非小细胞肺癌患者的T淋巴细胞亚群分析及相关因子的表达研究

【摘要】目的通过分析非小细胞肺癌（Non-small-cellcarcinomaNSCLC）患者外周血T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-L1和PD-1的表达，Th1和Th2细胞水平及辅助T淋巴细胞相关因子IL-12、IFN-γ和IL-10的表达，并检测肿瘤相关调控基因Bcl-2、NF-κB和TNF-αmRNA的表达水平，研究NSCLC患者术前术后T淋巴细胞亚群的变化及相关调控基因的作用机制，为临床上对NSCLC疾病的预防、诊断及治疗提供参考依据。方法针对NSCLC患者60名、肺部良性肿瘤患者40名及50名正常对照组分别获得血样。第一部分，其中一份血样EDTA抗凝处理采用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群的含量和百分比以及Th1和Th2细胞水平，并且用血细胞分析仪检测其淋巴细胞绝对值。第二部分，其中第二份血样离心取血清采用ELISA方法检测辅助性T细胞因子IL-12、IFN-γ和IL-10的表达，以及前面的EDTA抗凝血采用流式细胞术检测T淋巴细胞表面CD28、CTLA-4、PD-L1和PD-1的表达。第三部分，其中第三份血样采用淋巴细胞分离液分离淋巴细胞，并提取总RNA采用Real-timePCR技术检测肿瘤相关调控基因Bcl-2、NF-κB和TNF-αmRNA的表达水平。结果第一部分，正常对照组CD3+T细胞百分含量总体高于良性和NSCLC组，其中良性术后显著低于术前和正常对照组(P＜0.01)，NSCLC术前和术后1-3天显著低于正常对照组(P＜0.01)，NSCLC术后4-7天显著高于良性术后(P＜0.01)；正常对照组CD4+T细胞百分含量稍低于良性组，但高于NSCLC组，其中NSCLC术前术后均显著低于正常对照组和良性术前组(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天显著低于良性术后(P＜0.01)；正常对照组CD8+T细胞百分含量要低于良性和NSCLC组，其中NSCLC术前和术后1-3天均显著高于正常对照组和良性组(P＜0.05)(P＜0.01)；正常对照组CD4+/CD8+比值高于良性组和NSCLC组，其中NSCLC术前和术后1-3天均显著低于正常对照组和良性组(P＜0.01)(P＜0.05)。正常对照组CD3+T细胞绝对值高于良性和NSCLC组，其中良性术后显著低于术前和正常对照组(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天显著低于正常对照组、良性术前和NSCLC术前组(P＜0.01)，NSCLC术后4-7天显著低于正常对照组(P＜0.05)；正常对照组CD4+T细胞绝对值高于良性和NSCLC组，其中正常对照组和良性术前组均显著高于良性术后和NSCLC术前术后组(P＜0.01)；正常对照组CD8+T细胞绝对值低于良性和NSCLC术前组，而高于术后组，其中NSCLC术前显著高于正常对照组和良性术后组(P＜0.05)，术后1-3天显著低于正常对照组、良性术前和NSCLC术前组(P＜0.01)，NSCLC术后4-7天分别显著低于术前而高于术后1-3天组(P＜0.05)。正常对照组Th1细胞含量低于良性术前而高于其他组，其中良性术前显著高于正常对照组(P＜0.01)，良性术后显著低于术前(P＜0.01)，NSCLC术前和术后均显著低于正常对照组和良性术前组(P＜0.01)；正常对照组Th2细胞含量高于良性术前和术后而低于NSCLC术前和术后组，其中NSCLC术前显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P＜0.05)(P＜0.01)，NSCLC术后组均显著高于良性术后组(P＜0.01)；正常对照组Th1/Th2比值低于良性术前而高于NSCLC术前和术后组，其中正常对照组显著低于良性术前而显著高于NSCLC术前(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天显著低于良性术前和术后组(P＜0.01)。第二部分，正常对照组CD4+CD28+T细胞百分含量略低于良性术前组，但高于其他组，其中NSCLC术前和术后1-3天均显著低于正常对照组和良性术前(P＜0.01)；正常对照组CD8+CD28+T细胞百分含量高于其他各组，其中正常对照组显著高于NSCLC术前和术后组(P＜0.01)；正常对照组CD4+CTLA-4+T细胞百分含量低于其他各组，其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P＜0.05)；正常对照组CD8+CTLA-4+T细胞百分含量低于其他各组，其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P＜0.01)，NSCLC术后4-7天显著低于术前(P＜0.01)；正常对照组CD4+PD-L1+T细胞百分含量高于良性术后组而低于其他各组，其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P＜0.05)；正常对照组CD8+PD-L1+T细胞百分含量均低于其他各组，其中良性术前、NSCLC术前和术后4-7天均显著高于正常对照组(P＜0.05)(P＜0.01)，NSCLC术前显著高于良性术前(P＜0.01)。正常对照组CD4+PD-1+T细胞百分含量高于NSCLC术后4-7天而低于其他各组，其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P＜0.05)(P＜0.01)，NSCLC术后4-7天显著低于NSCLC术前和术后1-3天(P＜0.01)(P＜0.05)；正常对照组CD8+PD-1+T细胞百分含量均低于其他各组，其中NSCLC术前和术后1-3天均显著高于正常对照组(P＜0.01)(P＜0.05)。