mTOR活性对小鼠免疫性肝损伤影响及其机制的研究

【摘要】哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mechanistictargetofrapamycin,mTOR)是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是细胞生长和代谢的重要调节因子。mTOR信号途径通过整合体内各种免疫信号和代谢信号,调节天然免疫和适应性免疫反应。髓系抑制性细胞(myeloid-derivedsuppressorcells,MDSCs)是一类异质性细胞群,被定义为在肿瘤、移植或慢性感染宿主体内发挥免疫抑制作用的一种重要的天然调控细胞。然而,mTOR调控是否对MDSCs有影响,仍需进一步探讨。本研究应用刀豆蛋白A诱导建立小鼠免疫性肝损伤(ConA-inducedhepatitis,CIH)模型,并用mTOR抑制剂-雷帕霉素处理。研究发现,雷帕霉素可以降低免疫性肝损伤小鼠死亡率、血清转氨酶活性,使肝脏病理损伤程度减轻。利用流式细胞术检测小鼠肝脏各种免疫细胞的表型及数量变化。结果表明,与对照组相比,雷帕霉素处理后肝脏CD19+B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK1.1+细胞数量显著降低(P<0.05),髓系F4/80+巨噬细胞、CD115+单核细胞和CD11c+树突细胞数量未发生变化；CD11b+Gr1+细胞的绝对细胞数显著增多(P<0.05),并以CD11b+Gr1+Ly6Chigh为表型。说明免疫性肝损伤中,mTOR活性的抑制可促进肝脏CD11b+Gr1+细胞增多。进一步研究结果表明,分离自CIH小鼠肝脏的CD11b+Gr1+细胞与T细胞共培养时,CD11b+Gr1+细胞能够抑制CD4+T细胞增殖,并呈现MDSCs的表型,即PD-L1high、CD206high和CD86low。说明这群增多的细胞为MDSCs,并日在肝损伤中起保护作用。雷帕霉素处理后,募集的MDSCs表现出凋亡增加；同时,调节MDSCs细胞迁移的趋化因子CXCL1和CXCL2的表达呈显著上调(P<0.05),并且这两种趋化因子的受体CXCR2也显著上调(P<0.05)。小鼠经静脉注射抗受体CXCR2的抗体,结果显示,抗受体CXCR2的抗体可以阻断CDllb+Gr1+MDSCs的细胞浸润并导致小鼠死亡增加,肝脏病理损伤加重,血清ALT和AST活性显著升高(P<0.05)。体内外研究结果表明,：mTOR活性下调促进MDSCs向炎症局部迁移,导致肝脏MDSCs增多。在肝脏MDSCs精氨酸酶水平、NO水平和iNOS水平的检测发现,与对照组相比,雷帕霉素处理免疫性肝损伤小鼠的iNOS、NO水平显著增高(P<0.05),而精氨酸酶的水平无显著变化。利用iNOS的抑制剂L-单甲基精氨酸抑制NO的产生并用雷帕霉素处理免疫性肝损伤小鼠,血清ALT活性升高,肝损伤加重。体内外迁移试验中,雷帕霉素处理的肝脏MDSCs的迁移能力下降,提示MDSCs中mTOR活性的下调促进了iNOS的表达和NO的产生。而当iNOS被抑制时,MDSCs的募集能力显著降低(P<0.05),证明雷帕霉素促进MDSCs迁移过程中NO是关键物质。本研究证明了雷帕霉素可以通过NO通路促进MDSCs在肝脏的募集而抵御小鼠的免疫性肝损伤发生,并阐明了与免疫相关的肝损伤疾病中mTOR信号途径对MDSCs募集的负调控作用,为临床治疗免疫性肝损伤相关疾病提供依据。
【作者】张妍；
【导师】汉丽梅；刘光伟；
【作者基本信息】沈阳农业大学，基础兽医学，2014，硕士
【关键词】mTOR；免疫性肝损伤；雷帕霉素；MDSCs；细胞迁移；

【参考文献】
[1]苏善勇.归化异化再思考：后殖民语境下的翻译理论研究[D].广东外语外贸大学,外国语言学及应用语言学,2004,硕士.
[2]张列平.带有限幅的速度调节器的参数选择[J].冶金自动化,1982,03:30-35.
[3]王飞跃.热电偶传感器信号调理与数字采集系统的设计[D].中北大学,测试计量技术与仪器,2013,硕士.
[4]逯志敏.PP2对渥曼青霉素诱导的小鼠空间记忆损伤的保护作用及机制研究[D].华中师范大学,动物学,2014,硕士.
[5]肖建华.论球面波波动方程[J].石油地球物理勘探,2001,02:160-172+262.
[6]泷口宗之.伪满时期日本政府对华鸦片政策演变分析[D].吉林大学,中国近现代史,2014,硕士.
[7]胡陇生.枣实蝇生物学特性与产卵选择性研究[D].新疆农业大学,园林植物与观赏园艺,2012,硕士.
[8]孙小芳.我国中小文化创意企业战略薪酬体系研究[D].北京印刷学院,企业管理,2013,硕士.
[9]曹爱萍.唐代舞蹈陶俑的审美研究[D].景德镇陶瓷学院,美学,2014,硕士.
[10]曾海军.大尺寸触控面板用铜布线薄膜的制备[J].电镀与涂饰,2014,07:296-298.
[11]皮坤.不同养殖模式池塘营养物质动态迁移特征研究[D].华中农业大学,湿地资源与环境,2014,硕士.
