犬附红细胞体形态学观察及PCR诊断方法的建立

【摘要】犬附红细胞体病是由犬附红细胞体寄生在犬红细胞膜上、骨髓及血浆中，引起感染犬贫血、发热、黄疸及渐进性消瘦等症状，犬附红细胞体是一种人兽共患病，严重制约了我国养犬业的发展。目前在兽医临床中对于犬附红细胞体病的诊断主要是通过镜检法，包括鲜血压片法及血涂片染色法，但误诊情况较多，急需建立一种高效且特异的检测方法用于临床诊断。本研究主要包括两方面内容：犬附红细胞体形态学观察及PCR诊断方法的建立。形态学观察主要是通过收集感染犬新鲜血液进行染色镜检及制备超薄切片进行透射电镜观察，对犬附红细胞体形态、结构进行研究，结果显示犬附红细胞体既可附着在红细胞表面，又可游离在血浆中，具有多形性，呈杆状、逗点状、环形；既含有RNA，又含有DNA结构；直径在0.3-2.0μm之间,为一单层限制性膜包裹的圆形结构,包裹核糖核蛋白体，无明显细胞器,无核样结构，为典型的原核生物，并通过在临床治疗中使用肌肉注射土霉素注射液，同时根据感染犬不同个体情况和临床症状使用支持疗法对症治疗，取得了不错的治疗效果，治愈率约为80%，使用该方法可有效降低感染犬的死亡率。另根据GenBank中已经发表的不同物种附红细胞体的16SrRNA基因序列进行同源性比对，取其保守区域设计特异性引物，建立犬附红细胞体PCR诊断方法，结果显示该方法可以从阳性血液样本中扩增出530bp大小片段，与预期结果一致，经特异性实验验证该方法只能从犬附红细胞体扩增出与目的片段一致的条带，而健康犬血液、犬弓形虫、犬细小病毒、大肠杆菌均未扩增出目的片段，敏感性实验表明该方法的最低检测量为8pg。使用建立的PCR检测方法对临床收集病例的血液样本进行检测，结果显示对15份经瑞氏染色为疑似阳性血液样本进行PCR检测后，共检出11份阳性样本，阳性率约为73%；对26份经瑞氏染色诊断为阴性血液样本进行PCR检测后，共检出5份阳性样本，阳性率约为20%，以上检测为PCR阳性的犬最终确诊为犬附红细胞体感染，证实该PCR方法对附红细胞体的检出率优于瑞氏染色法。本实验建立的PCR方法具有快速、特异性好，敏感性高等优点，可用于犬附红细胞体病的诊断及流行病学调查，对了解犬附红细胞体病的病原学及流行病学，指导临床治疗和预防具有重要意义。
【作者】薛慧亮；
【导师】靳朝；
【作者基本信息】吉林大学，兽医，2014，硕士
【关键词】附红细胞体；犬附红细胞体；形态学；聚合酶链式反应；

【参考文献】
[1]立早.天山北麓山地地震方法试验通过部级鉴定[J].石油地球物理勘探,1993,04:510.
[2]高媛媛.凯悦欣软膏治疗肺胃蕴热型寻常痤疮有效性及安全性的临床研究[D].成都中医药大学,中医外科学,2012,硕士.
[3]崔渊博.车载通信网中的匿名性保护研究[D].北方工业大学,应用数学,2013,硕士.
[4]陈代雄.柱芳烃衍生物的合成及复合材料制备[D].吉林大学,有机化学,2014,硕士.
[5]张尧.DIY手刻橡皮图章艺术符号研究[D].湖南工业大学,设计艺术学,2012,硕士.
[6]朱涛,杨静珊.导爆索的施工方法[J].石油地球物理勘探,1983,05:478.
[7]吴建.自组装纳米复合材料的合成及其在电催化与智能响应方面的应用[D].中国科学技术大学,2012.
[8]宣雅馨.汉语国际教育硕士培养模式调查研究[D].曲阜师范大学,汉语国际教育（专业学位）,2013,硕士.
[9]欧阳东青.深莞惠都市圈产业一体化战略研究[D].电子科技大学,工商管理（专业学位）,2012,硕士.
[10]莉努（REENUAWALE）.妊娠中晚期妊娠糖尿病与甲状腺疾病代谢性疾病的相关性研究[D].广西医科大学,妇产科（专业学位）,2013,硕士.
[11]丁洋洋.联合国安理会第1973号决议的国际法探析[D].贵州大学,国际法,2014,硕士.
[12]刘益成.等间隔频域采样信号的恢复条件[J].石油地球物理勘探,1989,04:490-492.
[13]丁瑾.基于Web数据挖掘的综述[J].科技情报开发与经济,2004,12:267-268.
[14]罗莎.四种红木抽提物的FTIR与GC-MS指纹图谱鉴别研究[D].中南林业科技大学,木材科学与技术,2013,硕士.
[15]李德洗.农村劳动力转移的经济学分析[D].河南农业大学,农业经济管理,2004,硕士.
[16]薛静.领导-成员交换、任务特征与组织公民行为的关系研究[D].杭州电子科技大学,企业管理,2014,硕士.
