负性共刺激分子Tim3在肿瘤浸润T淋巴细胞表达及调节的初步分析

【摘要】目的在分析非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血T细胞和组织新鲜标本（癌，癌旁组织）浸润淋巴细胞（TILs）Tim3表达差异的基础上，通过体内外实验探讨T-bet/Eomes是否参与了对Tim3表达的调节，并进一步初步分析肿瘤微环境中Tim3表达的可能影响因素，为深入研究Tim3作为肿瘤免疫治疗的新靶点的可行性提供实验依据。方法（1）收集手术切除且诊断明确的非小细胞肺癌（NSCLC）患者癌组织及癌旁组织，同时采集同一患者外周血，经免疫荧光标记和流式细胞仪分析检测Tim3在在外周血T淋巴细胞和肿瘤浸润T淋巴细胞的表达；（2）采用C57BL/6WT和T-bet-/-/Eomes-/-DKO小鼠，富集小鼠脾脏T细胞，体外经Th1型分化诱导；同时构建Lewis肺癌模型，分离小鼠脾脏T细胞和肿瘤浸润淋巴细胞，免疫荧光标记和流式细胞术检测Tim3的表达情况，分析T-bet和Eomes是否参与了对Tim3表达的调节；（3）收集人非小细胞肺癌标本（癌组织和癌旁组织），抽提癌组织和癌旁组织RNA，经过逆转录、Real-TimePCR检测IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17、TGF-β、TNF、PD-L1、galectin-9、FoxP3、GATA3、T-bet、EomesmRNA的相对表达量，初步筛选Tim3表达调节的可能影响分子。结果1.与癌旁正常组织浸润淋巴细胞相比，非小细胞肺癌患者肿瘤组织浸润淋巴细胞（TILs）表面Tim3的表达明显上调；非小细胞肺癌患者外周血T细胞几乎不表达Tim3；2.负性共刺激分子Tim3在非小细胞肺癌肿瘤组织浸润淋巴细胞呈现中度表达和低表达，部分非小细胞肺癌患者肿瘤组织Tim3低表达；3.小鼠脾脏T淋巴细胞体外经Th1分化条件培养，T细胞，尤其是CD8+T细胞表面Tim3的表达在T-bet/Eomes双敲基因（DKO）小鼠受到明显抑制。4.在小鼠lewis肺癌肿瘤模型中，脾脏淋巴细胞表面Tim3表达也受到T-bet/Eomes的调节，而荷瘤小鼠肿瘤浸润淋巴细胞表面Tim3的表达并不受T-bet/Eomes的调节；5.肿瘤组织浸润淋巴细胞表面Tim3中度表达组与Tim3低表达组相比，EomesmRNA表达呈现显著升高，TNF-，IL-1β，IL-10三个因子表达显著降低（p<0.01），而TGF-β、IL-6、T-bet和Gata3等的表达无显著差异。6.与癌旁组织相比，癌组织中Foxp3，IL-17以及Tim3配体Galectin-9mRNA表达显著升高，而IL-1β则显著降低（p<0.01）。结论与癌旁正常组织浸润淋巴细胞相比，非小细胞肺癌患者肿瘤组织浸润淋巴细胞（TILs）表面Tim3的表达明显上调；非小细胞肺癌患者外周血T细胞几乎不表达Tim3；部分非小细胞肺癌患者肿瘤组织Tim3低表达。T-bet/Eomes参与了Tim3在外周免疫器官表达的调节，但Tim3在肿瘤浸润T淋巴细胞的表达可能和肿瘤微环境的诱导有关，Foxp3，IL-17以及Tim3配体Galectin-9mRNA在肿瘤组织的表达较癌旁组织显著升高，肿瘤组织Tim3中表达组中细胞呈现高耗竭状态，TNF-，IL-1β，IL-10等炎性因子表达显著降低。
【作者】石远峰；
【导师】朱一蓓；
【作者基本信息】苏州大学，免疫学，2014，硕士
【关键词】T细胞免疫球蛋白黏蛋白3；T-bet；Eomes；肿瘤微环境；白细胞介素1β；白细胞介素6；白细胞介素10；白细胞介素17；转化生长因子；肿瘤坏死因子；

【参考文献】
[1]盛鹏飞.硒蛋白W与低硒致鸡脑损伤的相关性研究[D].东北农业大学,临床兽医学,2014,博士.
[2]陈新伟,刘景泰,林森,石涛,陈阔,魏青.大型实景地理模型3D喷绘机器人及其喷绘方法优化[J].自动化学报,2012,01:23-30.
[3]吴春丽.命题演讲的主位和主位推进模式的语篇功能研究[D].吉林大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[4]肖灵通.基于Davinci的便携式热成像检测终端设计与实现[D].南京航空航天大学,测试计量技术及仪器,2014,硕士.
[5]吴庆超.A Cat Based Study on the C-E Translation of Architectural Papers in View of Metalinguistic Function[D].西安外国语大学,MTI翻译,2014,硕士.
[6]蔡欢.日语接续词的研究[D].华中科技大学,日语语言文学,2013,硕士.
[7]王建梅.基于电子政务环境下的政府信息公开[D].山东大学,档案学,2013,硕士.
[8]杨人真.例谈思想政治课教学中的案例选择——以“人的认识从何而来”的教学为例[J].新课程(上),2014,05:66-67.
[9]江楚池.《恋爱中的女人》中的创伤[D].广东外语外贸大学,英语语言文学,2013,硕士.