正常对照组CD4+CD28+T细胞绝对值低于良性术前而高于其他组，其中良性术后和NSCLC术前术后均显著低于正常对照组(P＜0.01)(P＜0.05)，NSCLC术后1-3天显著低于术前(P＜0.05)，NSCLC术后4-7天显著高于术后1-3天(P＜0.05)；正常对照组CD8+CD28+T细胞绝对值高于其他组，其中对照组均显著高于NSCLC术前和术后组(P＜0.05)(P＜0.01)；正常对照组CD4+CTLA-4+T细胞绝对值低于其他组，其中NSCLC术前显著高于正常对照组(P＜0.01)；正常对照组CD8+CTLA-4+T细胞绝对值显著低于其他组，其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P＜0.01)；正常对照组CD4+PD-L1+T细胞绝对值显著低于其他组，其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P＜0.01)；正常对照组CD8+PD-L1+T细胞绝对值低于其他组，其中NSCLC术前和术后1-3天显著高于正常对照组(P＜0.01)；正常对照组CD4+PD-1+T细胞绝对值低于其他组，其中NSCLC术前和术后显著高于正常对照组(P＜0.01)(P＜0.05)；正常对照组CD8+PD-1+T细胞绝对值均低于其他组，其中NSCLC术前和术后组显著高于正常对照组(P＜0.01)，NSCLC术前显著高于良性术后(P＜0.01)。IL-12ELISA检测标准曲线趋势良好。正常对照组IL-12低于良性术前术后组而高于其他组，其中良性术前显著高于正常对照组(P＜0.05)，NSCLC术前和术后组均显著低于正常对照组、良性术前和术后组(P＜0.05)(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天显著低于术前(P＜0.05)，NSCLC术后4-7天显著高于术后1-3天(P＜0.05)。IFN-γELISA检测标准曲线趋势良好。正常对照组IFN-γ高于良性术后组而低于其他组，其中NSCLC术前和术后4-7天组均显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P＜0.05)，NSCLC术后1-3天显著低于术前(P＜0.05)。IL-10ELISA检测标准曲线趋势良好。正常对照组IL-10高于良性术前术后组而低于其他组，其中良性术前显著低于正常对照组(P＜0.05)，NSCLC术前和术后4-7天组均显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P＜0.05)(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天显著高于良性术前术后和NSCLC术前组(P＜0.05)。第三部分，Bcl-2基因的扩增曲线和熔解曲线良好，扩增效率高，特异性好。正常对照组Bcl-2基因表达低于良性和NSCLC术前术后组，其中正常对照组显著低于良性术前术后和NSCLC术前术后组(P＜0.01)，NSCLC术前显著高于良性术前和术后组(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天和4-7天均显著低于NSCLC术前组(P＜0.01)。NF-κB基因的扩增曲线和熔解曲线良好，扩增效率高，特异性好。正常对照组NF-κB基因表达低于良性和NSCLC术前术后组，其中正常对照组显著低于良性术前术后和NSCLC术前术后组(P＜0.01)，NSCLC术前显著高于良性术前和术后组(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天和4-7天均显著低于NSCLC术前组(P＜0.01)。TNF-α基因的扩增曲线和熔解曲线良好，扩增效率高，特异性好。正常对照组TNF-α基因表达低于良性和NSCLC术前术后组，其中正常对照组显著低于NSCLC术前术后组(P＜0.01)，NSCLC术前显著高于正常对照组、良性术前和术后组(P＜0.01)，NSCLC术后1-3天显著低于NSCLC术前组(P＜0.01)。NSCLC术后4-7天显著高于正常对照组、良性术前术后组(P＜0.01)。结论1.NSCLC患者T淋巴细胞相关免疫系统紊乱，其术后有趋于改善的效果，CD3+T细胞、CD4+T细胞较正常组含量及百分比均下降，CD8+T细胞较正常组含量及百分比上升，CD4+/CD8+比值在NSCLC患者中显著下降。2.NSCLC患者免疫力下降，CD8+CD28+T细胞的数量显著下降，杀伤性T细胞减少。CTLA-4、PD-L1及PD-1等相关共刺激分子在患者体内均有不同程度上调。3.NSCLC患者体内Th1与Th2辅助性T淋巴细胞比例失衡，良性组向Th1漂移，肺癌组向Th2漂移。4.NSCLC患者体内能够上调免疫调节因子监控癌细胞，尽管癌细胞有免疫逃逸机制，IFN-γ和IL-10均上调而IL-12下调。5.NSCLC患者体内免疫监控系统与癌细胞博弈，TNF-α基因高表达，而癌细胞影响体内淋巴细胞相关凋亡基因异常表达，抗凋亡基因Bcl-2基因高表达，从而有利于癌细胞在体内的生存，同时体内和转录因子NF-κB基因处于高表达状态。
【作者】钱忠萍；
【导师】顾宗江；
【作者基本信息】苏州大学，免疫学，2014，硕士
【关键词】非小细胞肺癌；T淋巴细胞亚群；免疫系统紊乱；免疫调节因子；基因异常表达；

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