成纤维细胞生长因子23表达纯化及其多克隆抗体的制备

【摘要】背景：慢性肾脏病（chronickidneydiease，CKD）的全球发病率呈逐年增高的趋势，其防治正面临严峻挑战，早期诊断和预防慢性肾脏病是目前全球急切需要解决的问题。据ISN和IFKF的估计，慢性肾脏病占世界人口的十分一，其中大部分慢性肾脏病患者没得到早期诊断和及时的治疗，结果是:由于肾功能下降，而导致肾功能衰竭，患者生活质量下降，需要透析或肾移植，更重要的是在进入肾衰期之前就过早死于心脑血管疾病。目前临床上仍然缺乏简单﹑能够准确筛查慢性肾脏病的手段或方法。现在临床上以血肌酐，尿素氮和蛋白尿作为监测肾功能的指标，虽然对于慢性肾病和慢性肾衰竭的分期可以起到一定程度的作用,但其检测准确性低、特异性不高,常常需要同时结合血液及B超检查，综合判断才能确诊，而且一旦发现异常多数病程已经达到中晚期。成纤维细胞生长因子23（fibroblastgrowthfactor23,FGF23），作为肾功能早期衰退诊断的一个新型分子标志物，具有充分的临床资料与基础研究的文献支持，且与临床上现有的新的生物标物-肌氨酸酐相比，能更早地检测到病情，无须复杂的修正，仅需单独的测量。因此可作为早期慢性肾病的诊断方法，同时，它可通过检测体内治疗前后血浆水平，监测治疗的有效性。目的：诱导表达纯化具有生物学活性的可溶性重组人成纤维细胞生长因子23（FGF23）并制备FGF23多克隆抗体。方法：根据已构建的SUMO-FGF23菌株，通过亲和层析技术优化FGF23蛋白的分离纯化条件，SDS-PAGE电泳法检测纯化效果。用纯化的FGF23蛋白免疫兔子产生抗血清，得到FGF23蛋白的多克隆抗体，并以慢性肾病病人的血清中天然状态的FGF23蛋白作为阳性对照，用ELISA和Westernblotting检测基因工程制备的FGF23多克隆抗体抗血清的效价及其生物学活性。结果：FGF23蛋白在低温(16℃)诱导19h大部分以可溶形式表达,组氨酸亲和层析法分离纯化了蛋白,并用纯化的蛋白制备了兔抗FGF23多克隆抗体,结果显示制备的抗体特异性高，可进一步在免疫分析中使用。结论:本研究纯化了条带单一的并且具有生物学活性的FGF23蛋白,制备了具有良好特异性的兔抗FGF23多克隆抗体,为进一步研发FGF23试剂盒诊断早期CKD奠定了基础。
【作者】倪培；
【导师】于庭；
【作者基本信息】吉林大学，临床检验诊断学，2014，硕士
【关键词】FGF23蛋白；纯化；多克隆抗体；

【参考文献】
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