连花清瘟胶囊对呼吸道感染相关细菌生物膜的抑制作用研究及其遗传机制初探

【摘要】目的：建立体外细菌生物膜模型，观察连花清瘟胶囊对呼吸道感染相关细菌（金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌）生物膜的抑制作用，进一步研究药物对其中抑制作用最佳的金黄色葡萄球菌生物膜相关基因——纤连蛋白结合蛋白基因的表达影响，探讨连花清瘟的抗菌作用机制及其抑菌遗传学机制。方法：以微孔板法建立呼吸道感染相关的五种重要细菌的生物膜模型，利用酶标仪分别测量在连花清瘟胶囊提物作用下，生物膜生物总量及膜内活菌数的改变。以激光共聚焦显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜分别观察连花清瘟胶囊提物对金黄色葡萄球菌生物膜成分、表面形态、微观结构等的作用。提取生物膜状态下各药物组金黄色葡萄球菌总RNA，以金黄色葡萄球菌总RNA为模板合成cDNA并进行聚合酶链反应，利用琼脂糖凝胶电泳方法将扩增出的产物电泳分离，对比分析药物对纤连蛋白结合蛋白基因的表达影响。结果：微孔板法示，连花清瘟胶囊对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜均有抑制作用，可以同时降低生物膜形成期及成熟期生物总量及活菌数；连花清瘟胶囊提物对大肠杆菌及肺炎克雷伯菌生物膜形成期有明显抑制作用，对成熟期生物膜抑制作用微弱；在铜绿假单胞菌生物膜，连花清瘟各提物对其形成期和成熟期均无明显抑制作用。激光共聚焦显微镜观察到，与青霉素不同的是，连花清瘟胶囊可以减少两种金黄色葡萄球菌的生物膜膜厚度和细菌生物膜中活菌数量及死细菌数量。扫描电子显微镜观察到，连花清瘟胶囊可以干扰金黄色葡萄球菌生物膜中细菌的排列，并且影响生物膜胞外基质的形态。透射电子显微镜观察到连花清瘟胶囊中酯提物质与细胞膜亲和性好，易与膜相结合，破坏其完整性。对于金黄色葡萄球菌的纤连蛋白结合蛋白基因，连花清瘟胶囊可以使其表达量下降，从而达到抑制金黄色葡萄球菌生物膜的作用，其中，连花清瘟胶囊水提部分起主要作用。结论：连花清瘟胶囊对呼吸道感染相关的金黄色葡萄球菌生物膜、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜、大肠杆菌生物膜、肺炎克雷伯菌生物膜均有抑制作用，其中对金黄色葡萄球菌生物膜抑制效果最佳。金黄色葡萄球菌生物膜形成相关基因——纤连蛋白结合蛋白基因在连花清瘟胶囊的作用下表达量下降。
【作者】王艺竹；
【导师】刘冰；
【作者基本信息】吉林大学，遗传学，2014，硕士
【关键词】连花清瘟胶囊；细菌生物膜；金黄色葡萄球菌；纤连蛋白结合蛋白基因；

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