梅花鹿黏膜病同源灭活疫苗的制备与免疫效果检测

【摘要】牛病毒性腹泻/黏膜病毒（Bovineviraldiarrheavirus，BVDV）是单链正股RNA病毒，是黄病毒科瘟病毒属的代表病毒，与同属内的猪瘟病毒和羊边界病毒，在血清学上有交叉反应。梅花鹿黏膜病由牛病毒性腹泻/黏膜病病毒引起的一种以发热、黏膜糜烂溃疡、免疫耐受与持续感染、免疫抑制、怀孕母鹿流产、产死胎或畸形胎为主要特征的一种接触性传染病，该病广泛流行于世界各国，严重影响养鹿业健康发展。在。黏膜病在梅花鹿群中呈蔓延扩散的趋势，但针对梅花鹿黏膜病专用疫苗在我国仍尚属空白，很多情况下使用牛源的疫苗进行替代，使用牛源的疫苗进行梅花鹿黏膜病的免疫效果也不尽如人意。同时，已经有报道证明，怀孕期的母畜进行BVDV弱毒疫苗的免疫可能会导致流产或者死胎。综上所述，应该创制一种具有自主知识产权的梅花鹿专用灭活疫苗，使梅花鹿黏膜病免疫预防工作更加科学化。为此，本试验在成功分离到梅花鹿源牛病毒性腹泻病毒的基础之上，使用MDBK细胞对BVDV病毒进行培养并回收。多次回收后，使用超速离心进行浓缩，留存为下一步毒种制备使用。为了确定所收获的病毒，使用了倒置显微镜观察和RT-PCR两种检测方法来进行鉴定，结果显示无误，其中RT-PCR条带大小为326bp，上述病毒液的制备符合兽医生物制品相关规程的要求。应用蚀斑技术对病毒进行了纯化筛选，得到了相对单一、稳定的克隆株，作为毒种进行下一步的制备。为了确保疫苗的安全性，进行了外源病毒的检验。通过实验确定了灭活灭活剂甲醛的总浓度为1.5‰，灭活时间为36h。灭活后与40%氢氧化铝胶混合制备了疫苗，进行了无菌检验。按照我国相关规定，对制备的梅花鹿黏膜病灭活疫苗进行了无菌检验、安全检验、效力检验等，结果均合格。为了检测本疫苗的免疫效果，对本源动物鹿进行免疫，使用间接ELISA方法进行抗体效价水平的检测，检测结果证明本疫苗可以诱使鹿产生比较明显的免疫应答。通过本试验研究表明，制备的梅花鹿黏膜病灭活疫苗质量好、安全性高、实际应用性强，为这一领域的研究打下了基础。
【作者】董航；
【导师】丁壮；
【作者基本信息】吉林大学，兽医，2014，硕士
【关键词】梅花鹿黏膜病；灭活疫苗；制备方法；免疫效果；

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