[17]田松娜.R417A在空调传热管外沸腾换热特性研究[D].中原工学院,供热、供燃气、通风及空调工程,2012,硕士.
[18]钱纯妮.论过失犯的违法性阻却事由[D].华东政法大学,法律（专业学位）,2012,硕士.
[19]齐维贵,丁宝.控制系统串联校正的两种新算法[J].冶金自动化,1993,02:38-43+37.
[20]田建敏.基于SOA的企业集成系统的研究与实现[D].西安电子科技大学,计算机技术,2012,硕士.
[21]施文俊.产业投资基金投融资模式选择[D].上海社会科学院,产业经济学,2012,硕士.
[22]常小东.止癣方联合复方十一烯酸锌曲安奈德膏治疗混合型足癣临床疗效观察[D].成都中医药大学,中医外科学,2012,硕士.
[23]沈晋源.球磨分级机组多参数计算机控制系统[J].冶金自动化,1988,03:8-12+25.
[24]许筱.河南省小麦全蚀病菌变种类型鉴定及致病力测定[D].河南农业大学,植物病理学,2012,硕士.
[25]张丽君.成都快速公交系统公交站点设计策略研究[D].西南交通大学,建筑设计及其理论,2014,硕士.
[26]高珍珍,佟浩,陈建慧,岳世鸿,白文龙,张校刚,潘燕飞,石明,宋玉翔.聚苯胺共价接枝碳纳米管复合材料的制备及其超电容性能的研究[J].化学学报,2014,11:1175-1181.
[27]陈奇.后ECFA时代海峡两岸金融合作法制研究[D].重庆大学,经济法学,2014,硕士.
[28]陈畅乾.150例多囊卵巢综合征患者的中西医结合治疗观察[D].湖南中医药大学,中医妇科学,2014,硕士.
[29]赖慧.战地旅行家—美国著名战地女记者玛莎·葛尔虹[D].山东大学,新闻学,2013,硕士.
[30]周鹏飞,韩宝明.印度新德里地铁的设计与运营特点[J].城市轨道交通研究,2014,08:136-138+141.
[31]梁婷婷.大学生专业心理求助内隐态度、外显态度与社会支持关系研究[D].内蒙古师范大学,应用心理学,2013,硕士.
[32]王锡淮,李少远,席裕庚.基于自适应模糊聚类的神经网络软测量建模方法[J].控制与决策,2004,08:951-953.
[33]李学彬.钢管混凝土支架强度与巷道承压环强化支护理论研究[D].中国矿业大学(北京),2012.
[34]李文蜜.六面体和三棱柱网格形态对煤矿开采沉陷数值模拟的影响研究[D].中国地质大学（北京）,建筑与土木工程,2013,硕士.
[35]李贵文,吴天福.热态中板温度补偿测宽与自动剪切装置[J].冶金自动化,1992,05:32-34+59.
[36]蔡之华,吕维先,颜雪松.基于关联图的关联规则挖掘算法研究[J].小型微型计算机系统,2002,04:450-452.
[37]吴国峰.河北省高校五人制足球运动开展现状调查研究[D].河北师范大学,体育教学与训练,2013,硕士.
[38]张艳.阳光体育运动背景下吉林大学学生群体活动开展现状与分析[D].吉林大学,体育,2014,硕士.
[39]曹函玉.京津冀农业区典型气态污染物干沉降研究及其生态效应初探[D].甘肃农业大学,水土保持与荒漠化防治,2013,硕士.
[40]屈可敏.基于REST的信息系统云服务平台的设计与实现[D].华南理工大学,计算机应用技术,2014,硕士.
[41]朱丽娜.油田注水水质劣化因素与处理技术研究[D].东北石油大学,油气田化学工程,2013,硕士.
[42]王春华.TiC/TiB_2复合陶瓷材料的制备和性能研究[D].东北大学,材料学,2011,硕士.
[43]张琼方.基于VC++的光时域反射仪设计与开发[D].北京交通大学,2015.
[44]王赞鑫.个体炎症反应、凝血功能状态与冠心病外科治疗预后关系的临床研究[D].天津医科大学,外科学,2014,博士.
[45]贾方方,贺奎,安明喆,王二坡,路振宝.钢纤维活性粉末混凝土与钢筋粘结性能研究[J].建筑技术,2014,12:1094-1096.
[46]王光辉.从富钴铜转炉渣中回收铜、钴的研究[D].东北大学,有色金属冶金,2011,硕士.
[47]王晓.截面温度不均匀分布条件下受约束钢柱抗火性能试验与理论研究[D].山东大学,结构工程,2013,硕士.
[48]李江.汽车故障诊断与修理作业调度系统设计与实现[D].西安电子科技大学,软件工程,2011,硕士.
[49]于欣.上市公司股权激励与盈余管理的实证研究[D].吉林财经大学,会计学,2014,硕士.
[50]陈珠.红鳍东方鲀循环水养殖系统生物滤池内可培养微生物的多样性研究[D].中国科学院研究生院（海洋研究所）,环境工程,2013,硕士.