实时荧光PCR检测真菌性角膜炎常见致病菌种方法的建立

【摘要】实时荧光PCR检测真菌性角膜炎常见致病菌种方法的建立目的：真菌性角膜炎是一种由致病真菌引发的致盲率很高的眼科常见的角膜感染性疾病，在我国，镰刀菌是真菌性角膜炎最常见致病菌，其中又以茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌为著，本研究旨在建立真菌性角膜炎常见致病菌中茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌的实时荧光PCR检测方法。方法：通过检索GenBank真菌的COI基因序列，首次设计茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌的种特异性引物，对模板DNA进行倍比稀释，确定反应的灵敏度；使用青霉、烟曲霉、白色念珠菌等真菌进行实时荧光PCR，观察设计引物的特异性。优化实验反应条件，建立了SYBRGreenⅠ实时荧光PCR对镰刀菌快速检测的方法。结果：所设计引物特异性强、敏感性高，可对茄病镰刀菌、尖孢镰刀菌及串珠镰刀菌的靶DNA进行定量分析，该检测方法的灵敏度达1pg级。引物特异性检测实验结果表明，只有与引物对应的目的菌种DNA发生扩增，产生特异的单峰熔解曲线，其它种属真菌均未发生扩增，表明设计的引物具有良好的种特异性结论：研究中建立的实时荧光PCR方法能特异、灵敏的检测出临床真菌性角膜炎中三种最常见镰刀菌的感染，为临床镰刀菌感染的诊断提供了一种快速、准确的方法。
【作者】董铎；
【导师】郝继龙；
【作者基本信息】吉林大学，临床医学，2014，硕士
【关键词】实时荧光PCR；真菌性角膜炎；镰刀菌；COI基因；

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