[12]薛宗岳.氧化锌—石墨烯复合材料的制备及光响应研究[D].天津大学,2012.
[13]曹慧娟.思想政治教育社会化研究[D].渤海大学,思想政治教育,2013,硕士.
[14]方益.文强案中受贿假画数额认定问题研究[D].兰州大学,刑法（专业学位）,2013,硕士.
[15]宋国兵,高淑萍,蔡新雷,张健康,饶菁,索南加乐.高压直流输电线路继电保护技术综述[J].电力系统自动化,2012,22:123-129.
[16]刘汨波.伊马替尼对K562细胞粘蛋白型O-糖基化的影响[D].苏州大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[17]蔡煜东,姚林声.用人工神经网络建立油田采收率模型[J].石油地球物理勘探,1994,02:166-169+260.
[18]杨芒果,孔庆强,陈成猛,杨永岗,温月芳,王茂章.功能化石墨烯片的表面性能调控[J].材料导报,2012,04:33-35+58.
[19]蔡延光,汤雅连,朱君.农村公交协同车辆路径问题的研究[J].计算机应用研究,2015,:.
[20]于怡.高维数据变量选择的几点研究[D].复旦大学,概率论与数理统计,2013,博士.
[21]李灿飞.基于偏微分方程的医学图像增强与分割方法研究[D].湖南大学,2012.
[22]谷菲菲.人文性视角下初中文言文教学策略研究[D].河北师范大学,学科教学,2014,硕士.
[23]张伟.石墨烯/聚苯胺复合材料的制备及在超级电容器中的应用[D].北京化工大学,2012.
[24]李中国.中西医结合治疗HP阳性慢性胃炎/消化性溃疡（肝胃郁热型）的临床研究[D].云南中医学院,中医内科学（专业学位）,2012,硕士.
[25]马跃辉.新疆经济发展中资源诅咒问题的实证研究[D].新疆财经大学,区域经济学,2013,硕士.
[26]刘欣.PBII制备类金刚石膜及其性能研究[D].哈尔滨工业大学,材料工程,2014,硕士.
[27]周燕国,李永刚,丁海军,陈云敏,凌道盛,石川明,社本康広.砂土液化后再固结体变规律表征与离心模型试验验证[J].岩土工程学报,2014,10:1838-1845.
[28]武二忠.转基因抗虫棉对棉大卷叶螟及其主要天敌的影响[D].扬州大学,农业昆虫与害虫防治,2011,硕士.
[29]李欢欢.杉木构件节点空套螺钉接合性能研究[D].中南林业科技大学,家具与室内设计工程,2013,硕士.
[30]TchisterMorrelEBISSA.氮沉降背景下枯落物对草地生产力的影响[D].东北师范大学,生态学,2012,硕士.
[31]陈红岩.大中型制剂类制药企业的全面预算管理研究——JH企业的全面预算管理研究[D].电子科技大学,2004.
[32]张楚翘.辽代汉人墓葬兼容并包的艺术特征[D].沈阳师范大学,美术学,2014,硕士.
[33]左涛.高级氧化处理焦化废水中氰化物的研究[D].大连海事大学,环境工程,2014,硕士.
[34]邵应兰.廉政风险防控体系建设探究[D].南昌大学,公共管理（专业学位）,2012,硕士.
[35]吴小琴,宗瑞隆,牟豪杰,朱永法.石墨烯负载Pt催化剂的催化氧化发光性能[J].物理化学学报,2010,11:3002-3008.
[36]崔伟.双分裂导线相间间隔棒防舞数值模拟研究[D].重庆大学,力学,2014,硕士.
[37]陈小忠.利用医院信息系统(HIS)开展图书馆信息服务工作的探讨[J].图书馆论坛,2005,04:182-184.
[38]徐幸天.液压脉动水平连铸机的微机控制系统[J].冶金自动化,1987,04:16-19.
[39]方凤美.网络协同开发环境下的软件构件资源服务系统研究与实现[D].华南师范大学,计算机软件与理论,2002,硕士.
[40]吴娴.嵌入式Linux文件系统的设计和实践[D].苏州大学,计算机应用技术,2003,硕士.
[41]雷震.风电机组远程监测系统的设计与实现[D].吉林大学,软件工程,2014,硕士.
[42]魏英莉.农村包围城市、最后夺取全国政权是中国革命的客观规律[D].东北师范大学,马克思主义理论与思想政治教育,2003,硕士.
[43]林德福,沈吉.基于无人战斗机发射平台的末敏子弹药原理分析[J].飞航导弹.2005(07)
[44]胡闯.BP神经网络在无刷直流电机调速系统中的应用[D].华中科技大学,电气工程,2013,硕士.
[45]骆圣明.非饱和粉质粘土抗剪强度特性试验研究及其对边坡稳定性的影响分析[D].浙江工业大学,岩土工程,2012,硕士.
[46]魏学光.基于机器视觉的数控机床自动对刀技术研究[D].北方工业大学,机械制造及其自动化,2014,硕士.
[47]杨永伟.基本逻辑代数的若干专题研究[D].西北大学,基础数学,2014,博士.
[48]孙上鹏,赵会兵,陈德旺,全宏宇,宁滨.基于电接触理论的轨道电路分路电阻计算方法研究[J].铁道学报,2014,03:31-36.
[49]任胜男.合肥市特殊老人养老服务需求调查报告[D].安徽大学,社会工作,2014,硕士.
[50]曲国建.三级医院老年病人营养状况调查[D].青岛大学,外科学,2013,硕士.