[10]赵磊.脉冲—相位式激光测距系统关键技术研究[D].西安工业大学,通信与信息系统,2014,硕士.
[11]吴雅苹,康俊勇.单双层石墨烯的制备及电导特性调控[J].厦门大学学报(自然科学版),2014,05:682-688.
[12]薛天兵.大型桥梁灾害性天气应急资源存储方式选择和应急调配研究[D].上海交通大学,交通运输工程（专业学位）,2013,硕士.
[13]姚肖刚.历史城镇居民在文化旅游经营中的空间让渡[D].中央美术学院,设计艺术学,2013,硕士.
[14]王辉.压电柔性臂冲击振动的瞬态响应及其抑制研究[D].华东交通大学,机械电子工程,2013,硕士.
[15]印德俊.不锈钢中微量锑的光度法测定[J].四川冶金.1989(04)
[16]王瑞明.文本阅读中信息的协调性整合研究[D].华南师范大学,2006.
[17]刘建江.世界金融一体化及其对中国金融业的影响[D].湘潭大学,产业经济学,2001,硕士.
[18]杜月辰.毫火针配合温和灸治疗腰痛的临床研究[D].北京中医药大学,中医学,2014,硕士.
[19]刘景秋.入世后我国民营企业治理模式创新研究[D].湖南大学,政治经济学,2003,硕士.
[20]廖添文.环保型高强度草类纤维板的研究[D].湖北工业大学,制浆造纸工程,2013,硕士.
[21]龚晓燕,江平宇.基于多元技术的微型泵综合优化设计[J].计算机集成制造系统,2005,09:1208-1211+1222.
[22]李勤.中铁一局集团公司绿色营销策略研究[D].西安理工大学,工商管理,2003,硕士.
[23]金涛.小鼠肝药酶P450昼夜节律变化及性别差异[D].遵义医学院,药理学,2013,硕士.
[24]王燕.锂电负极石墨烯基复合材料的制备及表征[D].陕西师范大学,2012.
[25]潘月礼.功能性银、钌羧酸配合物的合成及性质研究[D].安徽大学,无机化学,2004,硕士.
[26]官玉洁.渭南市城市空间扩展的土地利用效率研究[D].西安建筑科技大学,城市规划与设计,2013,硕士.
[27].《浙江大学学报(医学版)》稿约[J].浙江大学学报(医学版),2014,01:6.
[28]孙涛.奶牛源隐孢子虫的鉴定及隐孢子虫囊壁蛋白基因的克隆[D].安徽农业大学,预防兽医学,2012,硕士.
[29]吴兴文.多基复合管的结构分析[D].武汉理工大学,固体力学,2013,硕士.
[30]韩敏,穆大芸.基于贝叶斯回归的多核回声状态网络研究[J].控制与决策,2010,04:531-534+541.
[31]卢珊.地方政府融资平台公司的债务及其风险化解[D].西南政法大学,民商法（专业学位）,2012,硕士.
[32]吴雪雪.具有动态种群的人工植物算法[D].太原科技大学,系统工程,2014,硕士.
[33]冯凌.图形背景理论视角下仿拟修辞格的翻译标准探究—《红楼梦》三个英译全译本的对比研究[D].西南交通大学,外国语言学及应用语言学,2013,硕士.
[34]程娜.以消费体验为前提的商业综合体内部动线空间设计探讨[D].湖南大学,建筑设计及其理论,2012,硕士.
[35]余立强.Linux系统的文件共享服务解决方案[J].电脑学习.2004(05)
[36]陈久军.基于粗集方法的故障规则自动获取系统的研究与设计[D].浙江工业大学,2003.
[37]刘娟妮.知识产权司法鉴定人法律问题研究[D].中国政法大学,知识产权法学,2014,硕士.
[38]周昱.基于SIMPACK和ANSYS的铁路车桥耦合振动仿真分析[D].西南交通大学,桥梁与隧道工程,2013,硕士.
[39]邓成明.构建民事再审之诉论[D].华东政法学院,法律,2002,硕士.
[40]黄小燕,付克昌,文展,周光霞.基于光谱空间结合的非负稀疏保持嵌入的谱聚类[J].计算机应用研究,2015,7:.
[41]李凤.石墨尾矿中回收石墨和绢云母的选矿工艺研究[D].北京有色金属研究总院,矿物加工工程,2014,硕士.
[42]梁先庆.石墨烯能带结构的紧束缚近似计算[J].广西物理,2011,01:7-10.
[43]蒋小娟.RGO/Cu复合材料的PAS烧结制备及其性能研究[D].武汉理工大学,2014.
[44]葛东良.贪污贿赂犯罪侦查中线人制度构建[D].安徽大学,法律,2012,硕士.
[45]周文莉.“智能”电子邮件系统设计与实现[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[46]刘志刚.试论“文革”前十年文化建设的历史经验[D].湖南师范大学,中共党史,2004,硕士.
[47]于扬.口译过程实验报告：对原语的推理与预期判断[D].内蒙古大学,英语口译,2013,硕士.
[48]张淑英.我国上市公司利润质量分析与对策研究[D].西南农业大学,会计学,2004,硕士.
[49]陈路.重读费尔德曼对普兰丁格的知识论辩护方案的批评[D].复旦大学,外国哲学,2012,硕士.
[50]张志乔.铁路交通灾害的致灾风险与预警管理系统研究[D].武汉理工大学,交通运输工程,2003,硕士.