP患者Treg细胞及治疗前后血清中差异性表达的相关miRNA。结果：与正常对照组相比，ITP患者Treg细胞内有差异表达的miRNAs502个，其中表达水平上调244个，表达水平降低258个；选择表达降低的miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p应用荧光实时定量PCR进一步验证，ITP患者Treg细胞中miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p基因表达水平显著降低，结果有统计学意义(P<0.03；P<0.01；P<0.02)；miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p之间表达水平无明显相关性。与正常对照相比ITP患者血清中miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p基因表达水平无明显差异。结论：与正常对照者比较，ITP患者外周血Treg细胞内存在差异性表达miRNAs；其中miR-155-5p、miR-146b-5p、miR-142-3p基因表达水平显著下降，但其在ITP患者血清中未见差异性表达。提示miRNAs可能参与了ITP患者Treg细胞的免疫抑制功能，可能参与了ITP的免疫发病机制。
【作者】范江砂；
【导师】凌云；
【作者基本信息】苏州大学，血液病学，2014，硕士
【关键词】唾液酸；唾液酸酶；原发免疫性血小板减少症；miRNA；Treg细胞；

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