自分泌运动因子受体基因对猪前体脂肪细胞分化的影响及其调控通路分析

【摘要】AMFR参与肿瘤发生与转移、新生血管的形成、神经发育、神经突触可塑性、胆固醇的合成、脂类代谢。本研究利用猪前体脂肪细胞，阐明AMFR基因在脂肪细胞分化过程中的作用，探究该基因在猪脂肪沉积的机理，为猪肉质品质的改善提供理论依据。利用胰酶消化组织块的方法成功分离到猪前体脂肪细胞。经胰岛素等诱导剂的诱导，油红O染色以及甘油三酯含量的检测，在猪前体脂肪细胞诱导过程中，脂滴逐渐变多、聚集，预示甘油三酯含量的OD值逐渐上升。利用RT-PCR检测脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα、KLF2的表达量，在分子水平检测脂肪细胞的分化，伴随着猪前体脂肪细胞诱导过程中形态学的变化，脂肪分化标志基因PPARγ、C/EBPα的表达量上升，负调控基因KLF2表达量下降，成功诱导分化了猪前体脂肪细胞。克隆AMFR基因的cDNA，得到其mRNA的序列，探究猪AMFR基因的功能，本研究利用人和小鼠同源序列设计猪AMFR的引物，经过扩增、测序后，得到该基因mRNA2150bp的核苷酸序列，其中CDS区1944bp。猪与小鼠AMFR的CDS区具有87.19%的同源性、猪与人AMFR具有89.19%的同源性。利用RT-PCR检测AMFR、Insig1、Insig2、SREBP1-a、SREBP2在猪前体脂肪细胞的诱导分化过程表达量，与诱导分化前相比，AMFR、Insig1等基因的表达量均发生显著变化，表明这些基因参与了猪前体脂肪的分化。根据扩增到的AMFRCDS区设计siRNA，成功沉默AMFR后，RT-PCR检测到AMFR关联基因Insig1、SREBP1-a、SREBP2、脂肪细胞分化标志基因C/EBPα的表达量相应降低，脂肪细胞分化抑制基因KLF2相应地增加，PPARγ的表达量变化不显著，表明AMFR可以调控Insig1、SREBP1-a、SREBP2、C/EBPα、KLF2。沉默AMFR后，经过经过诱导剂诱导分化至144h，沉默组的脂滴显著比阴性对照组的脂滴小、少，OD值也显著低于阴性对照组，脂肪细胞分化负调控基因KLF2表达量相应地高于阴性对照组，促进脂肪细胞分化标志基因C/EBPα的表达量相应地低于阴性对照组，表明沉默AMFR，影响前体脂肪细胞的分化，减少甘油三酯的合成。因此，AMFR通过SREBP通路基因以及脂肪分化调控基因C/EBPα，脂肪分化负调控基因KLF2，参与猪前体脂肪细胞的分化。研究结果将为研究AMFR在脂肪代谢中的分子机制，以及猪肉质性状的改善提供理论基础。
【作者】朱亚南；
【导师】陈承祯；
【作者基本信息】吉林大学，动物营养与饲料科学，2014，硕士
【关键词】猪前体脂肪细胞；AMFR；siRNA；诱导分化；

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